甘草附子汤加减方通过抑制GSDMD介导的焦亡治疗CIA大鼠的作用机制研究

目的:探讨甘草附子汤加减方(GCFZD)抑制gasdermin D (GSDMD)介导细胞焦亡途径对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗效果。方法:SD大鼠尾跟部注射由牛Ⅱ型胶原与弗氏佐剂混合形成的乳化剂,构建CIA大鼠模型并对其关节炎指数进行评估,将成功诱发关节炎的30只雄性SD大鼠随机分为模型组、甘草附子汤低(4 g/kg)、中(8 g/kg)和高(16 g/kg)剂量组及甲氨蝶呤(1 mg/kg)组,每组6只,连续给药30 d。测定大鼠的体重、关节炎指数和足爪肿胀指数;X线影像学观察骨质破坏和软组织厚度改变;HE染色观察脾脏和关节组织病理学改变;番红O-固绿染色观察关节软骨改变;TUNEL染色观察关节内细胞焦亡发生情况;Western blot测定TLR4、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白表达;real-time PCR和ELISA测定IL-1β、IL-6和IL-10细胞因子表达。结果:与模型组相比,GCFZD治疗显著改善CIA大鼠软组织肿胀和骨质破坏,降低脾脏和胸腺指数;HE染色结果显示,GCFZD治疗减轻CIA大鼠脾脏和踝关节组织病理学改变;番红O-固绿染色结果显示,GCFZD治疗减少软骨组织破坏,修复软骨结构;TUNEL染色结果显示,GCFZD显著抑制关节组织内的细胞焦亡;Western blot结果表明,GCFZD降低CIA大鼠脾脏中TLR4、cleaved caspase-1、NLRP3和GSDMD-N的蛋白表达;real-time PCR和ELISA结果显示,GCFZD减少CIA大鼠IL-1β和IL-6的mRNA和蛋白水平的表达,上调IL-10的mRNA和蛋白水平的表达。结论:GCFZD能够抑制GSDMD介导的细胞焦亡,减少IL-1β和IL-6分泌,促进IL-10分泌,有效减轻CIA大鼠的类风湿关节炎症状。

脂多糖刺激人乳腺上皮细胞SYK及炎症因子的表达变化

目的:探讨脂多糖(LPS)刺激人乳腺上皮细胞中脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)表达变化及对炎症因子分泌的影响。方法:不同浓度LPS诱导人乳腺上皮细胞产生炎症反应,制备急性乳腺炎细胞模型;通过CCK-8法检测细胞增殖活性;采用实时荧光定量PCR技术确定LPS最适刺激时间、浓度及该条件下SYK、炎症因子mRNA表达水平;免疫荧光法检测LPS刺激人乳腺上皮细胞后SYK蛋白表达的变化。结果:CCK-8结果显示,25μg/mL LPS刺激1 h,人乳腺上皮细胞增殖活性无明显变化(P>0.05);实时荧光定量PCR结果显示,25μg/mL LPS刺激1 h后乳腺上皮细胞SYK基因表达最显著(P<0.05);LPS刺激后,白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子α和NLRP3表均增高(P<0.05),siRNA敲低SYK基因后,IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α和NLRP3表达均降低(P<0.05)。结论:抑制SYK基因可减少LPS诱导的乳腺炎细胞模型炎症因子释放,对于乳腺上皮细胞具有一定保护作用。

Fenton试剂处理废水中各影响因子的作用机制

以洗胶废水为研究对象初步研究了 Fenton试剂处理有毒有机废水时各影响因子的作用机制 ,通过正交实验确定了 Fen-ton反应各种影响因子的最佳操作条件为 :[H2 O2 ]=0 .2 mol· L- 1、[Fe2 +]=40 mmol· L- 1、反应温度 85℃ ,反应时间 60 min、反应体系的 p H值为 3左右 .此条件下废水 COD的去除率普遍大于 80 % .试验发现紫外光和配体络合物可提高 Fenton试剂对有机物的降解能力 .在各影响因子与 COD去除率的关系曲线基础上 ,分析了混合废水中各影响因子的作用机理和综合反应机理的关键及控制步骤 ,提出了改进的思路 .

