应用RNA干扰技术抑制捻转血矛线虫H11基因研究

【目的】为了检测RNAi沉默H11基因能否模拟H11疫苗免疫效果。【方法】针对H11基因序列设计并合成特异性dsRNA,通过浸泡方式分别将dsRNA导入捻转血矛线虫感染性L3期幼虫体内,利用实时荧光定量PCR分析H11基因在L3期幼虫中的转录抑制效果,同时,将H11-dsRNA浸泡L3期幼虫24 h后感染绵羊,定期采集绵羊粪便检查虫卵数,第30 d后剖检绵羊皱胃,检查荷虫数的变化。研究H11基因的沉默对捻转血矛线虫减虫率和减卵率的疫苗免疫效果。【结果】实时荧光定量PCR检测表明:试验组中H11基因的相对含量显著低于对照组(P<0.01),在浸泡72 h后,H11-dsRNA组基因的表达量仅为对照组的21.33%。绵羊体内干扰沉默效果显示,试验组H11干扰组虫卵减少率为41.02%,减虫率为39.6%。【结论】研究通过浸泡法导入的dsRNA能有效抑制H11基因的转录,同时H11基因的沉默与幼虫的发育密切相关,为捻转血矛线虫及其它寄生线虫的基因功能研究提供一种新的方法。