Rac1小干扰RNA对胃肠道肿瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的观察Rac1小干扰RNA(Rac1 siRNA)对胃肠道肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法Rac1 siRNA在lipofectamineTM2000介导下转染胃癌SGC803细胞和结直肠癌Lovo细胞,转染48h后,采用半定量RT-PCR和Western blot技术分别检测Rac1mRNA及蛋白的表达;Cell Counting Kit-8检测Rac1siRNA转染细胞的增殖变化;损伤刮擦实验和体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力;用流式细胞仪检测转染细胞株的凋亡。结果成功转染Rac1 siRNA的肿瘤细胞,RT-PCR及Western blot显示Rac1 mRNA和蛋白表达在相应的肿瘤细胞中都明显下降;Rac1 siRNA对肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞的凋亡。结论Rac1与胃肠道肿瘤细胞的恶性生物学行为密切相关。Rac1 siRNA能够部分逆转胃癌细胞SGC803和肠癌细胞Lovo的恶性生物学行为。

人结直肠癌干细胞微球体培养及鉴定

目的探索结直肠癌细胞系干细胞微球体培养方法,并对Colo205细胞微球体是否具有肿瘤干细胞特性进行鉴定。方法结直肠癌Lovo、Colo205及SW480细胞在含生长因子无血清培养基(SFM)中悬浮培养。流式细胞术、裸鼠成瘤实验、Transwell小室实验分别检测Colo205细胞及其微球体表面标记分子CD133、CD44表达,体内成瘤能力和体外侵袭能力。微球体细胞在含血清培养基中贴壁培养后流式检测CD44分子表达变化。RT-PCR分析Colo205细胞及其微球体CD44、Musashi-1及Oct4 mRNA的表达。结果3种细胞系均能在特殊配制的SFM中形成可以稳定传代的微球体,SFM新鲜配制、用细胞分离剂Accutase替代胰酶传代以及保持细胞的悬浮状态均有利于微球体的形成和增殖。Colo205微球体中CD44+细胞比例显著增多,贴壁分化后逐渐减少至与Colo205细胞无明显差异。与Colo205细胞相比,微球体具有更强的侵袭能力和体内成瘤能力,并高表达干细胞标记分子Musashi-1及Oct4 mRNA。结论利用特制SFM悬浮培养可得到结直肠癌细胞系微球体,这种微球体富集了肿瘤干细胞。

Cdc42小干扰RNA对结肠癌细胞恶性表型的影响

目的研究细胞周期分裂蛋白Cell divisioncy cle42(Cdc42)小干扰RNA(siRNA)对人结肠癌细胞恶性表型的影响.方法Western blot检测五种结肠癌细胞系中Cdc42的表达。设计并合成靶向Cdc42编码区的三对siRNA及阴性对照RNA,应用LipofectamineTM2000分别转染结肠癌细胞系中高表达Cdc42的Lovo和SW620细胞,RT-PCR和Western-blot分别检测48h后Cdc42mRNA及蛋白的表达。Cell Counting Kit-8检测细胞的增殖能力,损伤刮擦实验和Transwell小室法分别检测细胞迁移与侵袭能力的变化。结果RT-PCR和Western blot检测显示,Cdc42-siRNA能显著下调Cdc42mR-NA和蛋白水平,尤其Cdc42-siRNA1;siRNA处理后的肿瘤细胞增殖受到抑制,细胞迁移、侵袭能力也显著降低。结论Cdc42-siRNA可有效抑制结肠癌细胞的增殖、迁移和侵袭。提示Cdc42可能成为抑制结肠癌细胞增殖和转移新的分子靶点。

酵母双杂交筛选原癌基因proto-Dbl的上游调控分子

目的探讨VL domain对Dbl癌基因活性的调控机制。方法本文通过酵母双杂交的方法 ,以proto-Dbl的VL domain为诱饵蛋白对人胎脑文库进行筛选。结果研究共获得7个能与VL domain相互作用的蛋白。结论 Proto-Dbl VL domain相互作用蛋白的发现将为揭示proto-Dbl的功能奠定基础。

一个新的与12位密码子共存的K-ras基因突变位点

目的:检测大肠癌组织中K-ras基因的突变情况以指导临床治疗。方法:通过提取15例大肠癌石蜡组织中的DNA并进行PCR扩增,之后采用国际金标准方法-直接测序法进行检测获得突变信息。结果:15例大肠癌石蜡组织样本中K-ras有4例发生突变,突变率为26.6%。值得注意的是发现一个新的突变位点-密码子42,并且与密码子12突变共存。结论:密码子42的突变进一步证明K-ras突变不仅局限于密码子12,13,61,还有与密码子12共存的42位突变。

基因芯片筛选结肠癌伊立替康耐药相关基因

目的应用基因芯片技术进行结肠癌伊立替康耐药相关基因表达谱差异分析,探讨伊立替康结肠癌耐药发生机制。方法分别抽提人结肠癌细胞系SW480及其伊立替康耐药细胞系SW480/CPT总RNA,逆转录合成相应以Cy3标记的cRNA做探针,在Agilent基因芯片上杂交,Axon4000B扫描仪扫描芯片荧光信号图像,Genepix3.0图像软件对扫描图像进行数字化处理和分析。利用RT-PCR对筛选出的部分差异表达基因进行验证。结果筛选出差异表达基因1598个,其中基因表达上调911个,基因表达下调687个。谷胱甘肽S转移酶同工酶(GSTA)家族GSTA1、GSTA2、GSTA3、GSTA5明显上调,锌指蛋白(ZNF)家族多个成员也有显著差异表达。结论基因芯片结果提示,GSTA与ZNF基因可能在介导伊立替康耐药过程中起着重要的调控作用。