YAP1基因敲除对胰腺癌L3.6细胞增殖及迁移能力的影响

目的:研究胰腺癌细胞中YAP1对胰腺癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:利用CRISPR-Cas9技术,在人胰腺癌L3.6细胞中敲除YAP1基因,并用Western blot验证;通过MTT比色法及EdU流式检测敲除YAP1前后的癌细胞增殖能力;用细胞划痕及Transwell实验研究迁移能力。结果:成功获得YAP1敲除的L3.6稳定细胞株(YAP1-KO)。相对于野生型的L3.6细胞,YAP1-KO细胞的增殖与生长能力明显下降,细胞迁移能力也明显减弱。结论:YAP1基因敲除显著降低胰腺癌L3.6细胞的增殖和迁移能力,可能为靶向治疗胰腺癌提供新的潜在靶标。

车身修复涂装要领之三

(接上期) 三、底漆的喷涂工艺 在车身形状做到彻底规范地完整恢复之后再进行底漆喷涂.底漆喷涂时要特别注意防涂裱贴工作.现在通常使用的修补漆是单液性底漆、风干底漆、双组份底漆,还有环氧底漆等,其中风干底漆应用较广泛.

车身修复涂装要领之二

(接上期) 下面用图示介绍了一些对异形区域的刮灰方法. 我们可以把做灰看作是进行艺术性的"雕塑",即将多余的地方处理掉,恰到好处地保留需要的部分.油漆工常常把磨灰的质量说成是平度,水平高的油漆工都会用心去感受磨灰的平度.真正做到用心磨灰的确很难,就跟写字要以意行笔一样.因为灰板在手中滑动,它会通过手传给心去感受运行过程中的阻力是否一致.

车身修复涂装要领之一

在人文素质高度提升的现代社会,汽车扮演的不仅是运输工具的角色,而在闲静之时,人们会像对待宠物一样,去悉心地欣赏它、呵护它。许多爱车人士更是对爱驾的华丽外表倍加关爱,他们用自己独特的审美意识品味着这一“工业艺术品”,并享受着由此带来的愉悦。一些高档车的车主朋友会因拥有一辆华贵的轿车而欣喜若狂,更会因轿车完美的外观形体和光亮的表面漆色而心潮澎湃。“轿车”这一人类智慧的结晶,带给人们的不仅仅是方便快捷,它更蕴藏着无穷的魅力及隐形的财富……基于上述观点,我们汽车喷涂工作者要重新定位自己的工作职责,从过去辅助性工作角度转换成主导性的工作地位,这样才不会被市场陶汰。我们不仅置身于专业工作岗位,更要以专业人员的素质为客户服务。笔者希望将自己从事多年车身喷涂工作的心得、经验,通过《汽车维修与保养》杂志与同行朋友交流。文章不免存在诸多不足之处。关于钣喷方面的技术细节,笔者愿与同行深入探讨,共同提高。

人YAP1基因亚型的质粒构建及表达鉴定

目的:构建人Yes相关蛋白1(YAP1)基因亚型1δ、2δ的真核表达载体并进行瞬时表达鉴定,为研究YAP1亚型间的区别及其在肿瘤中的作用打下基础。方法:在已有pCI_2-Flag-YAP1-2γ质粒的基础上,利用重叠PCR增加碱基的方法得到YAP1-2δ的片段,再同理删减WW基因序列得到YAP1-1δ片段,通过Cla I和Sal I两个酶切位点将片段和pCI_2载体相连接,构建pCI_2-Flag-YAP1-1δ及pCI_2-Flag-YAP1-2δ质粒。利用测序确认完整的DNA序列。在HEK293细胞中瞬时转染质粒,用Western blot方法检测YAP1两个亚型的蛋白表达。结果:重组质粒经双酶切和基因测序比对鉴定正确,HEK293细胞经瞬时转染表达出YAP1-1δ和YAP1-2δ蛋白。结论:成功构建了pCI_2-Flag-YAP1-1δ及pCI_2-Flag-YAP1-2δ真核表达质粒,并在HEK293细胞内过表达成功。为进一步探讨YAP1各亚型对肿瘤发展的影响奠定基础。