慢性胃炎不同证型患者唾液EGF与胃黏膜细胞增殖的相关性

目的:探讨慢性胃炎病证结合患者唾液EGF与胃黏膜细胞增殖的相关性。方法:慢性胃炎患者按辨证分为脾气虚组、胃阴虚组、脾胃湿热组、胃络瘀阻组;体检胃黏膜正常者为对照组,放免检测各组唾液EGF含量,免疫组化染色观察胃黏膜细胞EGFR,c-Jun、PCNA的表达水平。结果:脾胃湿热证及胃络瘀阻证组患者唾液EGF含量高于正常对照患者,EGFR,c-Jun、PCNA表达显著上调,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论:唾液EGF含量水平与胃黏膜细胞增殖密切相关,慢性胃炎患者胃黏膜细胞增殖中医实证较虚证明显。

慢性肾小球肾炎肾络-内质网应激相关性探讨

慢性肾小球肾炎是。肾脏内科常见疾病，临床起病隐匿、病程冗长、病情发展缓慢，有资料显示慢性肾小球肾炎是导致终末期肾病的主要原因[1]，而系膜增生性肾小球肾炎（MsPGN）是。肾小球疾患中常见的病理类型之一，是我国慢性肾脏病最常见的病因，以循环免疫复合物沉积于肾小球系膜区，刺激肾小球系膜细胞增殖和系膜基质增多为特征，最终致肾小球硬化和肾间质纤维化。其发病机制目前仍不十分清楚。

慢性肾小球肾炎唾液蛋白质组无创伤分子诊断模型的研究

目的探讨液态芯片结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术筛选慢性肾小球肾炎(CGN)患者的唾液蛋白质标记物并建立诊断模型,为CGN临床诊断提供依据。方法采集43例CGN患者和45例健康体检者的唾液标本,采用液态芯片(WCX磁珠)制备唾液样品,并结合MALDI-TOF-MS质谱仪对唾液标本进行蛋白质检测,筛选出2组间特异性表达差异蛋白,并结合生物信息学方法建立诊断模型。结果比较2组唾液蛋白质指纹图谱数据,共获得116个差异有统计学意义的蛋白峰(P<0.05),选择质荷比(m/z)为2 499.11、2 159.09、3 622.30Da的3个蛋白质峰用于构建最佳决策树模型,该诊断模型测试组总准确率为85.23%(75/88),灵敏度为83.72%(36/43),特异度为86.67%(39/45)。结论初步建立了CGN唾液蛋白质组诊断模型,为CGN的早期诊断提供了新的方法和途径。

常见舌苔舌上皮细胞凋亡与fas mRNA和蛋白产物关系的研究

目的 :探讨舌苔厚度变化与舌上皮细胞凋亡、fas基因表达的关系。方法 :运用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记 )技术、原位杂交、免疫组化技术 ,观察正常薄白苔、病理薄白苔、厚苔和剥苔等几种常见舌苔的舌上皮细胞凋亡指数的变化和fas的表达水平。结果 :与正常薄苔比较 ,剥苔AI(凋亡指数 )升高 (P <0 0 5 ) ,而厚苔AI降低 (P <0 0 5 )。剥苔fas基因表达阳性率高于其他各组。结论

常见舌苔舌上皮细胞TGF-β_3基因表达特点的研究

目的 :研究常见舌苔变化与舌上皮细胞TGF -β3基因表达的关系。方法 :采用原位杂交、免疫组化和图像分析技术 ,进行定性和定量分析。结果 :与正常薄苔比较 ,TGF -β3的表达水平在厚苔、剥苔显著降低 ,并且薄苔与厚苔、薄苔与剥苔、厚苔与剥苔之间均有显著差异。结论 :舌上皮细胞TGF -β3表达水平与舌苔厚度密切相关。

从内质网应激途径探讨中药对系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾脏的保护作用

目的:观察中药保肾方对系膜增生性肾小球肾炎(Ms PGN)大鼠模型蛋白尿水平、肾脏病理及肾组织细胞凋亡的影响,并从调节内质网应激(ERS)相关蛋白——蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)的表达,探讨保肾方的作用机制。方法:建立系膜增生性肾小球肾炎模型,随机将28只雄性SD大鼠分成4组,以雷公藤多甙片为阳性对照药物,中药保肾方干预。分别于造模后治疗前、治疗后14周末检测大鼠24 h尿蛋白定量,14周末留取血尿标本后处死各组大鼠,取肾组织染色后观察其组织形态学变化;TUNEL法检测肾脏细胞凋亡情况,Western Blot法和Q-PCR检测肾组织PERK的表达。结果:(1)与空白组相比,模型组24 h尿蛋白定量明显升高,并出现系膜细胞增生、轻度纤维化;肾组织PERK表达明显增强,细胞凋亡率明显升高(P均<0.05)。(2)与模型组相比,保肾方可降低大鼠24 h尿蛋白定量,明显改善大鼠肾脏损害,明显抑制PERK及PERKmRNA的高表达,降低细胞凋亡率,差异具有统计学意义(P均<0.05)。结论:保肾方减轻系膜增生性肾小球肾炎大鼠肾脏损伤及肾组织细胞凋亡,其机制可能与通过降低肾组织PERK表达,抑制内质网应激有关。

