灰树花子实体原基的感染细菌菌株的分离与鉴定

灰树花在子实体原基生长期间易受细菌感染,导致产量大幅下降。从被细菌感染的灰树花原基栽培袋中分离出4种具平板生长优势的病菌菌株,编号分别为wr1、wr2、wr3和wr4。通过对灰树花原基栽培袋的回接感染试验,结果表明wr4菌株感染灰树花原基与自然感染的状况一致,因此,认为wr4菌株是导致灰树花原基感染的主要菌株。进一步对该菌株的形态结构、生理生化试验以及16S rDNA序列的比对分析,确定wr4菌株为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。

SARS-CoV-2 δ变异株S抗原含量检测方法的建立及验证

目的 建立严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)δ变异株S抗原含量的检测方法,并进行验证。方法 采用δ变异株重组表达的受体结合域(receptor binding domain,RBD)蛋白分别免疫山羊和家兔,制备抗RBD多克隆抗体。以制备的两种抗RBD多克隆抗体为包被抗体和一抗,HRP标记的羊抗兔IgG抗体为酶标抗体,建立用于检测S抗原含量的双抗体夹心ELISA法。棋盘滴定法确定包被抗体和一抗,同时优化3种抗体稀释度。验证方法的准确性、精密性、线性范围及专属性。采用建立的方法检测SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及其中间品的S抗原含量。结果 兔抗RBD多克隆抗体及羊抗RBD多克隆抗体的效价分别为1∶32 000和1∶64 000,蛋白浓度分别为2.26和5.41 mg/mL。最佳包被抗体为羊抗RBD多克隆抗体,一抗为兔抗RBD多克隆抗体,包被抗体、一抗及酶标抗体最佳稀释度分别为1∶4 000、1∶8 000和1∶16 000。40、20、10 U/mL3种浓度S抗原内部参考品重复6次检测结果的回收率为83.5%~103.0%;重复6次测定3批SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液抗原含量的CV均<7.5%,2名实验员对3批上述疫苗原液重复检测3次结果的CV均<7.5%;S抗原含量理论值在10~40 U/mL范围内,与测定值呈良好的线性关系,线性回归方程为:y=0.942 3 x+0.049 2,R~2=0.995 4,定量限为10 U/mL;建立的方法与甲型肝炎灭活疫苗(人二倍体细胞)、四价流感病毒裂解疫苗、Vero细胞宿主蛋白、Vero细胞培养上清液等无交叉反应。SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及中间品3次检测结果的CV均<15.0%。结论 建立的双抗体夹心ELISA法具有良好的准确性、精密性、专属性,可用于SARS-CoV-2 δ株灭活疫苗(Vero细胞)原液及中间品中S抗原的定量检测。