中药调控线粒体自噬治疗缺血性心脏病的物质基础和潜在用药规律研究

目的:运用网络药理学和数据挖掘方法,分别建立潜在和临床常用的通过调控线粒体自噬治疗缺血性心脏病中药的数据库,归纳分析药物的物质基础及潜在用药规律,为新药研发提供参考。方法:通过检索京都基因与基因组百科全书(KEGG)、GeneCards、OMIM和DrugBank基因库获取线粒体自噬和缺血性心脏病交集靶点,通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)筛选出可作用于靶点的化合物和中药,运用Cytoscape软件建立靶点-化合物-中药网络,建立调控线粒体自噬防治缺血性心脏病的潜在中药数据库;同时结合中国知网和万方数据库建立调控线粒体自噬治疗缺血性心脏病的临床常用中药数据库。确定潜在和常用高频药物的性味归经和类别,对比分析其用药规律。结果:网络药理学结果提示,表没食子儿茶素没食子酸酯、槲皮素、汉黄芩素、白藜芦醇、染料木素、丹参酮ⅡA可能是中药调控线粒体自噬治疗缺血性心脏病的主要小分子物质,潜在中药有甘草、丹参、鸡血藤、黄芪、黄芩、人参等;数据挖掘结果提示,临床常用中药有丹参、黄芪、川芎、当归、红花、人参等。综合2个数据库得到的高频中药,分析得到用药靶向多集中于补气、活血调经、温经止痛、止咳平喘等,药味均以苦、甘为主,药性以寒、温居多,主要归肝、心、肺经。结论:中药调控线粒体自噬治疗缺血性心脏病的小分子物质可能为表没食子儿茶素没食子酸酯、槲皮素、汉黄芩素等,潜在药物为丹参、黄芪、人参等。

瓜蒌薤白白酒汤加减治疗冠心病心绞痛随机对照试验的Meta分析

目的:系统评价瓜蒌薤白白酒汤加减治疗冠心病心绞痛的疗效及其对血脂水平、血液流变学的影响。方法:计算机检索中国知网(CNKI)、万方(WanFang Data)、维普(VIP)、中国生物医学文献数据库(CBM)、the Cochrane Library、PubMed、EMbase、Web of Science数据库,检索时限为建库至2021年4月30日。由2名研究者独立筛选文献、提取资料,并评价偏倚风险,采用RevMan 5.3软件进行Meta分析。结果:共纳入16项研究,包括1491例病人。Meta分析结果显示:与其他治疗相比,瓜蒌薤白白酒汤的临床总疗效[OR=5.13,95%CI(3.55,7.40),P<0.00001]及心电图改善情况[OR=3.07,95%CI(1.76,5.33),P<0.00001]更好;心绞痛发作频率[SMD=-1.90,95%CI(-2.15,-1.65),P<0.00001]、心绞痛持续时间[SMD=-2.44,95%CI(-3.09,-1.78),P<0.00001]更低;总胆固醇(TC)[MD=-1.19,95%CI(-1.73,-0.64),P<0.0001]、三酰甘油(TG)[MD=-0.59,95%CI(-0.75,-0.43),P<0.00001]、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)[MD=-0.92,95%CI(-1.26,-0.58),P<0.00001]水平明显降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平[SMD=1.34,95%CI(0.37,2.31),P=0.007]明显升高;全血高切黏度[MD=-1.01,95%CI(-1.24,-0.79),P<0.00001]、全血低切黏度[MD=-1.98,95%CI(-2.28,-1.68),P<0.00001]、血浆黏度[MD=-0.31,95%CI(-0.41,-0.22),P<0.00001]、纤维蛋白原水平[MD=-0.85,95%CI(-0.93,-0.78),P<0.00001]均降低。结论:现有证据表明,瓜蒌薤白白酒汤治疗冠心病心绞痛的疗效较好,可有效改善血脂水平及血液流变学状态,推荐联合使用。上述结论仍需更多高质量研究予以验证,并对其安全性进行补充分析。

