Cx43基因敲除胎鼠心脏近端流出道隔心肌化过程中的关键基因

目的研究Cx43基因纯合敲除(Cx43-/-)小鼠胚胎心脏近端流出道组织中基因表达谱的改变,筛选可能导致Cx43-/-小鼠流出道梗阻的关键基因。方法以胎龄(embryonic day,ED)14.5的Cx43-/-和野生型(Cx43+/+)鼠胚心脏近端流出道部分为研究对象,分别提取总RNA,逆转录成cDNA,并在体外转录为cRNA,同时进行生物素标记及片段化,再与Affymetrix-430 2.0基因芯片进行杂交。杂交信号经扫描后,应用相关生物信息软件分析基因表达情况。结果与Cx43+/+组相比,Cx43-/-组中表达上调2倍以上的基因共有143个,表达下调2倍以上的基因有235个。其中表达差异的基因参与转录调控、细胞周期、细胞黏附、细胞活动和细胞骨架的信号通路等主要生理过程。进一步筛查表达差异1.5倍以上的基因发现,与圆锥动脉干畸形相关的TGFβ/BMP信号通路上的多个基因以及Ssr1、Ptk2、Bmp6等基因在Cx43-/-组有明显变化。对这些基因进行荧光定量PCR验证,结果与基因芯片一致(P<0.05)。结论利用基因芯片技术初步筛选出与Cx43-/-鼠胚心脏近端流出道发育有关的多个基因,并经荧光定量PCR验证。其中TGFβ/BMP信号通路上的多个基因以及Ssr1、Ptk2、Bmp6等基因可能与Cx43-/-小鼠流出道梗阻的发生有关。

合并内脏异位的先心病患者术后死亡率和呼吸道并发症的回顾性研究

目的：临床上，合并有内脏异位的先心病患者有着较高的术后的死亡率和并发症发生率。近年来的研究揭示了内脏异位、先心病和原发性纤毛不动症之间的关系。以合并先心病的内脏异位患者为研究对象，将不合并内脏异位的先心病患儿作为对照组，探究内脏异位患者的术后死亡率和呼吸道并发症发生率。

纤毛功能障碍对合并内脏异位的先心病患者术后呼吸道并发症的影响

目的：合并内脏异位的先心病患者具有较高的术后死亡率和呼吸道并发症。鉴于气道黏液清除机制和左右体轴发育模式都需要动力纤毛的功能，因此，我们想通过这项前瞻性研究来探索合并内脏异位的先心病患者是否存在纤毛功能障碍及其对呼吸道并发症的影响。

先天性心脏病产前产后诊治一体化管理初步经验

目的探索先天性心脏病(简称先心病)产前及产后诊断治疗一体化管理初步经验。方法本研究为前瞻性临床队列研究,纳入2018年1月至2019年12月在孕早期建卡并在孕早中晚期规律产检、分娩或终止妊娠及进行产后新生儿先心病筛查的孕妇作为研究对象,共计70805例。对产前诊断胎儿先心病的孕妇提供多学科咨询,并用双指标法对全组分娩新生儿进行产后先心病筛查,对危重先心病在新生儿期进行治疗。结果70805例建卡孕妇中,新发现心脏筛查阳性早、中、晚孕期分别为41例(41/70805)、729例(729/70433)和22例(22/70023),引产318例(318/792)。双指标法先心病筛查率99.98%(69996/70023),筛查阳性率2.1%(1470/70023)。其中1396例进行了超声心动图检查评估。共220人次进行围产期先心病产前咨询,进行咨询后未引产人数为164人次,保留率为74.5%,同期未咨询者保留率为54.2%,差异有统计学意义(χ^(2)=27.38,P<0.001)。宫内转运先心病胎儿孕妇13例,出生后新生儿转运37例,无一例转运中发生死亡。13例宫内转运危重患者均接受急诊/亚急诊手术治疗。体重2.3~3.6 kg,手术年龄16 h至4天,手术方式:大动脉调转术4例,肺静脉异位引流纠治术3例,主动脉弓重建术1例,肺动脉瓣经皮穿刺球囊扩张术5例。37例产后转运的新生儿中,25例进行了亚急诊手术治疗,包括13例外科主动脉缩窄纠治术,9例主动脉缩窄球囊扩张术,3例肺动脉瓣狭窄球囊扩张术。25例亚急诊手术患者手术年龄7~14 d,全组无手术死亡病例,住院14~32 d,无严重手术并发症。结论探索符合中国国情的先心病围产期一体化管理策略,标准化先心病产前诊断筛查流程,提高围产期先心病的产前产后诊断一致性,可以进一步降低严重出生缺陷的发生率,切实改善危重复杂先心病的手术预后。

