GST-His双标签原核表达载体的构建及应用

目的:在原有带有GST标签的pGEX-KG载体上添加His标签,构建双标签原核表达载体,以提高纯化后的融合蛋白的纯度。方法:双酶切pGEX-KG载体,将同样带有双酶切位点编码His标签的DNA序列酶切后与其连接、转化大肠杆菌DH5α、鉴定阳性克隆并测序,并将编码雌激素受体β(ERβ)的片段构建到该载体上,分别利用GST标签和His标签对ERβ蛋白进行2次纯化。结果:构建了GST-His双标签原核表达载体,将ERβ编码片段克隆入该载体中,在原核生物中得到表达;分别用GST和His抗体进行Western blot分析,均可检测到GST-His-ERβ融合蛋白的表达;利用此双标签载体纯化得到了纯度较高的ERβ蛋白。结论:GST-His双标签原核表达载体的构建对提高目的蛋白纯度具有重要意义。

我国人类辅助生殖技术服务机构地域分布与社会经济影响因素初探

目的:横断面分析2012年国家卫生计生委公布的我国人类辅助生殖技术服务机构和人类精子库设置(以下简称:辅助生殖机构)白名单,比较我国东、中、西地域间辅助生殖机构数量和技术服务类别的差异,并研究其与部分社会经济学因素的相关性。方法:按我国东、中、西地域划分整理2012年我国辅助生殖机构数量及各种技术类别的数量并分析其差异;与同年度辅助生殖机构中国统计年鉴公布的人口数、城乡居民储蓄及客运总里程等社会经济代表性参数进行相关性分析。结果:人类精子库和开展供精人工授精(AID)机构数比较差异均无统计学意义(P>0.05),开展其他各类技术服务机构的数量呈东、中、西递减的趋势。辅助生殖机构数量与人口数、大专以上人口数、城乡居民储蓄及客运总里程呈正相关(r=0.855,P<0.001;r=0.758,P<0.001;r=0.887,P<0.001;r=0.857,P<0.001),但与城镇人口比例无统计学相关性(r=0.201,P=0.290)。结论:我国辅助生殖机构的地域布局在数量和技术类别上存在很大差异,这种差异与经济、交通及人口数量呈显著正相关。

农村留守青少年生殖健康认知和行为的定性研究

目的了解农村留守青少年生殖健康相关认知和行为,为开展农村留守青少年生殖健康促进项目提供依据。方法抽取重庆市和湖南省各1个县的33名10-24岁校内外留守青少年,对成长的自然、社会和家庭环境,生殖健康相关认知和行为,以及遇到生殖健康问题时的求助情况开展个人深入访谈,在与留守青少年相关的人员中就青少年生殖健康相关社会和家庭环境开展个人访谈。结果农村留守青少年的上学路途、住宿条件艰苦,工作环境复杂,对青春期、月经、遗精、自慰、艾滋病、性行为和性侵犯等生殖健康知识的了解不完备;婚前性行为较多且安全性行为采纳较少,尤其是校外青少年。在生殖健康方面,农村留守青少年缺乏来自父母、看护人、同学与同事、老师、雇主、医生等及时正确的指导或支持,忍受缺少父母关爱的痛苦,在自身安全方面存在诸多隐患,在遇到生殖健康相关问题时难以获得恰当帮助;校内、外男、女青少年均是如此。结论农村留守青少年生殖健康问题值得特别关注。需从公共卫生角度建立专门应对机制,营建有利的自然、社会和家庭环境与促进适应一般社会规范并重。

ZFNs、TALENs和CRISPR-Cas基因编辑技术在肿瘤治疗中的应用

锌指核酸酶(Zinc finger nucleases,ZFNs)、转录激活子样效应因子核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)和规律间隔的成簇短回文重复序列(Clustered regularlyinterspaced short palindromic repeats,CRISPR/Cas)是当今3种主要的基因编辑技术。ZFNs和TALENs的结构主要分为特异性的DNA结合蛋白和一个非特异性的核酸酶FokⅠ,DNA结合蛋白可以特异性的识别并与靶DNA序列相结合,FokⅠ的功能则是引起靶位点的DNA双链断裂(DSBs); CRISPR-Cas系统是通过小分子向导RNA的碱基互补配对原则与靶基因组序列结合,然后Cas核酸酶切割靶位点发生DSBs。真核细胞发生DSBs后,利用DNA修复机制进行修复实现基因编辑。该综述介绍了这3种技术及基因组靶向编辑的原理和研究进展,并探讨基因编辑技术在肿瘤细胞治疗中的作用及应用前景。