论我国环境民事公益诉讼制度的完善

环境民事公益诉讼制度的确立,对完善我国环境司法制度,更好地保护环境公共利益具有重大的推动作用。然而,这一制度在起诉主体以及判决资金的使用监管、环境损害司法鉴定体系的建立等具体规则上,立法规定不明确,制度不完善,不利于环境民事公益诉讼制度的落地及其应有作用的发挥。面对这些问题,需要进一步发展诉讼当事人理论,明确和拓展提起环境民事公益诉讼的主体,确认公民环境民事公益诉讼的当事人资格,健全环境民事公益诉讼相关制度,以更好地保护环境公共利益,促进社会的稳定和经济的可持续发展。

基于线粒体分裂融合探讨丹酚酸B保护H9C2细胞OGD/R损伤的作用机制研究

本研究旨在探讨丹参的有效成分丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)通过调控线粒体分裂融合对氧糖剥夺/再复(oxygen and glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)损伤的H9C2心肌细胞的保护作用。通过建立OGD/R模型模拟心肌缺血再灌注损伤过程。细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测细胞活力;试剂盒法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、总谷胱甘肽(total glutamyl cysteinyl glycine,t-GSH)、一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,蛋白质印迹法检测线粒体分裂融合、细胞凋亡相关蛋白表达水平,线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)检测试剂盒与Hoechst 33342荧光观察MPTP开放水平,分子对接技术确定丹酚酸B分子靶点。结果表明,与对照组相比,OGD/R损伤降低H9C2细胞活力,ROS含量增加,t-GSH、NO含量减少,线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)、线粒体融合蛋白有线粒体融合蛋白2(mitofusions 2,Mfn2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase 3)的蛋白表达水平升高,Mfn1的蛋白表达水平降低,MPTP开放水平增加。与OGD/R组相比,丹酚酸B各组在6.25~100μmol·L^(-1)具有保护作用,丹酚酸B降低ROS含量,增加t-GSH、NO含量,降低Drp1、Mfn2、Bax、caspase 3的蛋白表达水平,增加Mfn1的蛋白表达水平,降低MPTP开放水平。综上所述,丹酚酸B可能通过调节氧化与抗氧化平衡、线粒体分裂融合平衡,抑制MPTP开放,减少细胞凋亡进而使H9C2细胞减少OGD/R损伤,可为丹酚酸B治疗心肌缺血再灌注损伤提供有价值的科学依据。

人参皂苷Re通过Nrf2/HO-1/PGC-1α通路调控线粒体生物发生减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的研究

该文探讨了人参皂苷Re通过核因子E2相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor 2,Nrf2)/血红素氧合酶-1(heme oxidase-1,HO-1)/过氧化物增殖体激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)调控线粒体生物发生减轻H9c2细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的机制。将H9c2细胞缺氧培养4 h再复氧培养2 h构建心肌细胞H/R损伤模型。Re预给药干预后,首先检测细胞活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、细胞内活性氧(Cyto-ROS)和线粒体内活性氧(Mito-ROS)水平,评估Re通过抗氧化应激对H9c2细胞H/R损伤的保护作用。其次通过荧光探针检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,ΔΨ_(m))、线粒体膜通透性开放孔(membrane permeability open pore,mPTP)变化情况,通过免疫荧光检测TOM20表达水平,研究Re对线粒体的保护作用。进一步用免疫印迹检测caspase-3、cleaved caspase-3、Cyto C、Nrf2、HO-1、PGC-1α蛋白表达水平,探讨Re抗氧化应激保护线粒体减轻H/R损伤的具体机制。结果显示,与模型组相比,Re有效减轻H9c2细胞H/R损伤氧化应激反应,Re可显著升高细胞中SOD活性,降低MDA含量,降低Cyto-ROS和Mito-ROS水平;Re对线粒体有较好保护作用,升高ΔΨ_(m),降低mPTP开放,升高TOM20表达;进一步研究表明Re促进Nrf2、HO-1、PGC-1α蛋白表达,降低凋亡相关调节因子caspase-3向cleaved caspase-3活化、Cyto C蛋白表达。综上所述,人参皂苷Re减轻H9c2细胞H/R损伤的具体机制与通过Nrf2/HO-1/PGC-1α通路促进线粒体生物发生,进而升高线粒体数量、改善线粒体功能,增强细胞抗氧化应激能力,减轻细胞凋亡有关。

