+Gz重复暴露对大鼠脑组织c-fos、c-jun和神经生长因子基因表达的影响

为了解 +Gz重复暴露后大鼠脑组织 c- fos、c- jun和神经生长因子 (NGF)基因表达的变化 ,探讨它们在 +Gz所致脑损伤中的作用和意义 ,用半定量反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)检测方法检测 +Gz重复暴露后大鼠脑组织 c- fos、c- jun和 NGF m RNA表达水平。结果 c- fos和 c- jun在 +Gz重复暴露后 30 m in m RNA表达明显升高 ,6 h和 2 4h降至正常 ;NGF在 30 min和 6 h表达均明显升高 ,2 4h恢复正常。表明 +Gz重复暴露可诱导大鼠脑组织 c- fos、c- jun和 NGF m RNA的表达 ,提示它们的表达增加可能在

人睫状神经营养因子突变体基因克隆及高效表达

为了提高人睫状神经营养因子（ＣＮＴＦ）的生物学活性，用ＰＣＲ方法获取Ｎ端缺失１４个氨基酸的ＣＮＴＦ基因片段，经酶切鉴定、核酸测序证实突变体的核苷酸序列，将其重组至表达质粒ｐＢＶ２２０，构建了ＣＮＴＦ突变体表达载体ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ．用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其表达水平，鸡胚背根节无血清培养法检测表达蛋白的生物学活性．结果表明，ｐＢＶ－ＣＮＴＦΔ能表达生物学活性高于天然ＣＮＴＦ的约２６ｋＤ蛋白质，表达水平达３０％．为今后通过基因工程方法获得ＣＮＴＦ突变体，从而制备高效的ＣＮＴＦ制剂创造了条件．

+G_Z重复暴露对大鼠脑组织c-fos、c-jun和神经生长因子基因表达的影响

目的：为了解＋ ＧＺ 重复暴露后大鼠脑组织ｃｆｏｓ、ｃｊｕｎ 和神经生长因子（ＮＧＦ） 基因表达的变化，探讨它们在＋ ＧＺ 所致脑损伤中的作用和意义。方法：用半定量反转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ） 检测方法检测＋ ＧＺ 重复暴露后大鼠脑组织ｃｆｏｓ、ｃｊｕｎ 和ＮＧＦ ｍ ＲＮＡ 表达水平。结果：ｃｆｏｓ 和ｃｊｕｎ 在＋ ＧＺ 重复暴露后３０ ｍｉｎ ｍ ＲＮＡ 表达明显升高，６ｈ 和２４ｈ 降至正常；ＮＧＦ 在３０ ｍｉｎ 和６ ｈ 表达均明显升高，２４ ｈ 恢复正常。结论：表明＋ ＧＺ 重复暴露可诱导大鼠脑组织ｃｆｏｓ、ｃｊｕｎ 和ＮＧＦ ｍ ＲＮＡ 的表达，提示它们的表达增加可能在＋ ＧＺ 所致脑损伤中起病理或保护作用。

+Gz 重复暴露对大鼠脑组织热休克蛋白70 基因表达的影响(英文)

目的探讨＋ Ｇｚ 重复暴露后大鼠脑组织热休克蛋白７０（ Ｈ Ｓ Ｐ７０） 基因表达的变化及其在＋ Ｇｚ所致脑损伤中的作用。方法用半定量反转录聚合酶链反应（ Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ） 检测方法检测＋ Ｇｚ 重复暴露大鼠脑组织 Ｈ Ｓ Ｐ７０ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达水平。结果 ＋ Ｇｚ 重复暴露后３０ ｍｉｎ 、６ ｈ 大鼠脑组织 Ｈ Ｓ Ｐ７０ｍ Ｒ Ｎ Ａ 均有升高，分别是对照组的１ ．７ 倍和２ ．６ 倍，２４ ｈ 恢复正常。结论 ＋ Ｇｚ 重复暴露可诱导大鼠脑组织 Ｈ Ｓ Ｐ７０ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达， 可能与＋ Ｇｚ 所致脑损害后神经细胞的自身保护有关。

人血小板生成素基因cDNA克隆及分析

人血小板生成素基因ｃＤＮＡ克隆及分析李文，朱美财，蔡庆，陈友纯临床实验科孙曼霁军事医学科学院主题词血小板生成素，聚合酶链反应，ＤＮＡ，重组，碱基序列血小板生成素（ｔｈｒｏｍｂｏｐｏｉｅｔｉｎ，ＴＰＯ）是一种在细胞多层次水平上调节巨核细胞增殖、分化和成...

