人源MRTF-A重组腺病毒构建及其对平滑肌细胞小窝蛋白表达的影响

目的探讨心肌素相关转录因子(MRTF)-A对膀胱平滑肌细胞小窝蛋白(caveolin)及小窝关联蛋白(cavin)表达的影响,有望为膀胱出口梗阻所致膀胱壁病理改变提供新的治疗靶点。方法首先从人源MRTF-A表达质粒pcDNA3.1-MRTF-A-3flag扩增MRTF-A基因序列并构建重组穿梭质粒AdEasy-h-MRTF-A,将成功构建的MRTF-A穿梭质粒与骨架质粒pHBAd-BHG共转染HEK293细胞通过AdEasy系统实现重组,获得HBAd-h-MRTF-A毒种后继续扩增、纯化及滴度测定。然后将正常构建的HBAd-h-MRTF-A重组腺病毒(MRTF-A组)与空载腺病毒(空载组)分别感染人膀胱平滑肌细胞,RT-qPCR检测两组细胞caveolin-1(CAV1)及cavin-1(CAVIN1)的mRNA表达水平,Western blot检测两组细胞MRTF-A、caveolin-1及cavin-1的蛋白表达水平。结果经测序分析验证重组腺病毒HBAd-h-MRTF-A含有正确的MRTF-A基因序列,其在人膀胱平滑肌细胞中过表达的蛋白在大约145 kDa水平可被MRTF-A特异性抗体所识别。与空载组相比,MRTF-A组CAV1的mRNA表达水平上调1.90±0.26倍;CAVIN1的mRNA表达水平上调1.77±0.12倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。同样,与空载组相比,MRTF-A组的caveolin-1蛋白表达水平上调1.84±0.31倍;cavin-1的蛋白表达水平上调2.14±0.28倍,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建人源MRTF-A重组腺病毒载体HBAd-h-MRTF-A;且过表达MRTF-A可促进膀胱平滑肌细胞caveolin-1及cavin-1的表达;MRTF-A可能成为调控平滑肌细胞小窝结构的重要靶点。