利用甲醛固定的陈旧组织制作常规HE切片方法探讨

经甲醛长期浸泡的组织不仅细胞形态发生改变,组织着色力也明显下降。实验采用碳酸氢钠和FFA固定液(快速混合固定液)双重处理,探讨使经甲醛长期浸泡的组织细胞形态恢复正常及组织着色力增强的方法。

正确使用钻石刀的经验和体会

正确使用钻石刀的经验和体会陈多恩，邓仲端，刘擎同济医科大学基础医学院病理学教研室武汉４３００３０关键词超薄切片；钻石刀；水接触法中图法分类号Ｒ３６１近年来，各项科研工作对超薄切片的质量要求越来越高，钻石刀的使用已日益普及。这不仅因为钻石刀能切制较大的...

原位细胞凋亡TUNEL法的改进及其应用

目的 :寻找一种能快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料的原位细胞凋亡的 TUNEL法。方法 :在原已建立的 TUNEL技术基础上作了如下改进 :1石蜡切片用微波修复技术替代蛋白酶 K的消化作用 ;冰冻切片与细胞爬片或涂片用含 0 .1 % Triton X- 1 0 0和 0 .1 %枸橼酸三钠混合液作穿透处理。 2在滴加反应混合物前 ,切片用 0 .1 %焦碳酸二乙酯 ( DEPC)浸泡 ,抑制内源性核酸内切酶活性。 3在 POD转换剂前 ,切片用 3% H2 O2 -甲醇液阻断内源性过氧化物酶活性 ,并用正常山羊血清封闭非特异结合位点。4苏木素套染细胞核。结果 :改进后的 TUNEL法能特异地显示凋亡细胞为棕黄色 ,其他细胞核为蓝色 ,且对比明显 ,背景浅 ,组织结构完整清晰 ,便于显微照相等特点。结论 :改进后的 TUNEL法是一种快速、准确检测以石蜡切片、冰冻切片与细胞爬片或涂片等为实验材料细胞凋亡的有效方法。

淋巴组织免疫组织化学染色及质量控制

目的 建立淋巴组织的制片与免疫组化的标准化实验方法 ,达到临床病理检验质控要求。方法 详细介绍了淋巴组织的取材、固定、脱水、透明、石蜡包埋、切片、免疫组化和TUNEL染色方法及其质量控制环节。结果 用此法制备的免疫组化切片具有阳性结果呈颗粒状的棕黄色 ,定位准确 ,对比明显 ,背景浅 ,组织结构与细胞轮廓完整、清晰 ,适合显微照相以及染色结果稳定可靠 ,特异性强、敏感性高。结论 该方法可作为淋巴组织的制片与免疫组化的标准化实验方法应用。

高同型半胱氨酸血症大鼠冠状动脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的表达

目的观察高同型半胱氨酸血症对大鼠冠状动脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1的影响,以明了冠状动脉粥样硬化性心脏病的发病机制。方法24只大鼠随机分成正常饮食对照组、高蛋氨酸饮食组、高蛋氨酸+叶酸饮食组、高半胱氨酸饮食组。每组6只,分别给予普通饲料;普通饲料加1.7%蛋氨酸;普通饲料加1.7%蛋氨酸和0.006%叶酸;普通饲料加1.2%半胱氨酸。饲养6周,采用高效液相色谱荧光检测法测定血浆总同型半胱氨酸浓度,免疫组织化学染色法检测大鼠冠状动脉左主干和左前降支内皮细胞单核细胞趋化蛋白1的表达。结果喂以高蛋氨酸饲料6周,可诱导大鼠高同型半胱氨酸血症。与正常饮食对照组比较,高蛋氨酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸浓度显著升高(P<0.01),冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1的表达水平明显增强;高蛋氨酸+叶酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸水平较高蛋氨酸饮食组显著降低(P<0.01),其冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1的表达水平也降低;高半胱氨酸饮食组大鼠血浆总同型半胱氨酸浓度,以及冠状动脉内皮单核细胞趋化蛋白1的表达水平与正常饮食对照组比较差异无显著性。结论高同型半胱氨酸血症促进了大鼠冠状动脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白1,在冠状动脉粥样硬化性心脏病的发生和发展中起着重要的作用。