脂质体介导胶质细胞源性神经营养因子基因在体骨骼肌的转移和表达

目的：研究脂质体介导胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨骼肌内的表达。方法：将鼠 GDNF cDNA 克隆到真核表达载体 pEGFP 中,构建重组载体 pEGFP-GDNF；将脂质体和重组质粒 pEGFP-GD- NF cDNA 混合后直接注入大鼠面神经支配的骨骼肌内。采用免疫组化技术和荧光显微镜检测 GDNF 基因转染后的体内表达。结果：转染2 d 后,转染侧面肌细胞内有散在的绿色荧光,且有部分细胞呈 GDNF 免疫反应阳性,对照侧为阴性。结论：GDNF 基因能通过脂质体介导转入骨骼肌内并表达 GDNF 蛋白,为神经营养因子基因肌内转染治疗周围神经损伤提供了初步的理论和实验依据。

肺动脉修复与重建的应用解剖学

目的 :为肺动脉修复与重建提供解剖学基础。方法 :对 3 0例成人尸体肺动脉心包外段的长度、外径、分支及奇静脉各段的长度、外径进行观测。结果 :左、右肺动脉出心包返折处的外径分别为 (13 .8±2 .6)mm ,(15 .3± 2 .8)mm ;发出下叶上支处的外径分别为 (8.4± 2 .1)mm ,(9.1± 2 .3 )mm。左、右肺动脉出心包处至下叶上支动脉起点处长度分别为 (4 .9± 0 .6)cm ,(3 .8± 0 .8)cm。奇静脉第 2段、第 3段 (奇静脉弓 )的长度分别为 (4 .2± 0 .9)cm ,(3 .1± 0 .6)cm。结论 :(1)如肿瘤侵犯肺动脉主干及其分支根部 ,动脉切除后可采用袖式吻合及侧壁扩大成形术 ;(2 )如右肺动脉侧壁切除缺损较大时 ,首选自体奇静脉片进行重建。

不同载体转基因效率及AAV2介导bFGF基因在肌腱中表达的研究

目的:比较腺病毒、腺相关病毒和脂质体-质粒三种载体在肌腱中的基因转染效率并观测腺相关病毒载体介导bFGF基因在肌腱愈合过程中表达。方法:用微量注射器将携带增强绿色荧光蛋白报告基因的三种载体注射入正常肌腱中,用荧光显微镜观测术后不同时间点肌腱内EGFP的表达。将AAV2-bFGF病毒颗粒注入损伤肌腱,使用免疫组化染色观测bFGF在肌腱内表达。结果:三种不同的载体转染肌腱3天后有EGFP表达、7天最明显、14天时下降;21天时少有表达。在同期的时间点,注射腺病毒、腺相关病毒组肌腱内EGFP表达明显强于质粒载体,而腺病毒、腺相关病毒两组之间无较大区别。免疫组化显示注射AAV2-bFGF后的第2、3和4周的肌腱表达很强的bFGF。结论:腺病毒、腺相关病毒载体的基因转染效率高于脂质体-质粒载体,AAV2携带的外源性bFGF基因在肌腱细胞内较强表达,提示我们将来在体内转基因到肌腱的研究中能够选择腺病毒和腺相关病毒载体作为运载基因的工具。

多媒体技术应用在解剖学教学中的几点思考

随着信息技术的飞速发展以及电脑的广泛普及,多媒体辅助教学简称"多媒体CAI"(或"MCAI")在许多学校已得到广泛运用.多媒体计算机在解剖的辅助教学能够充分利用色彩、声音、动画、图形等形式,创设一种形象逼真、动静结合的教学情境,为学生提供多重刺激,激发学生学习解剖的兴趣,也为解剖教师提供形象的表达方式.但是,在应用多媒体辅助解剖教学的同时,也存在着一些问题.我们结合自己的教学实践,就多媒体技术应用在解剖学教学中的优点和不足谈谈自己的认识,与大家共同讨论.