bax mRNA和蛋白产物与常见舌苔舌上皮细胞凋亡关系的研究

目的 :检测常见舌苔舌上皮细胞凋亡情况及凋亡相关基因baxmRNA和蛋白产物 ,探讨舌苔厚度变化与舌上皮细胞凋亡、bax基因表达的关系。方法 :运用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端标记 )技术、原位杂交、免疫组化和图像分析技术。结果 :与正常薄苔比较 ,剥苔bax基因过度表达伴随细胞凋亡增多 ,而厚苔bax基因低表达伴随细胞凋亡减少。bax基因表达水平变化趋势与细胞凋亡水平变化趋势一致。结论

厚朴提取物对MPTP诱导帕金森病模型小鼠行为学的影响

目的:观察中药厚朴提取物对帕金森病模型小鼠行为学的影响。方法:选取健康雄性C57BL/5J小鼠,随机分成3组,分别为PD模型组,正常对照组,厚朴提取物组。采用腹腔注射MPTP连续3周制备PD模型。中药组采用厚朴提取物灌胃处理。悬挂实验、爬杆实验观察小鼠行为学变化。结果:PD模型组小鼠爬杆实验和悬挂实验障碍,而厚朴提取物能够显著缩短小鼠爬杆时间并能增加小鼠悬挂能力评分(P<0.01)。结论:厚朴提取物能提高小鼠肢体运动协调能力,对MPTP诱导所致的PD模型小鼠PD体征具有明显的改善作用。

溃疡性结肠炎相关癌变不同信号转导通路的表达及意义

目的:探讨TLR4、NF-κBp65、β-catenin、STAT3在溃疡性结肠炎癌变中的表达及作用。方法:60只SPF级Balb/c小鼠随机分3组:正常组、结肠炎组、结肠癌组,每组20只;除正常组外,模型组分别采用DSS和DSS/DMH复合法制备;应用显微镜观察结肠黏膜组织形态学改变,免疫组化法检测结肠黏膜TLR4、NF-κBp65、β-catenin、STAT3的表达。结果:结肠癌组小鼠结肠肉眼可见浆膜层散在、多处息肉状隆起变化,镜下见腺体萎缩、部分上皮内瘤变或癌变,其结肠组织TLR4、NF-κBp65、β-catenin、STAT3蛋白呈高表达特点;与正常组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:TLR4、NF-κBp65、β-catenin、STAT3蛋白及其信号通路在溃疡性结肠炎相关癌变发生发展中有重要作用。

丹栀逍遥散对复发性口腔溃疡模型相关细胞因子的影响

目的:探讨丹栀逍遥散对复发性口腔溃疡模型的治疗作用及其对血清TNF-α及IL-10的影响。方法:32只家兔随机分为正常对照组、模型对照组、中药组和西药组,免疫法诱导造模,中药组和西药组分别用丹栀逍遥散水煎液和金施尔康溶液灌胃,观察记录临床溃疡变化情况,用酶联免疫法(ELISA)测定淹溺前及淹溺后血清TNF-α及IL-10含量。结果:丹栀逍遥散治疗组总间歇时间(d)和总溃疡数(个)显著低于西药对照组(P<0.01),血清TNF-α显著低于模型组(P<0.01)和西药对照组(P<0.01),而IL-10显著高于模型组(P<0.01)和西药对照组(P<0.05)。结论:丹栀逍遥散对复发性口腔溃疡模型具有显著的治疗作用,其机理可能与调节TNF-α及IL-10活性有关。