神经肽Y对培养的自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞的影响

应用细胞培养，＾３Ｈ－胸腺嘧啶核苷和＾３Ｈ－亮氨酸的掺入及细胞计数方法，研究缩血管物质神经肽Ｙ对血管平滑肌细胞生长的作用。结果发现，用神经肽Ｙ作用４８ｈ后可促进离体培养的自发性高血压大鼠动脉平滑肌细胞ＤＮＡ合成增加２８．０％，蛋白质合成增加５４．６％，与对照组比较有显著性差异；而细胞数无明显增加。

HPV感染、FHIT蛋白表达与非小细胞肺癌的相关性研究

目的探讨人乳头瘤病毒感染在NSCLC发生中的病因学意义,同时分析FHIT蛋白表达与NSCLC发生及HPV感染的关系。方法采用PCR方法选用通用型引物和HPV16、18型特异性引物分别对42例NSCLC及14例肺良性病变组织进行检测。免疫组化SP法检测FHIT蛋白的表达水平。结果HPVDNA检出率肺癌组为42·9%,肺良性病变组为7·1%,二者有显著性差异(P<0·05)。HPV感染率在肺鳞癌(53·6%)显著高于腺癌(21·4%),且随着分化程度降低,其感染率增高,在吸烟患者(57·7%)显著高于不吸烟患者(18·8%);FHIT蛋白异常表达率肺癌组为61·9%,与肺良性病变组(28·6%)比较有显著性差异(P<0·05)。肺癌中HPV阳性组FHIT蛋白异常表达率为83·3%,明显高于HPV阴性组(45·8%,P<0·05)。结论HPV感染与NSCLC组织学类型、分化程度及吸烟有关,它可能是导致NSCLC发生的重要病因学因素之一;FHIT蛋白异常表达与NSCLC发生及HPV感染有关,HPV可能通过诱导FHIT表达异常参与NSCLC的发生发展过程。

高血糖对大鼠心肌梗死后心肌组织SCF表达的影响

目的通过检测高血糖状态下正常及梗死后心肌组织中干细胞因子(SCF)的表达,探讨高血糖对心肌梗死后干细胞修复的影响。方法36只SD大鼠随机分为假结扎组、高血糖组、心肌梗死组和高血糖并心肌梗死组,每组9只,通过给予高糖饮食12周建立高糖血症模型,然后结扎冠状动脉左前降支建立心肌梗死模型。用RT-PCR检测各组大鼠心肌组织中SCFmRNA的表达水平;用免疫组织化学法检测心肌组织中SCF蛋白的表达。结果SCFmRNA和蛋白在正常心肌呈低水平表达,与假结扎组相比,心肌梗死组大鼠心肌梗死区周围组织表达明显增强(P<0.05);与心肌梗死组大鼠相比,高血糖并心肌梗死组大鼠心肌组织中SCF的表达明显减弱(P<0.05)。结论心肌梗死后SCF的表达明显增强,而高血糖能抑制心肌梗死后心肌组织中SCF的表达,提示高血糖可能抑制了心肌梗死后干细胞的归巢及其梗死后心肌的修复。

自发性高血压大鼠高血压进展期肠系膜动脉的超微结构变化

用半薄和超薄切片方法,研究24周龄自发性高血压大鼠肠系膜动脉超微结构变化。结果显示,在肌性小动脉中,内弹性膜崩解,中膜平滑肌细胞（SMC）小灶性坏死,其周围肥大的SMC外形轮廓不规则,显示许多突起和凹入,细胞外基质增多而使细胞间隙显著增宽;在较细的动脉中,许多SMC胞浆出现严重的空泡状变化和残存小体增多,少数细胞内出现局灶性胞浆溶解和细胞坏死。这些变化可能是动脉硬化前期重要的病变特征,也是高血压时动脉破裂出血的重要因素。

