蛋白质组学技术在糖尿病肾病标记物中的应用

在糖尿病患者中，糖尿病肾病（Diabetic Ne-phropathy，DN）的发病率高达20％～40％，DN是糖尿病最主要的微血管并发症之一，也是糖尿病患者最主要的死亡原因之一^[1]。尿白蛋白是目前公认的诊断DN的一个无创伤性的生物学标记物^[2]。然而，微量白蛋白尿是在显著的肾小球损伤之后才出现的，且微量白蛋白尿患者多已有晚期的肾脏病理学的改变^[3-7]。因此，探寻除尿白蛋白之外更早期诊断DN新的标记物已成为临床面临的棘手问题。欣慰的是，目前蛋白质组学技术已经广泛地应用于探寻诊断DN新的敏感的、特异性的标记物^[8-9]，并已经取得一些有潜在价值的新标记物，对于早期诊断DN具有重要意义。因此，全面而深入地了解蛋白质组学技术在筛选DN肾损伤标记物中的应用，对于将尿蛋白标记物作为中医药治疗DN肾损伤的靶点，提高中医药治疗DN的临床疗效具有重要意义。

尿胱抑素C作为糖尿病肾病早期诊断标准的评价

目的评估尿胱抑素C(urinary cystatin C,UCysC)与尿白蛋白/肌酐(urine albumin-creatinine ratio,UACR)的相关性,进而探讨UCysC作为糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)早期诊断标准的意义。方法采取回顾性横断面研究方法,将100例糖尿病(diabetes mellitus,DM)患者依据UACR水平分为正常白蛋白尿组(n=19)、微量白蛋白尿组(n=59)和大量白蛋白尿组(n=22)。常规记录查体结果和相关生化指标,同时采用颗粒增强透射免疫比浊法(particle-enhanced turbimetric assay method)测定不同分组患者UCysC水平。结果在正常白蛋白尿组、微量白蛋白尿组和大量白蛋白尿组,UCysC随着UACR的增加而逐渐升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。UCysC与UACR之间呈正相关(r=0.766,P=0.000),以UACR值30mg/g为切入点,作ROC曲线,得出曲线下面积为0.915,这说明UCysC对于早期DN来说,具有很好的敏感度和特异性。结论 UCysC与UACR之间具有独立相关性,UCysC可以作为DN早期诊断标准。

从风论治慢性肾小球肾炎的经验初探

慢性肾炎常由外感风邪而诱发,内有肝脾肾功能虚损,内外相因,以致气机升降障碍,三焦水道不通而见水肿,水谷精微外泄而出现蛋白尿,伤及肾络而见尿血,肾气虚损则见腰痛,内风扰于肝肾则见眩晕,久之湿浊水毒内蕴,继之形成血瘀、湿热、水湿以致湿浊等标实之证。风邪致病既是慢性肾炎发病的原发因素,也是病情反复发作的诱导因素。从风邪致病理论指出慢性肾炎的病机关键在于风伏肾络、脾肾亏虚,其中脾肾亏虚为本,风伏肾络是慢性肾炎发病的基础,也是病情反复发作的因素。肺主皮毛,宣发卫气,防御外邪,若久病正虚,肺气不足,卫气不固,邪气内侵,易与内风相合,循经袭肾,而使病情加重。其本在脾肾,故治疗上以健脾益肾为常法,外风当治以清宣疏散,内风当治以搜风息风,兼以活血化瘀、祛湿泄浊。并根据临床症状及疾病的转归情况在治疗上分别采取疏散风寒、疏散风热、祛风除湿、搜风化瘀通络、祛风泄浊解毒等法,临床收效良好。

三仁汤加减治疗发热验案举隅

三仁汤出自《温病条辨》,功效为宣畅气机、清利湿热,乃吴鞠通为治湿温、寒湿而设。现临床多用于治疗湿温初起或暑温夹湿之湿重于热证,举例如下。例1:齐某,男,21岁,2016年9月12日初诊。发热1周,曾于半月前发热1周,怀疑肺结核,经专科医院检查后排除。近1周发热,午后较高、体温39℃~40℃,来诊时体温39.2℃,汗出,口不渴,咽略红,颈旁、颌下淋巴结肿大,腋下、锁骨上淋巴结未触及肿大,血常规检验WBC2.01×109/L,RBC3.97×1012/L,血红蛋白121g/L。