桃红四物汤对外源性BMSCs在结肠炎大鼠结肠定植的影响

目的:探讨桃红四物汤对骨髓间充质干细胞(BMSCs)在结肠炎大鼠肠道定植分化的影响。方法:雌性SD大鼠以5%2、4、6,三硝基苯磺酸诱导形成结肠炎模型,造模后随机分为模型对照组、BMSCs移植组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组、桃红四物汤组,第二天将体外分离培养的雄性SD大鼠BMSCs经尾静脉注射到各组雌性大鼠体内。疗程结束后取各组大鼠结肠组织,以Y染色体的性别决定区段sry作为标志,以确定供体BMSCs的植入情况;免疫组化法检测结肠组织Musashi-1、PCNA的表达。结果:经PCR扩增后,凝胶电泳可以检测结肠组织雄性性别特异性基因区段sry,BMSCs移植组和SASP组阳性率均为20%,桃红四物汤组阳性率为33%;免疫组化检测结果显示BMSCs移植组及治疗组大鼠结肠组织Mu-sashi-1、PCNA均有阳性表达;桃红四物汤组与BMSCs移植组比较差异有显著性意义。结论:桃红四物汤能够较明显促进外源性BMSCs在结肠炎大鼠结肠的定植分化。

天然脑活素的记忆改善效果及其分子机理研究

目的：研究中药古方强记汤及天然脑活素对记忆障碍动物模型在记忆改善方面的作用效果；并运用转基因技术进一步验证天然脑活素对学习记忆分子开关CREB基因表达的促进作用。方法：将强记汤及天然脑活素分别以29.3g／kg和18．6g／kg的量每日经口灌胃给予SPF级小鼠，连续5d，第6天给药1h后制备成记忆障碍模型，第7天给药0．5～1h后分别用跳台法和避暗法测试记忆成绩；另用不同剂量（50μg／mL和150μg／mL）天然脑活素水煎液处理大鼠大脑B104 CNS神经细胞，以荧光素酶方法检测CREB表达水平。结果：强记汤及天然脑活素水煎液对动物记忆障碍模型小鼠记忆成绩中的潜伏时间、错误次数与模型对照组比较均有统计学意义（P〈0．01）；而且天然脑活素的改善效果明显优于原方（P〈0．01）；不同剂量天然脑活素水煎液CREB表达水平与对照组比较有统计学意义（P〈0．01），且有剂量反应关系。结论：中药古方强记汤及天然脑活素对实验动物被动回避反应能力的记忆获得、记忆保持及记忆再现均有的改善作用，能显著增加在B104 CNS神经元细胞中CREB基因的表达。

天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究

目的:探讨天然脑活素对人胚肺二倍体成纤维细胞(MRC-5)增殖能力和复制性衰老的影响及其机理。方法:光镜下观察MRC-5细胞衰老表型,常规计数细胞代龄、传代速度,MTT法检测细胞增殖活度,X-Gal染色法观察细胞衰老情况,计数衰老细胞百分率。结果:天然脑活素可维持细胞的非衰老表型,增加MRC-5细胞代龄,天然脑活素孵育MRC-5细胞的细胞增殖能力较空白老龄对照组明显升高(P<0.05),细胞的增殖速度显著加快。另外,天然脑活素连续培养的细胞在老龄阶段衰老细胞数显著低于老龄对照细胞(P<0.01)。结论:天然脑活素可升高MRC-5细胞增殖能力,有效延缓细胞的复制性衰老。

应用iTRAQ技术构建胃癌唾液的蛋白质组差异表达谱

目的:应用同位素标记相对和绝对定量(iTRAQ)技术标记定量蛋白组技术对胃癌患者唾液的全组蛋白进行鉴定和定量分析,初步获得胃癌患者唾液的蛋白组差异表达图谱。方法:胃癌患者与正常人唾液各10例,各组等量混合后利用iTRAQ 8标试剂标记后的样本,采用Nano-LC-Ms/Ms分离、分析肽段,运用Proteinpilot 4.0软件对蛋白进行鉴定和定量分析,并比较这些蛋白的表达差异。结果:对样品进行了2次Nano-LC-Ms/Ms,标记率>95%,错误发现率<1%,鉴定出符合假阳性率<1%,共鉴定了747个蛋白。与正常对照组相比,胃癌组共出现了2倍以上表达差异的蛋白质21个,其中上调的12个,下调的9个。结论:iTRAQ联合Nano LC-MS/MS技术能高通量地筛选胃癌患者唾液中相关的蛋白,为胃癌患者早期诊断和预后提供可能的生物学标志物或治疗靶点,建立一种无创、简便、快捷实用的检测评估手段。

