黄曲霉毒素B_1直接竞争抑制ELISA快速筛选法的建立

采用辣根过氧化物酶标记高亲和力的黄曲霉毒素Ｂ１抗体，建立了标记抗体型直接竞争抑制ＥＬＩＳＡ快速筛选法。该法检测ＡＦＢ１的线性范围为０．２５～５．０ｎｇ／ｍＬ，灵敏度为１２．５ｐｇ。

黄曲霉毒素B_1间接竞争抑制ELISA定量分析法的建立和应用

以合成的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）－Ｃ３－羧甲基肟－牛血清白蛋白为免疫原，制备了高亲和力的多抗血清，建立了简便、灵敏的ＡＦＢ１间接竞争抑制ＥＬＩＳＡ定量分析法。ＡＦ类似物Ｂ１，Ｂ２，Ｇ１和Ｇ２与ＡＦＢ１抗体的相对交叉反应率分别为１００％，３．４％，９．１％和小于１．３％。本法测定ＡＦＢ１的线性检测范围为１２．５～２５０ｐｇ，批内和批间平均变异系数分别为５．３％和７．９％，大米和混合饲料中测定ＡＦＢ１的回收率分别为７９．０％和８１．８％。用本法对６８份样品进行了分析，ＡＦＢ１自然污染率为１１．８％，其中采自江苏某地的玉米样品污染ＡＦＢ１最高达６８２．７μｇ／ｋｇ。本法适用于大批量样品的快速检测。

2株乳酸菌的生长和潜在益生菌特性

通过研究和比较2株乳酸菌——植物乳杆菌D28(Lactobacillus plantarum D28)和粪肠球菌B21(Enterococcus faecium B21)的生长曲线,对Na Cl和胆盐的耐受性,对人工胃液和人工肠液的耐受性,以及它们的体外抗氧化能力和胆盐水解酶活性,判断其是否具有益生菌特性,以期为后期菌株功能研究提供理论基础。生长曲线试验表明,L.plantarum D28的最大生长速度出现在18 h左右,而E.faecium B21为16 h左右。起始pH对2株菌生长的影响很大,L.plantarum D28的最适生长pH为5.5~7.0,而E.faecium B21为pH 6.0~7.0。耐受性试验表明:E.faecium B21对Na Cl和胆盐的耐受性较好,高于L.plantarum D28;L.plantarum D28在人工胃液(pH 2.0,180 min)和人工肠液(pH8.0,240 min)中的菌群存活率均显著高于E.faecium B21。采用DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基清除率来测定2株菌的体外抗氧化活性,结果表明,2株菌均具有一定的抗氧化活性,且L.plantarum D28的抗氧化活性(34.86%)显著高于B21(25.32%)。采用茚三酮法测定菌株的胆盐水解酶活性发现,E.faecium B21的胆盐水解酶活性(0.415 U/mg)显著高于L.plantarum D28(0.114 U/mg)。综上表明,L.plantarum D28和E.faecium B21均具有一定的益生特性,且这2个菌株均可应用于乳酸菌降低胆固醇活性的研究,且L.plantarum D28还可以用于应用乳酸菌提高体内抗氧化活性的进一步研究中。

Mn-SOD模拟物及其在神经退行性疾病中的药用前景

本文通过分析神经退行性疾病与线粒体机能障碍、自由基损伤的关系，主要讨论了Ｍｎ－ＳＯＤ模拟物作为自由基清除剂对活性氧化合物的清除机理、药用优势，并总结了近年来有关Ｍｎ－ＳＯＤ模拟物在神经退行性疾病防治方面的研究近况及潜在应用前景。

污水处理活性污泥微生物群落多样性研究

为研究污水处理活性污泥微生物多样性,提取了活性污泥宏基因组DNA,并采用细菌通用引物27F和1492R扩增了上海污泥厂活性污泥细菌16S rDNA片段,构建了细菌16S rDNA克隆文库,并对该文库中的微生物群落进行了分析。共获得200条高质量序列并建立系统发育树,结果显示活性污泥主要的细菌类群为变形菌门(Proteobacteria)(91.9%)、厚壁菌门(Firmicures)(4.6%)、拟杆菌门(Bacteroidetes)(2%)、绿弯菌门(Chloroflexi)(0.5%)、硝化螺菌门(Nitrospirae)(1%)。其中,明显的优势菌群为Alcaligenes feacalis(55%)、Pseudomonas aeruginosa(12.8%)和Stenotrophomonas(12.8%),优势菌的产酶能力在活性污泥中显示生态修复功能菌的作用。

