一例β55Met·O血红蛋白的结构分析

将山东省招远市一慢电泳异常血红蛋白（ Ｈｂ）先证者血及正常人血分离纯化出珠蛋白，脲处理解链，再层析分离并纯化出正常及异常 β链．经胰蛋白酶水解，所得肽片段用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ 分出酶解物中异常肽，此肽经氨基酸组成及顺序测定，表明它同于正常 β链的十九肽 β４１→５９；异常肽不被 Ｃ Ｎ Ｂｒ 作用，将它与正常十九肽通过质谱仪测定质荷比．结果说明异常肽的 β５５ Ｍ ｅｔ转变为亚砜型的 β５５ Ｍ ｅｔ· Ｏ，这转变是此异常 Ｈｂ 变异的一级结构基础．

农甲氮氧化物及农甲吡咯衍生物半合成研究

用过氧化氢氧化纯农吉利甲素,再用过氧化氢酶分解剩余的过氧化氢,结果制备出含一分子结晶水的农甲氮氧化物(MNO·H_2O).直接用醋酸酐作用于MNO,在纯N_2条件下可制备出浅黄色晶体,经熔点、紫外光谱、质谱分析及元素分析等实验证实为农甲吡咯衍生物(MPD).

招远市异常血红蛋白的分子结构

①目的 了解发现于招远市异常血红蛋白的分子结构。②方法 纯化的异常β链经胰蛋白酶水解,用高效液相层析仪、质谱仪分析水解得到的肽。③结果 异常β链中肽Ⅱ取代正常β链的肽Ⅰ、肽Ⅰ、Ⅱ均为19肽,氨基酸序列与正常β链41—59相同。采用溴化氰分别处理肽Ⅰ或肽Ⅱ,肽Ⅱ的β55Met不反应。质谱分析结果表明,肽Ⅰ质荷比为1030峰,而肽Ⅱ,由质荷比为1038的峰替代肽I的1030峰。④结论招远市发现的异常血红蛋白有异常β链,其分子结构的异常是β55Met转变为羟基化蛋氨酸所致。

椎间盘髓核与纤维环中蛋白多糖的研究

测定新生儿、正常及退变椎间盘髓核和纤维环中的生化成份，结果显示；髓核的糖醛酸，总己糖胺均高干纤维环；在正常和退变的椎间盘，纤维环的羟脯氨酸明显高于髓核的含量；新生儿及正常组，髓核中葡萄糖胺与半乳糖胺含量之比均低于纤维环中二者之比。新生儿及退变髓核中蛋白质与糖醛酸之比均明显低于纤维环中二者之比，但退变椎间盘髓核与纤维环中蛋白质与糖醛酸之比均较新生儿与正常组高得多。表明髓核与纤维环中蛋白多糖的组成和含量均有明显不同。各组之间也存在明显不同，这些变化影响髓核和纤维环的结构和功能。可能是导致椎间盘突出的物质基础。

正常与退变椎间盘髓核和纤维环中生化成份的研究

本工作测定了椎间盘的髓核和纤维环中的生化成份,结果提示在退变的椎间盘中,糖醛酸,总己糖胺、半乳糖胺均明显下降,而羟脯氨酸的含量明显增加。在退变的纤维环中尚有组成硫酸角质素的主要成份葡萄糖胺量的明显下降。在退变的髓核和纤维环中,总蛋白质含量呈增加趋势,水的含量呈下降趋势。提示退变椎间盘中蛋白多糖含量降低,组成改变及胶原蛋白的增加可能是诱发椎间盘突出症的物质基础。

正常椎间盘胶原的研究

腰椎间盘突出症是引起腰腿痛常见的原因。胶原作为椎间盘结构的主要成分,构成椎间盘的纤维框架,其类型与分布直接决定着椎间盘结构的强度和功能的稳定。本文利用溴化氰消化椎间盘胶原产生多肽,借助于梯度层析。SDS-PAGE及光密度定量扫描等对正常人椎间盘胶原进行了研究。结果表明:正常人椎间盘含Ⅰ型及Ⅱ型两种胶原,它们的分布呈明显而特征性的移行性变化:纤维环外层边缘以Ⅰ型胶原为主(83％),由外向内Ⅰ型胶原逐渐移行为Ⅱ型胶原,靠近髓核处以Ⅱ型胶原为主(72％);髓核中心含有Ⅱ型胶原。此为椎间盘的一个结构特性,以满足椎间盘的特殊功能的需要。

突出腰椎间盘胶原的定量研究

目的 探讨椎间盘中胶原的变化与腰椎间盘突出症的关系。②方法 利用溴化氰 (CNBR)消化椎间盘胶原产生多肽的方法 ,借助于梯度层析和氨基酸分析对突出和正常椎间盘胶原对比分析。③结果 突出椎间盘纤维环Ⅰ型与Ⅱ型胶原比值较正常纤维环高 (t=7.93,P <0 .0 1) ,突出髓核中出现Ⅰ型胶原 ,而Ⅱ型胶原相对含量无明显变化 (t=0 .31,P >0 .0 5 )。④结论 椎间盘胶原的变化为腰椎间盘突出症的重要病理基础之一。

