RBSDV在玉米叶脉细胞内的侵染状态与灰飞虱传毒活力的关系

根据水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)侵染玉米(Zea mays L.)的症状发展过程先后取叶脉做超薄切片,在透射电镜下观察病毒在细胞内的侵染状态,并在取样前用灰飞虱无毒若虫进行饲毒和传毒试验。结果显示RBSDV侵入玉米叶细胞后先出现在细胞壁附近,个别粒子似与胞间连丝相连;细胞质内产生病毒基质,病毒粒子先增殖并分布其周边,后向病毒基质内扩展;当病毒粒子布满病毒基质后在细胞质中出现直径约90nm的管状结构,病毒成串排列在该管状结构中;随后管状结构逐渐消失,最终形成晶格状聚集排列。用灰飞虱无毒若虫在细胞内病毒基质出现和病毒增殖期饲毒的,到成虫时分别有2.93%和7.83%个体传毒率;在细胞内病毒成串分布于管状结构和晶格状聚集排列期饲毒的,到成虫时均不能传毒。

水稻黑条矮缩病在浙中的回升流行原因分析

通过对浙中地区水稻黑条矮缩病的调查观察 ,初步探明该病回升流行原因主要是由于熟制改变、稻板麦的推行。

温州市郊杂交水稻矮化病研究——Ⅰ.传播介体、寄主、症状及病原形态

从温州市杂交晚稻矮化病病株上分离到一种病原,能由灰飞虱持久传播,非经卵传染;在20～33℃下的循回期为8～23天;寄主有水稻、玉米、大麦和小麦等,发病后均表现为植株矮缩、色泽浓绿、叶片僵直,在水稻和玉米病株的叶背、叶鞘和茎秆上产生粗条状脉肿,先蜡白色而后变黑褐色;取病稻汁液于电镜下观察到直径为75～80nm的球状颗粒;在玉米脉肿的超薄切片里显示直径为75～80nm的球状颗粒,中央区电子密度高,周围有20～25nm厚的透明圈,散生于细胞质里,呈串状排列于管状结构中或呈晶格状排列。这些结果表明它是水稻黑条矮缩病毒。

水稻病毒病发生现状及研究进展

水稻病毒病发生现状及研究进展陈声祥（浙江省农科院病毒实验室３１００２１）水稻上发生的病毒病国际上已鉴定１５种，我国发生的有１０种。水稻病毒病对稻米生产危害较大，根据国际研究报道（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｔ．Ｍ．Ａ，１９９４），１９９２年仅３种水稻病毒病对世界水...

应用RT-PCR方法检测水稻植株和介体昆虫体内的水稻齿叶矮缩病毒

将生物学接种和 RT- PCR检测水稻植株体内的水稻齿叶矮缩病毒的方法进行了比较 ,发现结果基本趋于一致 ,但总体上 RT- PCR检测阳性率稍高于生物学接种的发病率。将生物学接种检测褐飞虱介体内水稻齿叶矮缩病毒方法与 RT- PCR检测方法进行比较分析 ,发现 RT- PCR方法可以检测单头褐飞虱体内的水稻齿叶矮缩病毒 ,具有很高的准确性和灵敏度。

转基因水稻对水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)抗性评价

采用人工繁殖带毒褐飞虱（ Ｎｅｌａｐａｒｖａｔａ Ｌｕｇｅｎｓ） 攻毒接种，结合症状观察和ＲＴＰＣＲ 检测方法，对５７ 个含有水稻齿叶矮缩病毒（ＲＲＳＶ） Ｓ７ ，Ｓ９ 和Ｓ１０ 基因片段的转基因水稻对水稻齿叶矮缩病毒的抗性进行了评价。总体而言，大多数转基因稻发病率比受体品种的发病率要低。从中初步得到对ＲＲＳＶ 具有较强抗性的水稻转基因系３１５ 和３１６ ，其发病率分别为１５ ．８ ％ 和１３ ．３ ％ ；具有中等抗性的水稻转基因系１８４ 和３２８ ，发病率分别为２６ ．９ ％ 和２８ ．０ ％ ；而对照受体品种和当地感病品种的发病率则分别为１００ ％ 和８４ ．２ ％ 。将ＲＴＰＣＲ 的方法用于转基因稻抗性的检测，可提高检测的灵敏度。

浙江和河北发生的一种水稻、小麦、玉米矮缩病是水稻黑条矮缩病毒引起的(英文)