嗜热脂肪芽孢杆菌质粒DNA的高压电穿孔转化研究

采用高压电穿孔法将穿梭质粒导入了嗜热脂肪芽胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｔｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）Ｋ１０４１和Ｔ５２１菌株。以对数生长后期的菌体制备Ｋ１０４１转化细胞，以ＬＢ平板上于５０℃培养的过夜菌制备Ｔ５２１转化细胞，细胞密度为５～７×１０９细胞／ｍＬ。电击条件如下：电容２５μＦ，电场强度１０．０ＫＶ／ｃｍ，脉冲控制器设定２００。 Ｋ１０４１和 Ｔ５２１最高转化效率分别达２．０１×１０和１．１９ ×１０转化子／μｇ ＤＮＡ。此外，研究发现Ｔ５２１和Ｋ１０４１中存在着ＤＮＡ的限制／修饰系统。

遗传工程菌Fhhh降解精对苯二甲酸与mnp基因表达

跨界融合构建的遗传工程菌Fhhh及其亲株黄孢显毛平革菌 (PC) ,降解精对苯二甲酸的比降解率受到Mn2 + 、酒石酸铵、H2 O2 、pH共 4因素的影响 .除pH值外 ,其余 3个因素影响 2菌株比降解率大小的排序完全一致 .pH值对PC菌的影响排序处于第 3位 ,对Fhhh则处于第 1位 .Fhhh比降解率比PC高出 11 11% ;mnp基因表达的锰过氧化物酶 (MnP)比活力水平比PC高出 15 2 2 % .降解精对苯二甲酸 4因素优化水平 ,也是mnp基因表达的优化条件 .比降解率与MnP的比活力水平之间有显著或极显著正相关性 (r>r0 .0 5( 4) ,r >r0 .0 1( 4) ) .

不压井作业设备引进技术研究

不压井作业设备是一种能在井筒内有压力、有油气的情况下不用压井就可以进行钻井或起下管柱作业的一种先进的新型井下作业装备。不压井作业设备解决了修井作业过程中由于压井工序带来的油层污染及产量下降问题 ;解决了注水井作业过程中 ,放喷影响注水实效 ,造成油藏泄压问题 ;特别是针对高压注水油藏 ,解决了注水井溢流太大无法作业的问题。它能有效缩短作业周期 ,从而提高生产效率 。

水平井负压冲砂工艺技术的研究与应用

目前水平井采油技术是油田开发的一项重要工艺技术,而影响该技术发展是水平井冲砂问题能否有效解决。针对出砂水平井井底沉砂清除的技术难题,提出水平井负压冲砂工艺技术方案,通过现场实施,该技术可有效实现水平井负压冲砂、负压替泥浆,为水平井采油技术的实施提供技术支持,对于水平井采油将具有重要意义。

金属元素对跨界融合子Fhhh降解污染物过程中MnP水平调控

跨界融合构建出的基因工程菌Fhhh在降解有机污染物过程中 ,分泌的锰过氧化物酶(MnP)活力水平受到Mn2 +、Cu2 +、Zn2 +、Se4 +4种金属元素的调控 .研究结果表明 ,Fhhh及其亲株黄孢原毛平革菌 (PC)在降解污染物过程中 ,4种金属元素影响比降解率 (SDR)高低的排序均为Mn2 +>Cu2 +>Zn2 +>Se4 +;在食品废水中的 4种金属元水平素处于优化条件下 ,Fhhh分泌的MnP比活力为 :2 0 .52 90± 0 .0 530个单位 ,高于亲株PC菌的 13.2 755± 0 .0 34 5;在精对苯二甲酸 (PTA)溶液中的 4种金属元素处于自然水平时 ,Fhhh分泌的MnP比活力为 :6.560 5±0 .0 567个单位 ,高于亲株PC菌的 5.772 6± 0 .0 398.研究结果为Fhhh基因表达出高水平的MnP ,提高降解污染物的效率 ,提供了分子生物学的调控依据 .

饲喂干酪乳杆菌K17对加州鲈鱼肌肉滋味的影响

为改善饲喂加州鲈鱼肌肉的滋味,研究了添加干酪乳杆菌K17的饲料对加州鲈鱼肌肉滋味物质的影响。试验分为6组:含1×10^(8)CFU/g干酪乳杆菌K17的饲料组(LB),含10%脱脂乳粉保护的1×10^(8)CFU/g干酪乳杆菌K17的饲料组(MB),含1×10^(8)CFU/g热灭活干酪乳杆菌K17的饲料组(DB),含发酵上清液的饲料组(FS)、含10%脱脂乳粉的饲料组(MG)及含0.85%生理盐水的饲料组(SG)。实验结束后,利用电子舌测定了不同处理组样本的整体滋味差异,并分析了其呈味氨基酸和呈味核苷酸的含量。结果显示,通过电子舌主成分分析和判别因子分析,可将6组的差异性进行有效区分;采用雷达图能将各组鲜味、苦味和甜味大小区分。6组加州鲈鱼肌肉中检测出16种游离氨基酸。MB组鲜味氨基酸总量和天冬氨酸含量,FS组缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸含量和苦味氨基酸总量和MG组的必需氨基酸总量显著高于对照组SG(P<0.05)。MB组的味精当量(Equivalent umami concentrations,EUC)增加最明显,与对照组相比差异显著(P<0.05),6组EUC的大小为MB>FS>DB>LB>MG>SG,与电子舌预测结果基本一致。以上研究表明,饲喂不同剂型干酪乳杆菌K17对加州鲈鱼滋味成分和含量的影响存在一定差异,MB组对加州鲈鱼肌肉整体滋味贡献最大,这可为其在加州鲈鱼中应用提供理论依据。