酮体生成和利用定量实验方法的建立

以丁酸钠为作用物,利用组织切片培养法,建立了定量测定酮体生成和利用的实验方法。实验的最适条件是:大鼠饥饿48小时;气温10～20℃,以15℃为宜;丁酸钠浓度0.75mol/L;37℃恒温振荡培养时间4小时。依此,可定量测定肝脏生成或其它组织利用的酮体量。

血酮体定量及其临床应用

建立了一种血酮体定量方法。测定的最适条件是,硫酸浓度为9mol/L;高锰酸钾浓度为5%(170mmol/L);沸水浴加热时间20min;比色波长420nm。应用本法测定了25例正常人和60例糖尿病人血酮体量。糖尿病人血酮体量明显升高(P<0.001),Ⅰ型与Ⅱ型糖尿病人血中酮体量亦有显著的差别(P<0.001)。血酮体的定量测定有助于临床糖尿病的分型。

新生儿椎间盘中蛋白多糖的研究

本实验对6例新生儿椎间盘的髓核和纤维环中的生化成分进行了研究.结果表明髓核中糖醛酸、半乳糖胺、总己糖胺的含量明显高于纤维环中的含量.葡萄糖胺的含量在髓核与纤维环无显著差异.蛋白质的含量在髓核较纤维环中低.髓核中的糖醛酸与蛋白质之比及硫酸软骨素与硫酸角质素之比均高于纤维环中.提示椎间盘的髓核与纤维环中蛋白多糖的组成和含量均存在着明显差异.

人脑CK-BB单抗与急性心梗关系的研究

应用纯化的人脑肌酸激酶(CK-BB、EC2、7、3、2)做为抗原免疫BALB/C小鼠后,取其脾细胞与瘤细胞融合,筛选得到稳定产生单克隆抗体的细胞株。将N5H6细胸株产主的单抗纯化后与辣根过氧化物酶偶联成为酶标抗体(N5H6-E)。用N3Al细胞株产生并纯化的单抗包被酶标板,应用酶联免疫吸附测定夹心法以检测临床AMI等病人血清中是否有CK-BB的B亚基抗原存在,以研究此法对AMI等心脏疾病关系的意义。 1 材料与方法 1.1 人脑CK-BB单抗的纯化及酶标单抗 青岛医学院生化教研室提供。

血清肌酸激酶B亚基含量与肌酸激酶活力在不同心脏疾患中的动态变化

目的 观察血清肌酸激酶B亚基含量与肌酸激酶(CK)活力在不同心脏疾患中的动态变化及临床意义。方法 应用ELISA法测定肌酸激酶B亚基含量和肌酸激酶活力 ,常规检测心电图及其它生化指标。结果 急性心肌梗塞 (AMI)患者CK活力均高于正常值 ,随病情发展而变化 ,B亚基含量可呈单峰或双峰 ,并与CK活力呈相关性 ,慢性肺心病急发期B亚基含量亦高于正常人 ,且与PaO2 、PaCO2 呈相关性。结论 测定肌酸激酶B亚基含量及CK活力的动态变化对AMI及慢性肺心病诊断。

急性心梗患者血清中B亚基量与肌酸激酶活力的动态关系

AMI是中老年人的多发病,临床上以检测肌酸激酶(CK)和心肌型肌酸激酶(CK-MB)活力作为诊断、治疗的指标之一,本文报道应用曹岩等方法制备脑型肌酸激酶(CK-BB)的单克隆抗体,进行临床研究及建立双抗夹心式ELISA法,以测定样品中肌酸激酶的B亚基含量。对AMI患者,为进一步认识其血清中CK-MB的B亚基量与酶活力的动态关系,探讨其临床意义而进行本研究。 1 资料与方法 1.1 病例选择 为本院心内科住院及符合WHO诊断标准的AMI患者32例,男22例,女10例,年龄40～80岁,平均67岁。

肌酸激酶及其单克隆抗体的应用前景

肌酸激酶(Creatine Kinese,CK)催化如下反应:Creatine+MgATP^(2-)(?)phosphocreatine^(2-)+MgADP^-+H^+。肌酸激酶与哺乳动物能量代谢密切相关,它参与糖酵解的控制、线粒体呼吸和肌肉收缩供能,并与脑突触膜ATP依赖性神经递质释放有关。

酶联免疫吸附法检测肌酸激酶B亚基含量

1目的 建立酶联免疫吸附法 (EL ISA)检测肌酸激酶 B亚基含量。 2方法 应用脑肌酸激酶抗原制备单克隆抗体 ,采用对酶活力具有激活或抑制的单克隆抗体配对建立 EL ISA法 ,并应用其检测肌酸激酶 B亚基含量。 3结果 肌酸激酶 B亚基含量在 0 .0 5～ 5 0 .0 0 ng间与 A45 0 nm呈半对数直线关系。 4结论 采用建立的 EL ISA法可测定肌酸激酶