以浙江省的水稻黑条矮缩病和河北省的玉米粗缩病的病毒分离物为材料 ,对我国南北方两种病毒分离物进行了比较研究。两种病毒分离物的粒子大小形态相似 ,且在血清学上密切相关 ;二者的介体、寄主相同 ,并引起相同的症状。提纯两种病毒分离物的基因组片段凝胶电泳显示它们相应的基因组片段之间大小极其相似。根据水稻黑条矮缩病毒 (Riceblackstreakeddwarfvirus) ,RBSDV的S7和S8设计引物 ,利用RT PCR技术 ,在两种病毒分离物中均可特异扩增到预期大小的片段。序列测定比较分析表明 :它们的同源性达 97.0 %～ 98.9% ,与日本RBSDV的同源性 (92 .2 %～ 95 .5 % )高于与意大利MRDV的同源性 (76 .6 %～ 88.4% )。从而认为我国南方的水稻黑条矮缩病和北方和玉米粗缩病都是同一种病毒———RBSDV引起的 ,也就是说我国北方的玉米粗缩病病原实际上是水稻黑条矮缩病毒 ,而不是玉米粗缩病毒。

胶体金免疫电镜技术检测和鉴定病汁液中不同形态的植物病毒

本文报道胶体金免疫电镜技术的建立:铜网捕获病毒后,用其稀释约200倍的同源抗血清修饰处理3～5分钟,羊抗兔IgG-金复合物标记3～5分钟,经磷钨酸负染,电镜下可见病毒粒子周围金颗粒特异性吸附,而背景上非特异性吸附很少。用此技术成功地快速检测和鉴定了病汁液中线状病毒(大麦黄花叶病毒,大麦温和花叶病毒,小麦梭条斑花叶病毒,芜菁花叶病连和马铃薯Y病毒)、棒状病毒(烟草花叶病毒、长叶车前草花叶病毒和土传小麦花叶病毒)以及球状病毒(水稻矮缩病毒、黄瓜花叶病毒和大麦黄矮病毒)。用0.5M PBSpH7.0制备病汁液,可大幅度提高同源抗血清对黄瓜花叶病毒的捕获能力。

水稻黄矮病毒的纯化和病毒蛋白质及RNA组分的分析

从人工接种水稻黄矮病毒(Rice yellow stunt virus,RYSV)的水稻茎杆中提取到部分纯化的RYSV制品。分析了RYSV的蛋白质组分,表明它的结构蛋白含有L(170k)、G(84k)、N(60k)、M1(31k)、M2(29.5k)和一个分子量为42k的蛋白,并测定了G蛋白氨基末端的部分氨基酸序列。经测定,RYSV RNA的分子量约为12kb。

抗水稻条纹叶枯病毒核酶的设计、克隆及体外活性测定

为探索控制水稻条纹叶枯病毒（Ｒｉｃｅｓｔｒｉｐｅｖｉｒｕｓ，ＲＳＶ）设计合成了特异切割该病毒ＲＮＡ保守区及编码病害特异性蛋白（ＤｉｓｅａｓｅＳｐｅｃｉｆｉｃＰｒｏｔｅｉｎ，ＤＳＰ）基因的核酶，核酶基因的长度均为４０个碱基，用化学合成方法合成其正链及与其３＇－末端互补的１５个碱基引物，用ＴａｇＤＮＡ多聚酶合成其互补链。双链ＤＮＡ直接插入克隆载体ＰＧＥＭ３ｚｆ（＋）的Ｓｍａｌ位点。序列测定表明，克隆得到的核酶序列与设计的核酶序列完全一致。经ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶体外转录得到核酶ＲＮＡ。当核酶ＲＮＡ与以同样方法转录得到的靶基因ＲＮＡ混合反应，可得到预期结果相同的切割片段，表明两种核酶在体外均具有特异性切割活性。

用含水冷冻电镜技术测定的水稻矮缩病毒的三维结构

用含水冷冻电镜技术和计算机数据处理方法分别测定了水稻矮缩病毒（ＲＤＶ）完整颗粒和只含内壳层的颗粒的三维结构，其分辨率分别为２．６ｎｍ和３．３ｎｍ。从完整颗粒的结构中可以清晰地看到它的外壳层和内壳层的双层结构及其内部的ＲＮＡ或非结构蛋白质的电子密度。完整颗粒和内壳层的直径分别为６９．８ｎｍ和５４．０ｎｍ，外壳层和内壳层的厚度分别为６．９ｎｍ和２．５ｎｍ。外壳层表面的三角形剖分数Ｔ＝１３。外壳层由２６０个衣粒（三体）组成，因此共有７８０个蛋白质亚基。外壳层和内壳层上均有许多通道。内外壳层之间以及外壳层的衣粒之间是以一种十分新颖的联锁方式相互连接的。

水稻黄矮病的研究概况及最新进展

1957年,广东省水稻上发生了一种稻叶发黄的病害,其症状与生理性早衰的稻叶发黄相似,当时被称为生理性黄叶枯病。经过十来年的研究,1965年范怀忠等证实该病为叶蝉传播的病毒病。