延胡索乙素通过ULK1/FUNDC1通路抑制线粒体自噬减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤

该研究探讨了延胡索乙素(tetrahydropalmatine,THP)通过UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK1)/FUN14结构域蛋白1(FUN14 domain containing 1,FUNDC1)通路抑制线粒体自噬减轻H9c2心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的具体机制。该研究以H9c2心肌细胞为研究对象,构建心肌细胞H/R损伤模型。首先采用细胞活力检测试剂盒检测细胞活性、微量法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量评估THP对H9c2心肌细胞H/R损伤的保护作用。然后采用化学荧光法检测细胞内活性氧、线粒体内活性氧、线粒体膜电位、自噬小体情况,并用萤光素法检测细胞内三磷酸腺苷(adenosine 5′-triphosphate,ATP)含量评估THP对线粒体的保护作用。进一步用免疫印记检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)膜型(LC3-Ⅱ)和包浆型(LC3-Ⅰ)的比值,活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved caspase-3)表达水平、ULK1表达水平及其在Ser555位点的磷酸化程度,FUNDC1表达水平及其在Ser17位点的磷酸化程度探索其具体机制。结果显示,THP有效减轻H9c2细胞H/R后线粒体损伤,THP通过降低细胞内和线粒体内活性氧水平、升高线粒体膜电位保护线粒体,进而增加细胞ATP生成、升高细胞活性、降低细胞LDH漏出,减轻H9c2细胞H/R损伤;进一步研究发现THP能够降低自噬小体生成,降低LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,降低凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达,表明THP通过抑制自噬减轻细胞凋亡;深入研究发现THP通过降低ULK1在Ser555位点和FUNDC1在Ser17位点的磷酸化程度,抑制线粒体自噬ULK1/FUNDC1通路激活,抑制线粒体自噬发生。ULK1激动剂BL-918的应用逆向验证了THP降低ULK1和FUNDC1磷酸化的作用。综上所述,THP通过ULK1/FUNDC1通路抑制线粒体自噬减轻H9c2心肌细胞H/R损伤。

双参宁心胶囊调控线粒体分裂、融合减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤

目的:探讨双参宁心胶囊减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制是否与调控线粒体分裂、融合有关。方法:该研究以SD大鼠为研究对象,结扎冠状动脉左前降支,构建大鼠心肌缺血再灌注损伤模型,实验分为假手术组、模型组、双参宁心组(90 mg·kg^(-1))、曲美他嗪组(5.4 mg·kg^(-1))。微量法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量,化学荧光法检测线粒体膜电位(△Ψm)变化、线粒体膜通透性开放孔(mPTP)开放程度,萤光素酶法检测细胞内腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测线粒体分裂相关因子线粒体动力相关蛋白1(DRP1)、线粒体裂变蛋白1(FIS1),视神经萎缩症蛋白1(OPA1)、线粒体外膜融合蛋白1(MFN1)、MFN2的mRNA和蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清SOD活性降低,MDA含量升高,△Ψm、mPTP开放水平、ATP含量均降低,线粒体分裂因子DRP1、FIS1蛋白表达升高,融合相关因子OPA1、MFN1的mRNA转录和蛋白表达均降低;与模型组比较,双参宁心胶囊可显著升高大鼠血清SOD活性,降低MDA含量,升高细胞内ATP水平及△Ψm,降低mPTP开放水平,下调线粒体分裂因子DRP1、FIS1蛋白表达,升高融合相关因子OPA1、MFN1的mRNA转录和蛋白表达水平。结论:双参宁心胶囊减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与调控线粒体分裂、融合有关,其具体机制可能为抑制线粒体分裂因子DRP1、FIS1表达从而抑制线粒体分裂,升高融合相关因子OPA1、MFN1表达,进而保护线粒体功能结构减轻心肌缺血再灌注损伤。