嗜热脂肪芽孢杆菌pgiB基因上游452bp序列的功能分析

用化学诱变剂N 甲基 N′ 硝基N 亚硝基胍进行随机诱变 ,获得了穿梭启动子探测质粒pPGV5的温度抗性突变型pPGV5 (tr6 5 ) ,序列分析发现质粒上卡那霉素核苷转移酶基因kan的 +2 3 8位碱基发生了G→T的单点突变。以来自嗜热脂肪芽孢杆菌FDTP 3菌株的耐热邻苯二酚 2 ,3双加氧酶基因pheB作为报道基因 ,构建了转录融合质粒pPGVPB45 2 ,用高压电穿孔法将其转化嗜热脂肪芽孢杆菌 ,通过报道蛋白活性的分析 ,证明了嗜热脂肪芽孢杆菌T5 2 1菌株的 6 磷酸葡萄糖异构酶同工酶基因pgiB上游含启动子样序列的 42

行政许可中信赖保护问题的调查报告——以河南省Z市为例

城市房屋拆迁成为现在城市发展的一个热点,它关系到城市规划具体落实,更关系到城市的市容整齐,需要政府公权力对其进行监督和管理。结合某房屋拆迁案例的解读,分析城市房屋拆迁若干法律漏洞,对行政许可信赖保护构成要件具体分析,提出完善信赖保护原则的建议,更好的维护行政许可相对人的合法权益。

宏基因组学技术在微生物功能酶开发中的应用

宏基因组学技术以特定环境样品中微生物复杂群落的基因组总和为研究对象,突破了传统微生物纯培养方法的局限,为不可培养微生物中丰富的基因资源的开发和利用提供了强有力的工具,已经取得了令人瞩目的研究进展。对宏基因组学技术及其在微生物功能酶新基因发现中的应用进行综述。

新型剖分式现场油管缺陷检测装置

目前油田在用的油管缺陷检测装置主要存在井口磁化总成安装困难、不具有井口自密封功能和检测信号不稳定等问题,为此开发了一种新型剖分式现场油管缺陷检测装置。该检测装置在油管起下井作业时进行在线检测,不受水、油污和结蜡等的影响,对环境无污染,同时检测装置安装时只需要将井口装置打开,抱合在油管上即可。在声音自动判废信号处理总成中增加了小波滤波装置,更好地消除了震荡等干扰信号。应用该装置现场检测73 mm油管500根,其中轴向沟槽类缺陷油管124根,占检测油管总数的24.8%;孔洞类缺陷油管32根,占检测油管总数的6.4%。最后指出该检测装置可有效防范井下险情,为油田安全生产提供技术保障。

携带SXT/R391家族整合接合元件多重耐药菌株的高效筛选与分析

本研究建立了一种抗生素平板与分子检测相结合的高效筛选水产品中携带SXT/R391家族整合接合元件(integrative and conjugative elements,ICEs)的多重耐药菌株的方法。采用美国临床与实验室标准研究所标准Kirby-Bauer纸片扩散法、需氧菌液体微量稀释法,以及接合实验,对筛选、鉴定获得的携带SXT/R391家族ICEs的变形杆菌(Proteus vulgaris)进行了抗菌素、重金属抗性以及ICEs元件接合转移活性的分析。结果表明:运用本研究建立的筛选法可有效获得含有多重耐药基因的ICEs元件,其检出率为3%,远高于常规聚合酶链式反应技术的检测水平(<1‰)。受试菌株对六大类10种抗菌素均表现出抗性,并且对重金属镉、铜、锌和汞具有高度耐受性。接合实验证明了受试菌株所携带的ICEs元件在普通变形杆菌与大肠杆菌(Escherichia coli)MG1655之间的自我转移活性。

我国东部海域近岸水体中副溶血性弧菌的多元相关性分析

副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）是一种重要的水产品食源性致病菌,在我国沿海地区已成为引发细菌性食物中毒的首要风险因子。采集了我国东部海域（18.1°~38.5°N,109.3°~122.5°E）近岸水体样品,测定了水样的pH、盐度、温度、电导率、溶解性固体总量、溶解氧,以及副溶血性弧菌疑似菌含量,建立了水体环境因素与副溶血性弧菌相关性的模型。初步分析结果显示,水体的盐度是影响我国东部海域近岸水体中副溶血性弧菌丰度的主要环境因素。研究结果可为沿海地区副溶血性弧菌流行预警的研究提供数据参考。