低氧对人胚肺成纤维细胞表型与增生的影响

采用单层细胞超薄切片技术和免疫细胞化学方法， 观察常氧（Ｎ）、低氧（Ｈ）、常氧和低氧猪肺动脉内皮细胞条件培养液（ＮＥＣＣＭ 和ＨＥＣＣＭ） 等不同条件， 对肺血管外膜成纤维细胞的表型与增殖的影响。结果表明： （１） 仅ＨＥＣＣＭ 组成纤维细胞显示表型转变，胞浆内出现微肌丝、致密体、基膜等平滑肌细胞超微结构，粗面内质网明显减少；且此组细胞α－平滑肌肌动蛋白（α－ＳＭＡ） 表达较其余３ 组明显增高（Ｐ＜ ０． ０１）； （２） Ｈ 和ＨＥＣＣＭ 组增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ） 表达较Ｎ 和ＮＥＣＣＭ 组明显升高（Ｐ＜ ０． ０１）。结果提示： （１） 低氧可经肺动脉内皮细胞介导， 引起人胚肺成纤维细胞向平滑肌样细胞转化，而单纯低氧无此作用；（２） 低氧可直接或经内皮细胞介导，刺激人胚肺成纤维细胞增殖。

心钠素对神经肽Y刺激培养的血管平滑肌细胞蛋白合成的影响

为研究高血压时肽类神经激素与血管壁结构改变之关系，应用自发性高血压大鼠（SHR）及Wistar大鼠动脉平滑肌细胞（SMC）培养以及3H－胸腺嘧啶核苷、3H－亮氨酸掺入方法，观察到用神经肽Y（NPY）作用48h后可促进SHR离体培养的血管SMCDNA合成增加28．0％，蛋白会成增加54．6％（与血清对照组比较），而细胞数无明显增加。当同时加入心钠素（ANP）后，正常血压大鼠中DNA和蛋白合成分别下降42．3％和44．3％，而SHR中仅分别降低11．4％和10．6％。结果表明NPY可促进血管SMC肥大（蛋白含量增加40％即表明细胞肥大），ANP可拮抗NPY促细胞肥大效应，但在SHR中ANP对血管SMC的调节作用减弱是引起细胞肥大的重要原因之一。

人类骨肉瘤细胞的血管形成作用

探讨骨肉瘤是否能有效地促进自身血管形成,以便阐明肿瘤细胞生长和转移的机制,开辟一条以恶性肿瘤血管为靶器官的治疗途径,我们进行了以下实验,报道如下。1 材料与方法1.1 人类骨肉瘤细胞的体外培养:肿瘤细胞取自-23岁男性患者截肢左膝部肿瘤。术后病理诊断为骨母细胞型骨肉瘤。

大鼠视网膜缺血再灌注后IL-1β的免疫组化研究

目的 :观察大鼠视网膜缺血再灌注 (retinalischemiareperfusion ,RIR)后 ,白细胞介素 1β (IL 1β)多肽在视网膜表达变化。方法 :采用前房灌注生理盐水 ,形成 130mmHg (17 3kPa)高眼压 ,诱导大鼠视网膜缺血 6 0min ,解除高眼压 ,建立RIR模型。缺血 6 0min ,再灌注 12h、 48h作视网膜冰冻切片 ,IL 1β免疫组化观察。结果 :正常对照组未见IL 1β表达 ,RIR后 12h、 48h视网膜神经节细层可见IL 1β表达。 结论 :IL 1β多肽在蛋白质水平参与RIR损伤发生。

人乳头瘤病毒感染与非小细胞肺癌发生的相关性

目的初步探讨人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)发生的相关性.方法用通用型引物PCR检测60例NSCLC和30例肺良性病变组织中HPV的感染率;用分型引物对阳性标本进行HPV16,18分型.用免疫组化方法检测 P53及Rb蛋白在肺癌组织中的表达.结果 60例NSCLC及30例良性病变组织中HPV的检出率分别为21例(35.0%)和1例(3.3%),二者差异具有显著性意义 (P<0.05).肺鳞癌HPV感染率(48.6%)显著高于肺腺癌(13.0%)(P<0.05),早期(Ⅰ期)肺癌HPV感染率(48.6%)显著高于进展期(Ⅱ～Ⅲ期,18.5%)(P<0.05),吸烟组HPV感染率(47.4%)显著高于非吸烟组(13.6%)(P<0.05).60例肺癌组织中34例P53蛋白阳性(56.7%),42例Rb蛋白阳性(70%),二者的表达在HPV感染阳性组和阴性组无显著性差异.结论 HPV感染在NSCLC的发生中可能起到一定的作用.