中华跌打丸抗炎镇痛药效学研究及对佐剂关节炎大鼠炎症的影响

目的考察中华跌打丸抗炎镇痛的药效学作用,探讨其对佐剂关节炎模型大鼠的作用机制。方法采用3种炎症模型和2种疼痛模型考察中华跌打丸的抗炎镇痛作用;建立佐剂关节炎大鼠模型,将大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、地塞米松组(0.8 mg/kg)及中华跌打丸2.0、1.0、0.5 g/kg组,各组连续灌胃相应药物5周,1次/d。分别于给药后1、3、5周测量各组大鼠足趾容积,计算肿胀度;计算大鼠脏器指数,并采用HE染色观察关节软骨组织病理改变;免疫组织化学方法检测关节组织IL-1β、TNF-α、TGF-β表达。结果与对照组比较,中华跌打丸2.0 g/kg组大鼠足跖肿胀度降低(P<0.05),小鼠耳肿胀度降低(P<0.05),大鼠肉芽肿干重减轻(P<0.05);中华跌打丸1.4 g/kg组小鼠扭体次数减少(P<0.05),给药3 h后痛阈值升高(P<0.05);给药3~5周,中华跌打丸2.0 g/kg组大鼠足跖肿胀度降低(P<0.05),胸腺指数降低(P<0.05),关节组织中IL-1β、TNF-α和TGF-β表达降低(P<0.05)。结论中华跌打丸具有明显的抗炎镇痛作用,可通过降低IL-1β、TNF-α、TGF-β等炎症因子水平发挥对佐剂关节炎模型大鼠的治疗作用。

补阳还五汤调控急性心肌梗死大鼠血小板自噬保护缺血心肌的作用机制研究

该研究探究补阳还五汤对急性心肌梗死后血小板活化及差异基因表达的影响。将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药阿司匹林组和补阳还五汤组,预给药14 d,灌胃剂量为补阳还五汤1.6 g·kg^(-1)·d^(-1),阿司匹林0.1 g·kg^(-1)·d^(-1)。采用冠状动脉左前降支高位结扎方法构建急性心肌梗死模型,检测指标包括心肌梗死面积、心功能、心肌组织病理、末梢血流灌注量、血小板聚集率、血小板膜糖蛋白CD62p表达、血小板转录组学及差异基因表达量。结果显示与假手术组比较,模型组射血分数和心输出量显著降低,末梢血液流量减少,血小板聚集率增加,CD62p表达增多,血小板处于活化状态。同时血清TXB2含量上升,6-keto-PGF1α含量下降。与模型组比较,补阳还五汤增加射血分数和每搏输出量,改善足底和尾部血液循环和心肌细胞排列,减少心肌梗死面积和炎性浸润,降低血小板聚集率和CD62p表达,减少血清TXB2含量,增加6-keto-PGF1α含量。血小板转录组测序结果发现,补阳还五汤调控血小板mTOR-自噬通路相关基因。采用实时定量PCR实验对差异基因表达量进行检测,补阳还五汤上调mTOR,同时下调自噬相关FUNDC1、PINK,上调p62基因表达。结果表明,补阳还五汤可调控急性心肌梗死大鼠血小板活化,改善血液循环,保护缺血心肌受损,其机制与调控血小板mTOR-自噬通路有关。