CD3^+、CD4^+和CD8^+T细胞Vβ亚家族中PD-1免疫表型检测方法的建立

目的:建立分析CD3^+、CD4^+和CD8^+T细胞Vβ亚家族中免疫抑制性受体程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)分子免疫表型的方法,从而了解人体外周血T细胞谱系中PD-1表型细胞的分布频率。方法:收集健康个体(HI)外周血10例,利用抗CD45、CD3、CD4、CD8、PD-1等多色荧光流式单抗,以及T细胞受体(TCR) Vβ谱系试剂盒[IOTestBeta Mark TCR VβRepertoire Kit,共8管,每一管均为FITC和PE偶联的复合抗体(A～H),每一管复合抗体包含3个TCR Vβ亚家族的抗体],检测T细胞亚群TCR Vβ亚家族中PD-1的分布情况。结果:在10例HI的检测中,CD3^+、CD3^+CD4^+和CD3^+CD8^+T细胞亚群中检测的24个TCR Vβ亚家族总和符合试剂盒所提供的Quick Reference Card数据,初步结果显示,HI中CD3^+T细胞主要优势TCR谱系是Vβ2、Vβ3、Vβ8、Vβ9、Vβ5. 1、Vβ13. 1和Vβ13. 2;而在CD3^+CD4^+T细胞中的优势利用主要集中在Vβ2、Vβ3、Vβ8、Vβ9、Vβ5. 1和Vβ13. 1;在CD3^+CD8^+T细胞中则主要为Vβ1、Vβ2、Vβ3、Vβ9、Vβ13. 1和Vβ13. 2等亚家族。进一步分析显示PD-1^+细胞在HI的CD3^+、CD3^+CD4^+和CD3^+CD8^+T细胞24个TCR Vβ亚家族中均可以检测到,PD-1^+细胞在T细胞各亚群中分布频率有个体差异,在CD4^+T细胞中,以Vβ5. 2^+T细胞的分布频率较高,而在CD8^+T细胞中,以Vβ11^+和Vβ13. 6^+T细胞的分布频率较高。结论:本项工作利用健康人样本成功建立了多色荧光流式细胞术检测T细胞亚群TCR Vβ谱系中免疫抑制性受体PD-1分子免疫表型的方法,为进一步应用于分析白血病等病人TCR Vβ谱系的免疫抑制特点提供了新方法。

粒细胞巨噬细胞集落刺激因子重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

本研究通过反转录PCR得到人GM-CSF基因片段后，通过重组pB220载体质粒的EcoRⅠ，BamHⅠ之间，构建了重组表达质粒phGM91。借助计算机分析，优化了构建质粒的转译起始区，采取定点诱变以消除SD序列和ATG区的强二级结构，提高了表达水平，将GM-CSF基因进行序列测定，与文献报导完全一致，所对应的氨基酸序列与天然氨基酸序列一致，将带有表达质粒phGM91的DH5α菌在42℃诱导，表达了预期的15KD的蛋白，约占菌体总蛋白的20%，并探讨了不同菌株对表达水平的影响，用MTT法测定所表达的GM-CSF生物活性，比活性可达到1×10^7IU/mg，表明所表达的GM-CSF具有生物学作用。

用逆转录聚合酶链反应分析北京地区不同人群丙型肝炎病毒基因型

为了解北京地区HCV感染的基因型及基因型与各种肝病的关系，利用逆转录聚会酶链反应（RT－PCR）检测了220例北京地区不同人群血清中HCVRNA，对43例阳性患者的PCR产物用限制性片段长度多态性（RFLP）进行分型，结果，40例（93．0％）为Ⅱ型感染，2例（4．7％）为Ⅲ型感染，1例（2．3％）为Ⅱ／Ⅲ型混合感染，表明北京地区以HCVⅡ型感染为主。

有机水稻栽培中不同施肥量的对比研究

通过进行不同施肥量的对比试验,结果表明,在有机水稻生产中,施肥量应控制在优质农肥2000～2500kg/667m^2、速效有机肥80～90kg/667m^2之间较为适宜。

辣根过氧化酶直接标记人巨细胞病毒DNA探针的制备和临床应用

用活化或根过氧化酶复合物直接标记人巨细胞病毒（HCMV）DNA特异片段制备酶标基因探针。与靶DNA杂交后酶催化检测系统中相应的发光剂，再经增强剂作用将光信号放大，杂交信号通过X光自显影。经决缝杂交证明该法标记的基因探针可检测到0．2Pg的同源DNA，且仅与HCMVDNA杂交，与HSV-1、EBV及正常人DNA不杂交。用此探针检测42例巨细胞包涵体（CID）患儿和20例正常同龄儿童尿中HCMVDNA，阳性率分别为550％和35％。与病毒分离相比较，杂交法敏感性为92．3％，符合率为87．1％，临床标本检出率高于病毒分离法，表明用HRP直接标记基因深外经化学发光自显影检测HCMVk安全、快速、敏感和特异的方法，适用于临床诊断和研究。