糖尿病肾病肾组织炎症信号通路p38MAPK的调节机制及中药的干预作用

在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)的发展过程中,炎症相关信号通路———p38丝裂原活化蛋白激酶(mito-gen-activated protein kinase,MAPK)通路与肾组织损伤密切相关。一方面,高血糖、血流动力学异常、氧化应激以及前炎症因子等多种因素在上游激活p38MAPK信号通路;另一方面,活化的p38MAPK信号通路进一步诱导下游炎症细胞活化,促进炎症介质表达,增加炎症因子产生,最终,导致肾组织炎症性损伤。中药对p38MAPK信号通路的干预作用是通过多途径实现的,主要包括抑制炎症因子表达、调节磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)表达、减少致纤维化因子表达等。

黄葵胶囊抑制糖尿病肾病肾组织氧化应激和p38MAPK信号通路活性改善肾纤维化的作用和机制

目的:探讨黄葵胶囊(Huangkui capsule,HKC)改善糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)模型鼠肾纤维化的作用和机制。方法:将大鼠随机分为5组,假手术组5只,模型组、HKC低剂量(L-HKC)组、HKC高剂量(H-HKC)组、硫辛酸(lipoic acid,LA)组各7只。采用单侧肾切除联合2次腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立DN模型。造模成功后,HKC组、硫辛酸组大鼠分别经灌胃给予HKC悬浊液(0.75,2 g·kg-1)或硫辛酸(60 mg·kg-1),模型组大鼠也同时经灌胃给予2 m L蒸馏水,每天1次,连续8周。各组大鼠自给药开始计时,第8周末处死,采集血液和肾组织,观察HKC对尿白蛋白、肾功能、肾纤维化形态特征以及氧化应激(oxidative stress,OS)相关指标、p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路关键信号分子、致纤维化细胞因子以及炎症因子蛋白表达水平的影响。结果:HKC改善模型鼠一般情况、体重、尿白蛋白(urinary albumin,UAlb)、血清尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、尿酸(uric acid,UA)、白蛋白(albumin,Alb),其效果与硫辛酸相仿;HKC改善模型鼠肾纤维化,以高剂量HKC效果为显著,而且,其抗纤维化作用优于硫辛酸;HKC改善模型鼠肾组织OS主要指标,其效果与硫辛酸相似;HKC下调模型鼠肾组织磷酸化p38MAPK(phosphorylated-p38MAPK,p-p38MAPK)蛋白表达水平,降低转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α蛋白表达水平,而硫辛酸只能抑制肾组织TNF-α蛋白表达水平。结论:对于DN模型鼠,HKC和硫辛酸一样,在体内具有拮抗肾组织OS损伤的作用;HKC与硫辛酸不一样,通过抑制肾组织p38MAPK信号通路活性以及致纤维化细胞因子、炎症因子蛋白表达水平,改善肾纤维化。

糖尿病肾病肾组织氧化应激的调控机制及中药的干预作用

在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)发生、发展过程中机体内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成增多导致肾组织OS损伤的发生;其形态学特征主要表现为肾小球和肾小管固有细胞结构和功能的改变。肾组织OS调控途径涉及胞内多条信号通路,其中,p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路和腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)信号通路作为多种抗氧化物质的靶点而发挥着重要功能。中药复方或单味中药提取物对DN肾组织OS损伤的干预作用包括"调控ROS和抗氧化物质,减少晚期糖基化终末产物形成,抑制生长因子表达,影响胞内信号通路活性"等。