天然脑活素对Aβ_(1-40)诱导PC12细胞凋亡的拮抗作用研究

目的:探讨天然脑活素对Aβ1-40诱导的阿尔茨海默病(AD)细胞模型PC12细胞凋亡的拮抗作用。方法:采用Aβ1-40处理PC12细胞复制AD细胞模型,不同剂量的天然脑活素孵育细胞,镜下观察细胞形态学变化,免疫细胞化学染色法观察细胞凋亡相关蛋白(Bcl-2、Bax,Caspase-3)的表达水平。结果:天然脑活素处理组细胞突起生长明显,细胞凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达较模型组显著上调,同时细胞凋亡促进蛋白Bax及介导细胞凋亡的蛋白Caspase-3的表达明显下调(P<0.05或P<0.01)。结论:天然脑活素可通过调节细胞凋亡相关蛋白的表达水平,对Aβ1-40诱导的PC12细胞凋亡具有明显拮抗作用。

活血健脾补肾三法对MSC移植在结肠炎大鼠肠道定植的影响

目的:探讨中医活血健脾补肾法对骨髓间充质干细胞(MSC)移植在结肠炎大鼠肠道定植的影响。方法:雌性SD大鼠以5%2、4、6,三硝基苯磺酸(TNBs)诱导形成结肠炎模型,造模后随机分为模型对照组、MSC移植组、活血组、健脾组、补肾组,第2天将体外分离培养的雄性SD大鼠MSC经尾静脉注射到各组雌性大鼠体内。疗程结束后取各组大鼠结肠组织,以Y染色体的性别决定区段sry作为标志,以确定MSC的肠道定位情况;免疫组化法检测其肠道干细胞标记物Musashi-1的表达。结果:经PCR扩增后,凝胶电泳可以检测到结肠组织雄性性别特异性基因区段sry,MSC移植组阳性率为20%,活血组阳性率为35%,健脾和补肾组阳性率为25%。免疫组化检测到MSC移植组及中药治疗各组大鼠结肠黏膜组织Musashi-1均有阳性表达,其中活血组与MSC移植组比较差异有显著性意义。结论:活血法代表方药桃红四物汤较明显促进MSC在结肠炎大鼠肠道定植。

基于唾液蛋白指纹图谱的2型糖尿病分子诊断模型研究

目的:研究2型糖尿病患者的唾液蛋白质组,筛选差异蛋白质指纹图谱,建立2型糖尿病的蛋白质指纹图谱诊断模型。方法:采集2型糖尿病患者70例和健康体检者45例的唾液标本,采用WCX纳米磁珠联合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)技术检测,筛选两组间特异性表达差异蛋白,并结合生物信息学方法建立诊断模型。结果:共获得158个差异有统计学意义的蛋白质峰(P<0.05)。选择质荷比(m/z)为3447.57 Da、4735.24 Da两个差异蛋白质峰构建最佳决策树模型,该模型的准确率为89.57%(103/115),敏感性91.4%(64/70),特异性为86.7%(39/45)。结论 :初步建立了2型糖尿病唾液蛋白质组诊断模型,为其早期诊断提供了新的方法和途径,具有重要的临床诊断意义。

唾液蛋白指纹图谱在乳腺癌诊断中的应用

目的:检测乳腺癌患者唾液蛋白质,筛选特异的蛋白质标记物,构建用于乳腺癌早期诊断的唾液蛋白质指纹图谱模型。方法:应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术测定91例唾液标本(其中乳腺癌47例,健康人44例)的蛋白质质谱,建立乳腺癌诊断模型。结果:乳腺癌患者与健康对照样本检测到311个蛋白质峰,其中32个蛋白质峰在两组间差异有统计学意义。获得分子量为4849.31,5224.96,3439.02和3559.89Da4个蛋白质组成的模板,可将乳腺癌与正常人正确分组,47例乳腺癌有37例被准确诊断,34例健康人被准确排除,灵敏度78.7%(37/47);特异度为77.2%(34/44)。结论:表面增强激光解吸电离飞行时间质谱技术建立乳腺癌癌唾液蛋白质指纹图谱模型为早期筛查及诊断乳腺癌提供了一种特异性强、敏感性高的新方法,值得进一步研究和应用。

新生小鼠肠边缘群细胞蛋白质组双向电泳图谱的差异表达

目的筛选肠道干细胞特征性的差异蛋白质或蛋白质群。方法采用双向凝胶电泳方法分离新生小鼠肠边缘群细胞与肠上皮细胞总蛋白,表达差异超过1.5倍的为差异蛋白质。结果成功建立小鼠肠边缘群细胞与肠上皮细胞的双向电泳图谱,筛选出差异蛋白点39个。结论小鼠肠干细胞与上皮细胞的蛋白表达谱存在差异,有可能成为潜在的、有应用价值的肠道干细胞鉴别分子标志。