水稻黄矮病毒结构蛋白的分离及其小鼠腹水抗体的制备

从人工接种感染黄矮病毒(Rice Yellow Stunt Virus,RYSV)的水稻茎杆中提取得到了部分纯化的RYSV制品,病毒制品经Tricine-SDS-PAGE得到分子量分别为84 kD,60 kD,31 kD和29.5 kD的4条主要蛋白带和分子量为170kD和43kD的两条次要蛋白带。根据弹状病毒结构蛋白命名法,按分子量大小依次命名为L,G,N,NS,M_1和M_2蛋白。从电泳凝胶上切下G和N蛋白带,制成抗原免疫BALB/C小鼠;制得G和N蛋白小鼠腹水抗体。经Dot-blot试验测得N蛋白抗体效价为1:1000,G蛋白抗体效价为1:400。

病毒来源的转基因水稻对靶病毒的抗性评价

通过连续3年对236个病毒来源的转基因水稻系(包括T1,T2和T3代)对靶病毒水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)的抗性进行评价,发现抗性与所转RRSV基因片段有相关性,且随着繁殖世代的增加,转基因水稻的抗性逐渐减弱。

大陆水稻黄矮病和台湾水稻黄叶病的酶联免疫反应鉴定

1957年,广东省水稻发生了一种稻叶发黄的病害,其症状与生理早衰的稻叶发黄相似。经过试验,证实该病为叶蝉传播的病毒病,称为水稻黄矮病Rice Yellow Stunt Virus,RYSV。后来华南、华东、华中等许多省份也发生此病。1960年台湾水稻上暴发的一种病害,由于当时对病原不了解,误以为是土壤通透性不良引起的“窒息病”,后来证实是由黑尾叶蝉(Nephotettix cincticeps)传播的病毒病。

中国大陆水稻黄矮病与台湾省水稻暂黄病的血清学鉴定

以前的文献报道我国大陆水稻黄矮病和台湾省的水稻暂黄病的病状、传毒介体和病毒形状均相似或相同,被认为是同一病害,但没有做过血清学反应的鉴定比较。本试验采用琼脂扩散法和双抗体夹心法(PAS-ELISA),对上述两病原的抗血清与黄矮病株提取液和带毒黑尾叶蝉研磨液进行了琼脂双扩散和酶联免疫反应的比较研究。黄矮病毒提取液与暂黄病毒抗血清的琼脂双扩散产生清晰的沉淀带,在ELISA试验中均为典型的阳性反应;黄矮病毒抗血清和暂黄病毒抗血清对生物测定虫的同一头黑尾叶蝉研磨液的测定结果,阳性虫附合率98％,病原田捕捉虫的符合率为100％。根据以上结果可以认为两种抗血清同源,即中国大陆水稻黄矮病与台湾省水稻暂黄病为同一病害。

应用Dot-ELISA快速检测黑尾叶蝉体内水稻黄矮病毒研究

本文给出了应用膜上斑点免疫吸咐试验(Dot—ELISA)检测黑尾叶蝉体内水稻黄矮病毒的方法,试验研究表明:使用该方法检测比ELISA法不仅操作简便、使用抗原少,而且快速、灵敏度更高并可长期保存结果。因此,作者认为该法可作为基层单位测报时应用。

灰稻虱体内稻条纹叶枯病毒快速检测技术研究

采用膜上斑点免疫结合测试技术（Ｄｏｔ－ＩｍｍｕｎｏｂｉｎｄｉｎｇＡｓｓａｙ，ＤＩＢＡ）快速检测灰稻虱（ＬａｏｄｅｌｐｈａｘｓｔｒｉａｔｉｌｂｕｓＦａｌｌｅｎ）的毒率。试验得出用含２％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）、２％ＰＶＰ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０的０．０２ｍｏｌ／ＬＰＢＳ作封缓覆冲液、封闭３０ｍｉｎ后使抗原（Ａｇ）与其相应抗体（Ａｂ）和抗体与酶标记Ａ蛋白（ＨＲＰ－ＳＰＡ）各反应３０ｍｉｎ，检测效果较佳，灵敏度比相应的ＥＬＩＳＡ提高４倍。

我国水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病研究进展

上世纪60年代初我国华东和华北地区分别发现了水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病,后来都分别发生了2次大流行,同时都以病害防治为目标分别开展了研究,探明了当地病害发生规律,提出了相应的防治方法,获得了不同程度的防病效果。80年代以来,水稻黑条矮缩病的发生报道仅限于华东地区局部地市,玉米粗缩病的发生涉及华北、东北、西北、西南和华中地区13个省市。根据各地对两病病原形态、寄主及症状、介体昆虫及传病特性等方面相似性的报道,提出了我国玉米粗缩病与水稻黑条矮缩病病原异同性问题。经近10年来对两病用生物学和分子生物学方法进行比较鉴定,证明我国玉米粗缩病和水稻黑条矮缩病病原同属水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。同时基本探明了水稻黑条矮缩病在浙江杂交稻区和华北玉米区的再次流行成灾的原因,提出了相应的防治措施.并有效地控制了病害的流行危害。