成石前后胆囊粘膜上皮多聚核蛋白体RNA含量变化—胆液糖蛋白和蛋白质增加的机制探讨

胆囊淤泥是胆囊结石的前身。测定胆囊粘膜上皮游离(FPR)和结合多聚核蛋白体(MBPR)的RNA含量及胆液粘液糖蛋白(MGP)的结果表明:胆囊淤泥患者胆囊粘膜合成和分泌MGP明显亢进,MBPR与相应GB中MGP的相关性比较提示此时尚有胆液淤积存在,且FPR的RNA含量也显著增高,提示细胞增殖加快。荧光胺法测定胆液蛋白质的含量发现,胆囊淤泥和胆固醇性结石患者胆囊液GB蛋白质含量显著高于色素性结石患者及“正常”对照,但蛋白质的GB浓度与HB浓度的比值显著低于胆固醇GB/HB比值,且GB中MGP与蛋白质含量呈显著正相关。说明蛋白质含量的增加与GB中过高的MGP阻止胆囊中蛋白质的清除过程有关。成石前GB中MGP和蛋白质含量的同时增高及其机制的确立,对认识及预防体内结石均有意义。

佝偻病患儿血清碱性磷酸酶及其同工酶的研究

将52名0～3岁佝偻病患儿和58名健康几分成5组,测定其血清总碱性磷酸酶(t-ALP)活性,并对血清ALP同工酶进行分析.佝偻病患儿血清t-ALP随着年龄增长而逐渐降低,t-ALP患儿组明显高于健儿组(P<0.01);56℃15min热灭活剩余酶活性,患儿组明显低于健儿组(P<0.01),也低于骨型ALP.增高的诊断指标≤12.7%.0.01mol/LL-本丙氨酸对血清ALP的抑制,患儿组和健儿组无显著性差异(P>0.05);3mol/L脲对血清ALP的抑制影响,0～1.5岁三个年龄组存在显著性差异(P<0.05),而1.5～3岁二个年龄患儿组与健儿组无显著性差异(P>0.05);根据电泳迁移率Rf值,得出主带是骨型ALP.凝胶光密度扫描结果认为主带面积,患儿与健康儿无差别(P>0.05).佝偻病患儿血清t-ALP增高是由骨型ALP引起的.

小牛肠碱性磷酸酶激活与抑制的动力学观察

应用磷酸苯二钠法观察了某些羟基化合物、氨基酸对小牛肠碱性磷酸酶（ＥＣ３．１．３．１）活力的影响。结果表明，葡萄糖、蔗糖、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺是其激活剂；而丙氨酸（Ａｌａ）、羟脯氨酸（Ｈｙｐ）、丝氨酸（Ｓｅｒ）、苏氨酸（Ｔｈｒ）、谷氨酸（Ｇｌｕ）、精氨酸（Ａｒｇ）、苯丙氨酸（Ｐｈｅ）是其抑制剂。应用双倒数作图法对其抑制类型和抑制常数Ｋｉ进行了测定，同时也测定了Ｎａ２ＨＰＯ４，ＮａＨ２ＰＯ４的抑制类型和抑制常数Ｋｉ．结果表明，Ｐｈｅ为其反竞争性抑制剂；其他氨基酸均为非竞争性抑制剂；而Ｎａ２ＨＰＯ４，ＮａＨ２ＰＯ４为其竞争性抑制剂。并对其激活与抑制的机理进行了讨论。

人脑肌酸激酶单克隆抗体的制备及鉴定

用事故死亡者脑组织中提纯的人脑肌酸激酶（ＣＫ－ＢＢ）对ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠进行免疫，应用杂交瘤技术将免疫小鼠脾细胞分别与２种骨髓瘤细胞（ＮＳ－１，６５３）融合，筛选得到８株能稳定分泌ＩｇＭ抗体的杂交瘤细胞。对分泌抗体经酶联免疫电泳转移试验（Ｗｅｓｔ－Ｂｌｏｔ）进行了鉴定，其中４种抗体能特异地与ＣＫ－ＢＢ的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳带结合。提示这些单克隆抗体有可能应用于肌酸激酶的结构功能研究和临床检验中。

腰段椎间盘不同节段不同区域的胶原定量研究

以４具新鲜尸体椎间盘为标本，以胶原蛋白分解产生特有的羟脯氨酸为指标，对正常人椎间盘不同区域胶原含量进行了对比分析。结果表明：胶原含量纤维环明显高于髓核（Ｐ＜０．００１）；纤维环内层低于外层（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．００１）；后外侧低于前外侧（Ｐ＜０．０５）；特别是后外侧内层胶原含量明显降低（Ｐ＜０．００１）。作者认为这可能是临床上后外侧型腰椎间盘突出症的重要原因之一。从Ｔ＿（１２）至Ｌ＿１胶原含量有逐渐增加趋势，但无统计学差异（Ｐ＞０．０５）。