慢性肾脏病肾组织炎症信号通路p38MAPK的调节机制及中药的干预作用

肾组织的炎症反应及其相关的组织损伤(如肾小球硬化和肾间质纤维化)是导致慢性肾脏病(chronic kidneydisease,CKD)进展至终末期肾病的重要因素。其中,p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路能够调控多种核转录因子的表达和生物活性,还可以影响下游炎症介质的合成,并参与炎症细胞的活化,在肾脏疾病炎症损伤中发挥着重要的作用。某些单味中药及其提取物(如大黄素、黄连素)以及一些中药复方(如益肾活血汤)可以通过调节p38MAPK信号通路而影响肾组织内炎症反应,从而,减轻肾小球、肾间质炎症损伤。

黄葵胶囊对阿霉素肾病肾组织炎症信号通路p38MAPK的干预作用

目的:阐明黄蜀葵花(Abelmoschus manihot,AM)提取物制剂———黄葵胶囊(Huangkui capsule,HKC)调节阿霉素肾病(adriamycin-induced nephropathy,ADRN)模型p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路从而改善肾组织炎症性损伤的机制。方法:将19只SD大鼠随机分为假手术组、对照组和HKC组。对HKC组和对照组大鼠行右侧肾摘除术,并在4周内分2次经颈静脉注射阿霉素(adriamycin,ADR)建立ADRN模型。HKC组大鼠于第2次注射ADR后经灌胃给予HKC悬浊液,对照组和假手术组大鼠同时经灌胃给予蒸馏水,共干预4周。在HKC和蒸馏水干预前和干预后第1,2,3,4周末,分别称量大鼠体重,并检测24 h尿蛋白排泄量(24 h urinary protein excretion,Upro)。肾摘除术后第8周末处死全部大鼠,抽取血液,摘除左肾并称重,观察血清生化指标、肾小球形态特征、肾小球α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth mus-cle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ)表达特征、肾小球巨噬细胞(macrophage,MΦ)浸润特征等,并且检测肾组织转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1,p38MAPK,磷酸化p38MAPK(phosphorylated p38MAPK,p-p38MAPK)蛋白相对表达量。结果:与对照组大鼠比较,HKC改善了模型鼠的蛋白尿和血清白蛋白(albumin,Alb),抑制了模型鼠系膜细胞(mesangialcell,MC)增殖、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)及其胶原成分沉积,减轻了肾小球α-SMA,Ⅰ型胶原表达,减轻了肾小球ED1+,ED3+浸润,下调了模型鼠肾组织TGF-β1,p-p38MAPK蛋白表达。结论:HKC在体内具有减轻肾组织炎症性损伤的作用;HKC通过下调肾组织p38MAPK信号通路中关键信号分子———p-p38MAPK的蛋白表达,干预其相关信号通路的信号转导途径,减少肾组织内TGF-β1的表达和炎症细胞的浸润、活化,从而改善肾组织的炎症性损伤。

尿毒清颗粒治疗慢性肾衰竭研究概况

尿毒清颗粒(uremic clearance granule,UCG)的主要生物活性成分包括异黄酮、大黄素、黄芪甲苷、芍药苷、丹酚酸A等。在临床上,UCG可以改善慢性肾衰竭(chronic renal failure,CRF)患者的肾功能,并减少CRF相关并发症;其药理机制包括抑制转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1表达,减轻足细胞损伤,抑制肾小管上皮细胞转分化,改善微炎症状态,抑制氧化应激,减轻胰岛素抵抗等。

肾脏细胞外基质降解的分子机制及中药的干预作用

肾脏细胞外基质(extracellular matrix,ECM)降解减少是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)肾组织损伤的形态特征和病理基础。在肾小球或肾间质中,ECM降解主要依赖于降解酶系统的调控,其中,基质金属蛋白酶(matrix metallo-proteinases,MMPs)发挥着核心作用。MMPs的表达和活性受控于"基因转录、酶原激活、特异性抑制剂"等经典途径。以尿毒清颗粒(Uremic Clearance granule)为代表的中药复方制剂及中药提取物可以干预ECM降解的多种途径,包括促进ECM成分降解、影响ECM降解酶表达、调节MMPs基因转录、抑制MMPs相关信号转导等。