Klac PNP基因密码子优化及在枯草芽胞杆菌中的高效表达

嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)是嘌呤补救合成途径中的关键酶,嘌呤降解途径涉及氧化嘌呤环裂解,在人体中形成尿酸作为最终产物,增加患痛风的风险。为提高PNP的发酵水平,将来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因进行密码子优化,分别将优化前后的目的PNP基因连接至分泌表达载体pBSA43,并在枯草芽胞杆菌WB600中重组表达PNP-YP-pBSA43、PNP-YO-pBSA43。结果显示,密码子优化前的酶活力为333.69 U/mL,优化后的酶活力达到351.61 U/mL。为进一步提高重组蛋白表达量,通过响应面分析得出优化后重组菌株产PNP的最佳发酵条件为初始pH为6.67、发酵时间55 h、发酵温度28.7℃。在该条件下,重组PNP活力为372.79 U/mL,相比未优化前提高了12%。来源于乳酸克鲁维酵母的PNP基因经密码子优化后重组表达,酶活力显著提高,对PNP在枯草芽胞杆菌中高效表达奠定了基础。

超高性能混凝土在大型桥梁工程中的应用

江苏润扬长江大桥桥面于去年底完成了钢桥页加固改造工程,原铺装结构为下层2.5cm环氧沥青混凝土+上层3.0cm环氧沥青混凝土,于2005年5月通车。针对原钢桥面出现大量疲劳裂缝难以修复、铺装层频繁破损屡修屡坏的现状,采用了与设计单位共同研发的"一种钢桥面板的轻型组合加固结构",这是此种新技术在江苏大型长江桥梁的首次应用。