达格列净对1型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及机制研究

目的:探讨达格列净对1型糖尿病小鼠心肌损伤的影响及机制研究。方法:正常C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常对照组(Control)、糖尿病心肌病组(DCM)和达格列净组(DAPA)。应用链脲佐菌素(STZ)诱导并给予维持饲料联合构建糖尿病模型。DAPA组给予10 mg·kg-1·d-1的达格列净灌胃,Control组与DCM组给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃。干预8周后,应用超声机来检测各组心功能;乳酸脱氢酶(LDH)检测心肌损伤;HE染色观察心脏形态;Masson、天狼星红染色观察心脏纤维化程度;TUNEL检测心肌凋亡;免疫组化检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin胶原表达情况;qPCR法检测Caspase-1、GSDMD、α-SMA、Fibronectin的mRNA基因表达含量;Western blot法检测心肌焦亡及纤维化相关蛋白NLRP3、Caspase-1、GSDMD、Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin、IL-18蛋白表达水平。结果:与Control组比DCM组表现出异常超声心动图表征,血清乳酸脱氢酶升高,心脏组织结构异常,肌纤维排列紊乱,见明显的纤维增粗、断裂。心肌组织中凋亡染色强度增加,相关焦亡指标NLRP3、Caspase-1、GSDMD基因和蛋白表达升高,纤维化指标Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、α-SMA、Fibronectin基因和蛋白表达升高。而DAPA组减弱了先前提到的参数的改变。结论:达格列净可以改善心肌纤维化及心肌焦亡程度从而改善糖尿病导致的心肌损伤。

miR-200b在糖尿病并发症中的研究进展

近年来,全球糖尿病患者数量不断增加,糖尿病所致慢性并发症是糖尿病致死的重要因素。大血管病变(如糖尿病心肌病)和微血管并发症(如糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变)导致糖尿病患者病死率以及失明和肾衰竭发生率升高,患者整体生活质量降低,严重威胁人类的生命健康。miR-200b在糖尿病并发症中起重要作用,不同类型糖尿病并发症中的miR-200b表达亦不同。miR-200b通过作用于不同靶点影响不同的信号途径,进而影响机体对疾病的调控。未来miR-200b可能成为糖尿病及其并发症诊断和治疗的新靶点。

非编码RNA在糖尿病性心肌病中的研究进展

近年来,糖尿病在我国已成为严重的代谢性疾病之一。糖尿病引发的并发症是致死的重要因素,威胁着人类的生命健康。糖尿病性心肌病(Diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病并发症之一,其特点是心肌纤维化、心脏功能不全等。目前已经有了研究探索其分子机制、结构和功能的变化,以及用于治疗和预防DCM的治疗的方法,据一些研究发现非编码RNA参与氧化应激、心肌纤维化、RAS系统的调控等方面进而影响糖尿病性心肌病的发展。本综述选取了较典型的非编码RNA在糖尿病性心肌病中的最新研究进展,为后续疾病诊疗的发展提供有效的理论依据。

GPX3过表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移的影响

目的探讨谷胱甘肽过氧化物酶3(glutathione peroxidase 3,GPX3)过表达对甲状腺乳头状癌细胞(BCPAP)增殖、迁移的影响。方法培养人甲状腺乳头状癌BCPAP细胞,利用MOI值为10的过表达GPX3慢病毒和空载慢病毒转染BCPAP细胞株,72 h后用共聚焦显微镜观察慢病毒转染细胞的效率,并分为二组:空载转染组(NC-BCPAP组)和GPX3转染组(GPX3-BCPAP组);qRT-PCR检测GPX3表达以及Caspase-3表达情况;CCK-8法及BeyoClick EdU-555检测细胞增殖情况;划痕实验检测细胞的迁移能力。用SPSS 22.0统计软件分析处理,实验重复3次。结果转染72 h后利用共聚焦显微镜观察BCPAP细胞中绿色荧光证明转染成功。采用qRT-PCR检测表明GPX3-BCPAP组细胞的GPX3表达明显高于NC-BCPAP组(P<0.001),与NC-BCPAP组细胞相比,GPX3-BCPAP组细胞中Caspase-3表达水平较高,表明过表达GPX3可能促进细胞的凋亡能(P<0.005)。采用CCK-8及BeyoClick EdU-555检测表明与NC-BCPAP组细胞相比,GPX3-BCPAP组细胞的增殖能力受到明显抑制(P<0.05)。采用划痕实验表明与NC-BCPAP组细胞相比,GPX3-BCPAP组细胞的迁移能力受到明显抑制(P<0.05)。结论GPX3在抑制BCPAP细胞的增殖、迁移起到关键作用。

MicroRNA在特发性肺纤维化中作用的研究进展

MicroRNA(miRNA)是一类进化保守的非编码单链RNA分子,通过转录后调控基因的表达。多数miRNAs主要通过与目标mRNA的3′-UTR结合阻断其翻译过程或使其降解,从而影响细胞的增殖和分化以及蛋白质的产生。大量的研究表明miRNA在肺组织纤维化中发挥重要作用,miRNA的特异性表达能够促进或抑制特发性肺纤维化的发生以及发展。近年来,miRNA已成为特发性肺纤维化诊断和治疗的研究热点。本篇综述将会从miRNA在特发性纤维化各发病机制中的作用进行阐述。

非编码RNA在肝纤维化中的研究进展

肝纤维化(Liver fibrosis)是一种以维持机体器官完整性为目的的可逆性伤口愈合过程,是转变成肝硬化重要的前期过程,如果未得到及时治疗或干预最终将发展为肝癌。肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)在肝纤维化的发生发展中起着关键作用,HSCs的活化是肝纤维化发生的主要驱动力。近年研究表明非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)在肝纤维化发生发展中发挥重要作用,明确ncRNA在肝纤维化发生过程中的作用机制,有助于丰富肝纤维化作用机理,并为其治疗提供依据。因此,本文对ncRNA在肝纤维化的作用机制进行了阐述。

TGF-β潜态相关肽编码序列的原核表达载体构建及表达产物的纯化与鉴定

转化生长因子β(TGF-β)是促肝纤维的细胞因子,TGF-β潜态相关肽(LAP)和TGF-β的活化有关。本研究提取人血液中总RNA,逆转录转为c DNA,以此为模板PCR目的片段,构建原核表达载体pET28a-LAP-B、pET28a-LAP-F,并在不同诱导温度、IPTG浓度、诱导时机下进行诱导表达,筛选最佳诱导条件,通过镍琼脂糖亲和层析纯化重组蛋白,获得的蛋白通过SDS-PAGE及Western blot鉴定,并检测重组蛋白的浓度。结果表明,LAP全长及截短型原核表达载体构建成功,筛选最佳诱导条件为37℃培养4 h,OD_(600)值为0.8时降温至16℃,加入0.3 mmol/L(LAP-B)/0.45 mmol/L(LAP-F)IPTG诱导16 h,大量培养后通过镍柱纯化和透析得到重组蛋白,经SDS-PAGE及Western blot鉴定为LAP全长及截短型重组蛋白,并测得LAP-B、LAP-F重组蛋白浓度分别为637.6μg/mL、126.6μg/m L。本实验成功得到LAP全长及截短型重组蛋白,为研究LAP对TGF-β促纤维化作用的影响提供了实验基础。