野桑蚕丝胶1基因Ser1A′及其上游调控序列的克隆和序列分析

家蚕由野桑蚕驯化而来,而野桑蚕sericin1及其上游调控序列的相关研究较少。本研究以家蚕sericin1及其上游调控序列设计引物克隆野桑蚕sericin1及其上游调控序列,将克隆得到的野桑蚕Sericin 1序列翻译后用muscle软件与家蚕Sericin 1蛋白序列比对,结果表明预测的野桑蚕Sericin 1氨基酸序列与家蚕Sericin 1 A′(Ser1 A′)氨基酸序列相似性很高,达98%。野桑蚕丝胶1基因上游调控序列与家蚕一样也存在多态性,克隆得到了1061bp和636bp的两条序列,中间存在425bp的插入序列,与家蚕丝胶1基因上游调控序列相似性分别为98%和97%。

CEP55在人胶质瘤组织的表达及对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的检测中心体相关蛋白55(CEP55)在人胶质瘤组织中的mRNA和蛋白表达水平;抑制人胶质瘤U251细胞中CEP55表达,观察其对U251细胞增殖、凋亡的影响。方法实时荧光定量聚合酶连锁反应(q-PCR)、蛋白质印记法(Western Blot)检测40例不同级别人胶质瘤组织和10例正常脑组织中CEP55的表达;RNAi抑制U251胶质瘤细胞CEP55基因表达,采用细胞增殖毒性检测试剂盒(CCK-8)和胸腺嘧啶核苷类似物(edu)检测CEP55对U251细胞增殖的影响,采用流式细胞仪分析CEP55对细胞凋亡的影响。结果 CEP55在40例人胶质瘤组织中表达显著高于正常脑组织(P<0.01),但高级别胶质瘤CEP55的表达与低级别胶质瘤没有显著差异(P>0.05)。在RNAi抑制U251细胞CEP55表达后,细胞的增殖显著受抑(P<0.01),细胞的凋亡显著增加(P<0.01)。结论人胶质瘤组织细胞较正常脑组织CEP55表达明显增高,抑制CEP55的表达抑制人胶质瘤U251细胞的增殖,同时促进人胶质瘤细胞的凋亡。

抑制LITAF基因对人脑胶质母细胞瘤U251细胞增殖、凋亡和放疗敏感度的影响

目的分析人脑胶质母细胞瘤组织中LITAF基因mRNA表达情况,并通过抑制人脑胶质母细胞瘤U251细胞中LITAF基因表达,观察其对U251细胞增殖、凋亡和放疗敏感度的影响。方法分析TCGA数据库中人脑胶质母细胞瘤组织中LITAF基因mRNA表达;通过RNAi抑制U251细胞中LITAF基因表达,采用胸腺嘧啶核苷类似物(EDU)检测U251细胞增殖变化,流式细胞仪分析U251细胞凋亡的变化,克隆形成实验和流式细胞分析U251细胞放疗敏感度的变化。结果 TCGA数据库分析结果显示人脑胶质母细胞瘤组织LITAF表达显著高于正常脑组织;抑制LITAF表达后,U251细胞的增殖和凋亡未见明显变化,但在电离辐射后,LITAF抑制组U251细胞凋亡显著低于对照组,克隆形成显著高于对照组,对放疗敏感度减弱。结论 LITAF基因高表达于人脑胶质母细胞瘤组织,抑制人脑胶质母细胞瘤U251细胞中LITAF基因表达不影响细胞的增殖和凋亡,但显著降低细胞的放疗敏感度。

E2F1上调CCNA2表达影响卵巢癌增殖能力

目的探讨转录因子E2F1上调细胞周期蛋白A2 (CCNA2)表达对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响。方法利用TCGA网站分析卵巢癌组织与卵巢正常组织中E2F1与CCNA2的mRNA表达情况,利用TCGA卵巢癌RNA-seq数据分析E2F1基因与CCNA2基因表达相关性,利用小RNA敲低E2F1表达,利用q PCR检测E2F1、CCNA2 mRNA表达水平,利用western blot检测E2F1、CCNA2蛋白表达水平,EDU流式检测法检测SKOV3细胞增殖情况,利用网站预测CCNA2启动子区域E2F1结合位点。结果卵巢癌组织中E2F1及CCNA2的表达明显高于正常卵巢组织,卵巢癌中E2F1表达与CCNA2表达具有相关性,敲低E2F1表达会减少CCNA2的表达,敲低E2F1的表达会抑制SKOV3细胞增殖,CCNA2转录起始位点附近存在E2F1转录因子的结合位点。结论 E2F1上调CCNA2表达促进卵巢癌细胞系SKOV3细胞的增殖。