人体解剖学教师在双语教学中扮演的角色

随着我国高等医学教育与国际接轨步伐加快,双语教学在不同院校的教学实践中被广泛的应用,这将对从事教学的教师素质提出了更高的要求。我们作为人体解剖学教师,在教材选择、教学方法实施及教学效果的评价等方面扮演着重要角色,对双语教学的顺利开展起着至关重要的作用。

人神经营养素-3全长基因克隆及序列分析

目的 :扩增人神经营养素 3(humanneurotrophin 3,hNT 3)全长基因并进行序列分析。 方法 :应用聚合酶链反应技术 ,以一个健康成人基因组DNA为模板 ,扩增出编码hNT 3的全长基因 ,并克隆至pMD18 T载体中进行基因测序。结果 :所得序列与Genbank提供的序列 (M 6 1180 )对比显示 ,除hNT 3中第 5 5 5位碱基由C→T外 ,余序列同已知序列完全一致 ,改变的碱基并不影响基因编码的氨基酸序列。结论 :成功地获得了hNT 3的全长基因 ,且序列与已知序列高度一致。

大鼠失神经支配表情肌NT-3基因转染的实验研究

目的 :观察神经营养素 3(neurotrophin 3,NT 3)基因转染大鼠失神经支配表情肌的情况及对其功能恢复的影响。方法 :离断大鼠面神经的下颌缘支和颊支后无张力外膜吻合制备面神经损伤模型 ,以直接注射法将脂质体DC Chol和重组质粒pcDNA3.1 (+) NT 3混匀后注入受损神经处的神经所支配的肌肉内。采用PT PCR技术检测转基因处肌肉的NT 3表达 ,并观察NT 3基因转染后大鼠触须活动情况。结果 :经脂质体DC Chol介导NT 3基因可有效地转染组织并得到表达 ,大鼠转基因实验侧的触须拂动比对照侧提前开始恢复。结论 :经脂质体介导的外源性NT

胶质细胞源性神经营养因子基因真核荧光表达载体的构建

目的:构建可在真核细胞中表达胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotroph ic growth factor,GDNF)的荧光表达载体。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增GDNF基因,将GDNF DNA克隆到pEGFP-N1质粒,通过抗性基因筛选阳性克隆,经酶切和测序鉴定。结果:酶切和DNA序列鉴定均证实插入片段与Genebank报道的GDNF基因序列一致。结论:成功构建了GDNF荧光真核表达载体,为从分子水平开展GDNF转基因相关研究奠定了基础。

失神经对大鼠面肌NT-3 mRNA表达影响的实验研究

目的 检测神经营养素3(neurotrophin—3,NT—3)mRNA在大鼠的面肌和失神经的面肌肉的表达。方法 离断大鼠面神经的下颌缘支和颊支制备面神经损伤模型。在损伤后的第7天,采用RT—PCR技术检测NT—3mRNA在面肌和失神经的面肌内表达。结果 失神经的面肌未检测到NT—3 mRNA,有神经支配的面肌内有NT—3 mRNA的表达。结论 NT—3 mRNA在靶器官的表达可能是受其支配的神经控制。

基因修饰细胞促进关节软骨损伤修复的潜力与挑战

关节软骨损伤导致的退化性关节疾病影响了世界人口的约三分之一，超过一半的60岁以上老人存在关节功能紊乱。因此，找到一种优化治疗软骨疾病的策略具有较高的社会、经济效益。关节软骨损伤后的修复能力差，一直是困扰科研人员和临床工作者的一个难题。

Fenton试剂催化氧化降解含硝基苯废水的特性

探讨不同氧化剂和催化剂浓度下Fenton试剂氧化降解硝基苯的作用规律 ,用一元线性回归方程对不同氧化降解时间后硝基苯的相对残余浓度对反应时间的相关性进行了定量分析 ,结果发现硝基苯的Fenton试剂氧化降解符合一级反应动力学模式 ,通过回归求出了各反应条件下的一级速率常数 .实验中还发现以Fenton反应过程中产生的铁离子的复合物代替Fe2 +作为催化剂时Fenton反应不仅取得了较高的催化反应速率和降解效率 ,而且对硝基苯具有明显的专属性 ,硝基苯的降解速率可由原来的 1 7 4 8mg/(L·min)提高到 71 2 2mg/(L·min) ,反应 5min的硝基苯去除率由 9 74 %提高到 91 79% .用人造沸石为载体吸附该物质制成的非均相催化剂同样具有良好的催化性能 .另外 ,在体系中引入紫外光可以促进废水中CODCr的进一步降解 。