Bmpr2在Cx43基因敲除胎鼠心脏近端流出道隔心肌化过程中的表达

目的探讨心脏近端流出道隔心肌化的分子机制及其对胎鼠心脏圆锥动脉干畸形（CTD）的影响。方法以胎龄11．5～16．5d的连接蛋白43（Cx43）基因敲除（Cx43KO）纯合型（Cx43^-/-）、杂合型（Cx43^-/-）和野生型（Cx43^＋/＋）胎鼠胚胎作为研究对象，采用PCR方法鉴定其基因型，免疫组织化学法测定骨形成蛋白Ⅱ型受体（Bmpr2）和α横纹肌肌动蛋白（α-SCA）的表达。结果Cx43KO鼠胚心脏近端流出道隔心肌化细胞明显减少，尤其以胎龄13．5和14．5d的Cx43^-/-为著。胎龄11．5～13．5d，Cx43^＋/＋胎鼠心脏的心房、心外膜均有Bmpr2表达，心室肌也有微弱的表达；Cx43^＋/-和Cx43^-/-胎鼠心脏仅心房和心外膜区有Bmpr2的微弱表达。胎龄14．5—16．5d，Cx43^＋/＋胎鼠心脏的心房、心外膜、心内膜、小梁、心室肌及流出道隔已心肌化区域均有Bmpr2表达，流出道隔未心肌化区域Bmpr2未见表达，与仅-SCA表达一致；胎龄14．5d的Cx43^＋/-和Cx43^-/-胎鼠心脏的心房、心外膜、心内膜、小梁均有Bmpr2表达，而心室肌、流出道膈未见Bmpr2表达；胎龄15．5与16．5d的Cx43^＋/-和Cx43^-/-胎鼠心脏的心房、心外膜、心内膜、小梁、心室肌及流出道隔已心肌化区域均有Bmpr2表达，而且Bmpr2在流出道膈未心肌化区域部分表达。结论Cx43KO胎鼠心脏近端流出道隔存在明显心肌化延迟。Bmpr2很可能涉及心外膜和心肌细胞相互作用的分子机制，参与心肌细胞的成熟过程。

大动脉调转术治疗Taussig-Bing畸形

目的 总结大动脉调转术治疗Taussig-Bing畸形的经验及远期结果。方法 2001年1月至2015年12月，复旦大学附属儿科医院心血管中心行大动脉调转术治疗57例Taussig-Bing畸形患儿，中位年龄63（37.5-88.5）天，中位体质量4.1（3.4-5.0）kg。合并主动脉弓病变29例（50.9%），冠状动脉异常走行23例（40.3%）。根据是否合并主动脉弓病变分为A组29例，合并主动脉弓病变；B组28例，单纯Taussig-Bing畸形。根据手术时间段，2001－2008年27例（组1），2009－2015年30例（组2）。结果 住院死亡7例，占12.3%（7/57），A组4例（13.8%，4/29），B组3例（10.7，4/28），P〉0.05；组1死亡6例（22.2%，6/27），组2死亡1例（3.3%，1/30），P〈0.05。50例患儿随访（6.2±3.5）年，随访期间3例陆续失访，远期无死亡，1年、5年生存率分别为87%、87%，10例再次手术。单因素和多因素分析发现主肺动脉瓣环比值为再次手术危险因素（A组P＝0.02，B组P＝0.04），1年、2年、5年免于再手术分别为95.6%、86.6%、77.2%。结论 大动脉调转术是治疗Taussig-Bing畸形的主要术式，一期治疗Taussig-Bing畸形合并主动脉弓病变不增加手术死亡，术前主肺动脉瓣环比值〈0.5增加再手术风险。

儿外科住院医师规范化培训手术教学和临床技能操作培训探索

儿外科手术教学和技能操作培训是儿外科住院医师规范化培训的重要内容。由于儿外科手术操作存在自身的特点和难点,如何遵从儿外科临床操作和手术技能学习规律,从而制定合理的临床技能操作和手术学习目标并且有效的完成非常重要。因此,本文探讨如何建立一套适应儿外科住院医师规范化培训要求的手术教学和技能培训体系。方法 我院儿外科教研室对儿外科住院医师进行分层次、分阶段、递进式的培训;在培训过程中开展各种适用于儿外科临床教学特点的模块化课程,在课程中重视并增加仿真模拟教学内容,每个课程均对住院医师进行量化考核。在临床手术带教培训中,有针对性的开展手术教学工作;外科教研室也高度重视培训过程中临床指导医师的重要作用,建立核心教学团队,对教学团队的医师进行定期培训和考核。结果 通过上述的方法,逐步摸索出了一套适应儿外科住院医师手术教学和技能培训的方法,我院住院医师均顺利通过上海市住培临床技能操作考核,同时在上海市举办的临床技能比赛中获得优良成绩。结论 我们认为应采用具有儿外科手术培训特色的模块化,分层的培训方法;并在培训过程中采用多种灵活、适用于儿外科外科临床教学特点的模式,同时重视指导医师的重要作用。通过以上的方法能取得良好的教学效果。