屎肠球菌B21对高脂饮食Wistar大鼠体重、空腹血糖和粪便菌群的影响

本研究分析了摄食屎肠球菌(Enterococcus faecium)B21菌株对高脂饮食Wistar大鼠体重和空腹血糖的影响;并运用高通量测序技术分析了大鼠肠道菌群多样性的变化。36只Wistar大鼠随机分为正常对照组(NCD)、高脂饮食组(HFD)和E.faecium B21干预组(HFD+B21)。NCD组大鼠喂食普通饲料,HFD组和HFD+B21组大鼠喂食高脂饲料。自第1周起,给予HFD+B21组每只大鼠每天灌胃0.2 m L E.faecium B21(108CFU/m L)至第7周。收集第7周大鼠粪便,通过高通量测序分析了3组大鼠肠道菌群的结构和组成。结果表明:在第7周时,HFD+B21组(366.51 g)大鼠体重显著高于HFD组(339.43 g,p<0.05)和NCD组(306.84 g,p<0.05),HFD+B21组大鼠(7.63 mmol/L)空腹血糖显著低于HFD组(8.75 mmol/L,p<0.05),且与NCD组无显著性差异(7.08 mmol/L,p>0.05)。HFD+B21组大鼠肠道菌群丰度(ACE值398.12,Chao1值398.49)和多样性最低(Shannon指数3.83),NCD组菌群丰度(ACE值700.57,Chao1值698.07)和多样性(Shannon指数5.06)最高;E.faecium B21的摄入降低了菌群中致病菌属假单胞菌属(Pseudomonas)和脱硫弧菌属(Desulfovibrio)的比率,同时促进了有益菌属布劳特氏菌属(Blautia)的增长。结论:E.faecium B21的摄入能促进高脂饮食Wistar大鼠的体重,降低其空腹血糖且对肠道菌群失衡具有一定的调节作用。

基于蛋白质基因组学方法的新抗原鉴定流程

肿瘤新抗原是免疫治疗的重要靶点,但基因组数据产生的候选新抗原数量庞大,预测假阳性肽段过多,实验验证费时费力,影响肿瘤新抗原的临床应用.本研究以乳腺癌为例,使用比转录组水平筛选更严格、比细胞学实验更省时的蛋白质基因组学方法来预测和筛选新抗原.研究发现,C2 (IFN-γdominant)免疫表型的新抗原数量最多. C2免疫表型显示出最高的M1/M2巨噬细胞极化,较强的CD8信号和最大的T细胞受体多样性,这可能导致产生更多具有良好免疫原性的新抗原.另外,我们还观察到乳腺癌肿瘤突变负荷与新抗原数目之间呈正相关.通过同批样本的质谱数据进一步筛选发现,可将两万级别的预测新抗原肽候选降至几十条表达肽段,进而可分析其对应的特异或广谱突变基因.最后,我们进一步分析了新抗原的免疫原性,即被T细胞受体识别的可能性.本文利用蛋白质组学数据对基因组数据计算预测得到的候选新抗原进一步筛选,提高了新抗原预测准确性,大大缩小后续实验验证范围.该流程可为肿瘤新抗原预测与筛选研究提供参考.

副溶血性弧菌毒素编码基因的微量、可视化检测

针对副溶血性弧菌主要毒素编码基因(tdh和trh),基于环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以毛细管为反应介质,建立一种微量(5μL)、特异、灵敏、低成本、可视化、快速检测的毛细管LAMP(capillary LAMP,cLAMP)。本研究针对每个靶标基因分别设计6条特异性引物,系统优化Mg^2+、dNTPs浓度和Bst DNA聚合酶使用量,以及反应时间及反应温度等参数,确立最适cLAMP反应体系;测定该方法的灵敏度和特异性。结果表明:优化后的5μL cLAMP反应体系为6 mmol/L或8 mmol/L Mg^2+,1.44 mmol/L或1.28 mmol/L dNTPs、0.096 U/μL Bst DNA聚合酶、反应温度65℃、反应时间60 min。针对靶基因tdh和trh,cLAMP方法检测副溶血性弧菌基因组DNA的最低检测限分别为3 fg/μL和34 fg/μL,纯培养物的最低检测限分别为9.85×10^3 CFU/mL和8.25×10^5 CFU/mL;且与其他6种常见致病菌(霍乱弧菌、创伤弧菌、溶藻弧菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌)均无交叉反应。本研究建立的微量、可视化cLAMP方法为食源性致病菌副溶血性弧菌检测试剂盒的研发提供了技术支撑。