肝细胞癌组织CC趋化因子配体23(CCL23)表达的生物信息学分析及意义

目的探讨CC趋化因子配体23(CCL23)在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对患者生存预后的临床意义.方法分别利用GEPIA、HCCDB、MetaScape、TOMER、TISIDB,Kaplan-Meier Plotter等在线数据库分析CCL23在HCC组织的表达水平、表达基因及其基因本体(GO)功能注释和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集、肿瘤细胞纯度的相关性、免疫细胞中的表达情况和对患者生存预后意义.结果CCL23在HCC各期均低表达,并且与HCC肿瘤细胞纯度负相关,低表达CCL23的HCC患者的生存期短预后差.CCL23在HCC中共表达基因的GO功能和KEGG通路主要富集在免疫细胞活化和补体系统激活等.CCL23是HCC中最强的趋化因子,可与CC趋化因子受体1(CCR1)、CCR2、CCR7和CXC趋化因子受体6(CXCR6)等多种受体结合而发挥对免疫细胞的趋化作用,其中对效应CD8^+T细胞和巨噬细胞趋化作用最明显.结论HCC组织CCL23低表达,不利于HCC患者抗肿瘤免疫防御作用的发挥,显著缩短HCC患者的生存期.

大鼠颈内动脉的解剖及其在脑缺血模型中的应用

目的:研究大鼠颈内动脉的形态,为制作脑缺血再灌注模型提供解剖学依据。方法:成年Wistar大鼠20只,先后用墨汁乳胶液混合液灌注、甲醛固定、盐酸溶液浸泡脱钙,去骨取脑。再用XTT型实体显微镜观测颈内动脉的形态、分布。用JC-10型读数显微镜测量颈内动脉主干及其分支的管径。结果:颈内动脉长度为17.23±2.1(152-18.8)mm。主要分支有翼腭动脉、大脑后动脉、大脑中动脉和大脑前动脉,后者借交通支与椎-基底动脉系相连。主干及其分支的管径分别是:0.71±0.10mm、0.52±0.056mm、0.24±0.048mm、0.24±0.04mm、0.23±0.048mm。结论:栓线法制作局灶性脑缺血模型,除了结扎颈总动脉阻断大脑前动脉的血流外,还要避免大脑后动脉的血供,才能提高成功率。

肺动脉切除重建术的应用解剖学

目的:为肺动脉切除与重建提供解剖学基础。方法:选择肺内结节性病灶,直径<3.0cm的周围型肺癌或良性球灶,接受肺叶切除手术的病人,对其肺动脉心包外段的长度、外径、分支及奇静脉各段的长度、外径进行观测。结果:左、右肺动脉出心包返折处至下叶背支动脉起点处的长度分别约为45.7mm、42.8mm;动脉起点处的外径:左侧分别为20.6mm、12.6mm,右侧分别为21.5mm、14.7mm。奇静脉可利用的第1段(奇静脉弓)和第2段的长度分别为44.8mm、46.8mm,第1段两端的外径分别为12.7mm、12.3mm。结论:肿瘤侵犯肺动脉主干及其分支根部,动脉切除后可采用侧壁扩大及袖式吻合重建术。肺动脉侧壁切除缺损较大时,右侧可首选自体奇静脉片;左侧首选心包片进行重建。

GDNF基因体内转染对大鼠面神经损伤后的修复作用

目的:探讨胶质细胞源神经营养因子(GDNF)基因体内转染对大鼠面神经损伤后的修复作用,为基因治疗周围神经损伤提供依据。方法:用脂质体介导pEGFP-GDNFcDNA基因转染受损面神经所支配的面肌,计算损伤侧面神经元的存活率。观察动物触须节律性拂动的恢复情况,检测修复神经的传导速度。结果:面神经损伤后第7d、14d、21d和28d时间段,对照组面神经运动神经元的存活率分别为93.06%、76.06%、72.38%和70.69%,转染组分别为94.00%、84.00%、79.25%和78.06%。转染组第10.4±1.3d鼠触须开始拂动,18.5±1.3d节律性拂动基本恢复正常;对照组13.5±1.2d触须开始拂动,27.3±1.0d节律性拂动基本恢复正常。转染组神经干传导速度恢复率快于对照组。结论:面神经损伤后经脂质体介导GDNF基因体内转染靶器官后,对受损面神经的修复有促进作用。