鼻窦一氧化氮检测对原发性纤毛运动障碍患儿的诊断价值

目的探究鼻窦一氧化氮(nNO)检测对原发性纤毛运动障碍(PCD)患儿的诊断价值。方法回顾性病例总结,纳入2018年3月至2022年9月于复旦大学附属儿科医院呼吸科就诊的40例PCD患儿为PCD组,纳入75例症状与PCD相似[内脏异位、内脏反位、囊性纤维化(CF)、支气管扩张、慢性化脓性肺病、哮喘]的患儿为PCD症状相似组。纳入2022年12月至2023年1月于复旦大学附属儿科医院儿童保健科或泌尿外科就诊的55例患儿为nNO正常对照组。对入组患儿进行nNO检测,总结性别、年龄及nNO数据等资料,组间比较采用Mann-WhitneyU检验或χ2检验,根据nNO数据绘制受试者工作特征曲线,计算曲线下面积,根据约登指数最大时确定nNO最佳诊断阈值。结果PCD组40例、PCD症状相似组75例(内脏异位或反位23例、CF 8例、慢性化脓性肺病或支气管扩张26例、哮喘18例)、nNO正常对照组55例,就诊年龄分别为9.7(6.7,13.4)、9.3(7.0,13.0)、9.9(7.3,13.0)岁。PCD组nNO水平均低于PCD症状相似组及nNO正常组[12(9,19)比182(121,222)、209(165,261)nl/min,U=143.00、2.00,均P<0.001]。PCD症状相似组中内脏异位或反位、CF、慢性化脓性肺病或支气管扩张、哮喘的患儿nNO水平均高于PCD组[185(123,218)、97(52,132)、154(31,202)、266(202,414)比12(9,19)nl/min,U=1.00、9.00、133.00、0,均P<0.001]。PCD组与非PCD患儿组(PCD症状相似组和nNO正常对照组)鉴别时的诊断阈值为84 nl/min,灵敏度为0.98,特异度为0.92,曲线下面积0.97(95%CI 0.95~1.00,P<0.001)。结论nNO检测能有效区分PCD患儿,并推荐84 nl/min作为PCD患儿的诊断阈值。

生物修饰ePTFE促进内皮化的研究

目的在膨体聚四氟乙烯表面构建肝素/胶原蛋白-REDV选择性活性界面，体外观察ePTFE表面早期内皮细胞（ECs）粘附情况和后期内皮细胞增殖及内皮化程度。方法通过层层自组装技术，在0.1 mm ePTFE膜片表面制备5层肝素和胶原蛋白复合涂层[（HEP/COL）5]，随后接枝特异性吸附内皮细胞和内皮祖细胞的REDV多肽和无活性的REVD多肽。将未修饰的ePTFE（ePTFE组）、（HEP/COL）5修饰的ePTFE[（HEP/COL）5组]、（HEP/COL）5-REDV修饰的ePTFE（REDV组）和（HEP/COL）5-REVD修饰的ePTFE（REVD组）与脐静脉内皮细胞（HUVECs）共培养1～6 h，荧光显微镜下观察4组ePTFE表面早期内皮细胞粘附情况。6 h后将ePTFE膜片转移至新的培养皿，培养24～72 h，进一步评估ePTFE表面细胞增殖情况和内皮化程度。并用CKK-8法检测不同时间点4组ePTFE表面覆盖的内皮细胞活性。结果细胞贴壁时期，共培养1 h和6 h时，REDV组ePTFE表面覆盖的内皮细胞较其他组多；共培养6 h时REDV组细胞活性最高（OD＝0.358），组间比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。细胞增殖时期，修饰过的3组ePTFE表面覆盖的内皮细胞数量均较未修饰的ePTFE表面细胞明显增多，组间比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。修饰过的3组ePTFE的细胞活性较未修饰的ePTFE组明显增高，组间比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）；且与其他3组比较，REDV组表面的内皮细胞数量和内皮细胞活性最高，组间比较，差异均有统计学意义（P均〈0.05）。从细胞分布来看，（HEP/COL）5-REDV分布最均匀，培养72 h时，该组表面内皮细胞覆盖率高达95%。结论在0.1 mm ePTFE表面构建（HEP/COL）5-REDV选择性活性界面方法可行，可以促进内皮细胞粘附及细胞增殖，有望在植入体内的ePTFE表面建立内皮细胞屏障，克服血栓形成、内膜增生、材料衰败等缺点。

心脏近端流出道隔心肌化过程及其机制

心脏锥干部畸形是常见的复杂性先天性心脏病。近年来发现“心肌化”过程是心脏近端流出道隔发育中的一个重要事件。调控心肌化的基因及相关分子机制的研究正在成为研究热点。了解这些机制在心肌化过程中的作用将有助于深入了解心脏流出道发育的调控过程，对于进一步探讨产前的预防措施乃至开展基因治疗具有十分重要的意义。