巢式聚合酶链反应检测幽门螺杆菌方法的建立及临床初步应用

在ＨＰ高度保守的尿素酶Ａ基因内合成两对引物，建立了巢式聚合酶链反应（Ｎ－ＰＣＲ）检测ＨＰＤＮＡ的方法，实验证明有很高的特异性和敏感性，与其它４株肠道菌无交叉反应，最小检出量为１ｆｇＨＰＤＮＡ。对Ｎ－ＰＣＲ反应体系中有关实验条件如Ｍｇ￣２＋浓度、引物浓度、复性温度等进行优化选择，并对酚／氯仿提取法和裂解粗提法两种标本处理方法进行了比较。用建立的Ｎ－ＰＣＲ检测３０例有上消化道症状患者的唾液及８例胃组织标本中ＨＰＤＮＡ，结果阳性率分别为５６．６７％和６２．５０％，５例胃组织标本阳性患者中４例唾液标本亦阳性。实验表明Ｎ－ＰＣＲ是一种敏感特异的检测方法，可用于唾液等标本中ＨＰ的检测。

+G_Z重复暴露对大鼠脑组织一氧化氮合成酶基因表达的影响

为了了解＋ ＧＺ 重复暴露后大鼠脑组织一氧化氮合成酶（ＮＯＳ）基因表达的变化，探讨＋ ＧＺ引起脑损害的分子机制，本文用建立的定量反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测方法检测＋ ＧＺ 重复暴露后大鼠脑组织内ＮＯＳｍ ＲＮＡ 表达的变化。结果＋ ＧＺ 重复暴露后 ３０ ｍ ｉｎ 和 ６ ｈ 大鼠脑组织ＮＯＳｍ ＲＮＡ明显升高，但 ２４ ｈ 时恢复正常，表明＋ ＧＺ 重复暴露可刺激大鼠脑组织 ＮＯＳｍ ＲＮＡ 的表达，ＮＯ可能参与了＋ ＧＺ 所致脑损害的病理过程，但这种损害是可逆的。

聚合酶链反应-酶谱法分型检测人疱疹病毒DNA方法的建立及应用研究

在疱疹病毒高度同源序列DNA聚合酶基因中设计一对引物，能对HSV－Ⅰ、HSV－Ⅱ、EBV和CMV4种疱疹病毒DNA进行扩增，继而用凝胶电泳和限制性内切酶BarnHⅠ或SmaⅠ酶切分析扩增产物进行鉴别，建立了能一次性分型检测上述4种病毒的POR－酶谱法。敏感性和特异性试验表明，灵敏度可测到1fgDNA，相当于6个病毒颗粒，且引物仅对4种疱疹病毒扩增。对影响PCR效果的有关因素如Mg2＋浓度、引物浓度、循环参数等进行了优化选择。用建立的PCR－酶谱法检测病毒性脑炎患者脑脊液和慢性宫颈炎患者宫颈分泌物中的疱疹病毒，取得较好结果。本方法的建立为疱疹病毒感染的临床早期准确诊断、药物疗效考核和流行病学研究等提供了有效的手段。

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及其临床意义

应用套式ＰＣＲ检测了８８例丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ；结果发现：慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙肝患者（Ｐ＜０．００１）；急、慢性丙肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性者（Ｐ＜０．００１）；少数患者血清中ＨＣＶＲＮＡ阴性，ＰＢＭＣ中可测及，部分患者血清抗一ＨＣＶ阴性，而血清ＨＣＶＲＮＡ阳性．提示：血清ＨＣＶＲＮＡ检测有助于抗－ＨＣＶ阴性丙肝的诊断和早期诊断；丙肝的肝损害可能与ＨＣＶＲＮＡ血症有关；ＰＢＭＣ中ＨＣＶ感染在丙肝的慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用；ＰＢＭＣ中可贮存ＨＣＶＲＮＡ。

人脑肿瘤组织中癌基因c-Ha-ras第12位密码子点突变的研究

人脑肿瘤组织中癌基因ｃ－Ｈａ－ｒａｓ第１２位密码子点突变的研究刘红巾，宋东林神经内科蔡庆，陈友纯临床实验科胡益云病理科主题词脑肿瘤，ｒａｓ基因，点突变，聚合酶链反应，限制片段长短的多态现象许多肿瘤的发生是由于其原癌基因ｃ－Ｈａ－ｒａｓ第１２位密码子发...

肠毒素大肠杆菌LTh-STIb二价基因探针的克隆及其应用研究

在肠毒素大肠杆菌（ETEC）LTh－STIa－STIb三价基因探针的基础上，用限制性内切酶EcoRI酶切，回收片段，重新构建LTh－STIb二价基因探针的克隆株。用辣报过氧化物防复合物（HRP）直接标记二价基因探针，建立了增强型化学发光反应（ECL）检测ETEC的方法，其敏感性可测到0．1pg的质粒DNA或由10个菌体培养而来的ETEC细胞，与同位素标记杂交方法的敏感性一致，且此探针仅与产STIb、LTh肠毒素的人源性ETEC菌株杂交，与STIa肠毒素菌株及其它非ETEC菌株均无杂交信号。该探针与三公探针及LTh单价探针联合使用，能间接将LTh、STIa和STIb三种肠毒素分型。结果表明该方法简便快速、特异敏感、无放射性污染，是ETEC实验室诊断及分子流行病学调查的有效工具。