血管紧张素Ⅱ对培养的血管平滑肌细胞增殖的影响

<正>在原发性高血压中,心血管结构的病理学变化包括肥大和(或)构型重建,其中血管平滑肌细胞(SMC)异常生长起着重要作用。近年来,大量研究发现血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)不仅可调节心血管局部的机能活动,而且亦调节心血管细胞增殖。本文旨在研究AngⅡ对大鼠动脉SMC增生和肥大的影响,以进一步寻求肥大的原因,以期探讨高血压的发病机制。 1 材料与方法 1.1 主要材料及试剂:Wistar大鼠由本校实验动物学部提供,199培养基(M199)、胎牛血清(FBS)、AngⅡ均为美国Sigma公司产品。H-胸腺嘧啶核苷(~3H-TdR)、~3H-亮氨酸(~3H-leueine)由上海中科院原子能研究所提供。

缺氧、低营养对人眼筛板细胞纤维连接蛋白合成的影响

目的研究筛板间质纤维连接蛋白（ＦＮ）合成与血供的关系。方法在缺氧、低营养条件下对筛板细胞进行体外培养，光镜及电镜下观察其形态变化，采用免疫细胞化学和计算机图像分析对筛板细胞ＦＮ合成行定量分析。结果筛板细胞在缺氧、低营养条件下可发生胞浆内空泡、线粒体异形化、环形样小体等变性改变。缺氧２４ｈ及５％胎牛血清（ＦＣＳ）培养液中，筛板细胞ＦＮ合成量分别为１１．８８２０±３．５６５７、１５．１０２０±２．８９６９ＯＤ，与对照组比较，Ｐ＜０．０５；缺氧４８ｈ及１％ＦＣＳ培养液中，筛板细胞合成ＦＮ量开始减少，与对照组比较仍有不同程度增高。结论缺血可致筛板细胞结构变化和对ＦＮ合成有刺激作用。

氨氯地平对自发性高血压大鼠血管平滑肌细胞生长的影响

本文采用自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）动脉平滑肌细胞培养，３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）和３Ｈ－亮氨酸（３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ）掺入方法，观察到用氨氯地平（Ａｍｌｏｄｉｐｉｎｅ）作用４８小时后，与神经肽Ｙ（ＮＰＹ）组比较，其离体培养的ＳＨＲ动脉平滑肌细胞３Ｈ－ＴｄＲ掺入量降低５０．５％，３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量降低５６．５％。氨氯地平组与对照组比较其３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量分别降低５７．６％和３２．３％。用ＮＰＹ作用２４小时后，与对照组比较动脉平滑肌细胞３Ｈ－ＴｄＲ和３Ｈ－Ｌｅｕｃｉｎｅ掺入量却分别增加２０％和５４．６％。而细胞计数均无显著性差异（Ｐ＞０．０５）。结果表明，氨氯地平能有效地抑制ＳＨＲ血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的ＤＮＡ和蛋白质合成，以及显著的抑制ＮＰＹ引起的ＶＳＭＣ的ＤＮＡ合成和蛋白质合成增加效应。

肺血管弹力蛋白电镜特殊染色法

应用鞣酸－醋酸铀组化电镜染色方法观察２５例Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠腺泡内肺动脉壁弹力纤维在缺氧条件下超微结构的改变。观察结果表明，此染色法操作简便、效果稳定、特异性较高，能选择性地使弹力纤维中的无定形物质的电子密度明显增加，但其微纤维成分、胶原纤维、基底膜等间质以及细胞核、细胞器等结构的电子密度均无改变，有利于对弹力纤维性病变进行观察。

微波修复在细胞凋亡原位检测中的应用

末端转移酶（ＴｄＴ）介导的ｘ－ｄＶＴＰ切口末端标记法（ＴｄＴ－ｍｅｄｉａｔｅｄｘ－ｄＶＴＰｎｉｃｋｅｎｄｌａｂｅｌｉｎｇＴＶＮＥＬ）是目前原位检测细胞凋亡最为敏感、快速、特异的新方法［１］，这种方法检测的成功与否和组织的修复有着十分密切的关系。采用蛋...