八种天然黄酮类化合物的抗氧化构效关系

采用H2 O2 -CTMAB -Luminol化学发光体系和Fe2 + 诱发脂蛋白PUFA过氧化比色体系 ,研究了八种高纯度的天然黄酮类化合物清除H2 O2 、LO·和LOO·的构效关系。结果表明 ,这八种天然黄酮类化合物都能有效地清除H2 O2 、LO·和LOO·。根据其清除作用和化学结构分析 ,得出如下结论 :B环上羟基是清除H2 O2 、LO·和LOO·的主要活性基团 ,A环上羟基是清除H2 O2 、LO·和LOO·的重要基团 ,并且B环上羟基相邻清除作用就大大增强 ;糖甙对清除H2 O2 、LO·和LOO·也有贡献。

天然黄酮类化合物清除DPPH^＊的构效关系

应用DPPH.分光光度测定法研究了11种高纯度的天然黄酮类化合物清除二苯代苦味肼基自由基(DPPH.)的构效关系。结果表明,这11种天然黄酮类化合物都能有效地清除DPPH.,其清除DPPH.作用大小顺序依次为:槲皮素>泽漆新苷>儿茶素>金丝桃苷>芸香苷>山奈素>桑色素>异槲皮苷>黄芩苷>石吊兰素>金雀异黄素。发现这11种天然黄酮类化合物有如下构效关系:1.B环上和/或A环上具有邻位羟基可大大增强清除DPPH.作用;2.B环上4′位羟基和A环上6位羟基清除DPPH.的活性都很强;3.异黄酮清除DPPH.的活性弱于相应的黄酮;4.黄酮醇清除DPPH.的活性强于相应的双氢黄酮醇,提示C环具有C2-C3双键结构可增强清除DPPH.作用;5.黄酮类化合物对DPPH.的清除能力与其酚羟基位置密切相关;6.C环3位上羟基被糖基化时,其清除DPPH.的作用减弱。所得结果为进一步开发利用黄酮类化合物提供了理论依据。

泛素化介导的非蛋白质降解功能

泛素因标记被26 S蛋白酶体降解的蛋白质而著名.然而近几年发现,泛素作用远不止此,不仅具有参与蛋白质降解这一重要"传统作用",还起着比先前想象更多变的、更精美的细胞调控作用,是非常重要的细胞过程的多层面调节因子,具有许多重要的非蛋白质降解功能,包括DNA损伤修复、DNA复制、信号传导、转录调节、膜运输、胞吞、蛋白激酶活化、染色质重塑和病毒芽殖.这些功能涉及多聚泛素化和单泛素化及多泛素化.因此,泛素化异常可能涉及疾病的发生和发展.对这些功能的了解可以拓展人们对泛素的认识,有助于对多种细胞过程的深入理解,也有助于相关新药的研发.

11种黄酮类化合物清除超氧阴离子的构效关系研究

目的 研究了 11种高纯度的天然黄酮类化合物清除超氧阴离子 (O-·2 )的构效关系 ,试图找出某些规律 ,为其进一步开发利用提供参考依据。方法 采用高灵敏度的化学发光法。结果 9种天然黄酮类化合物能有效地清除O-·2 ,其清除O-·2 能力大小顺序依次为 :黄芩苷 >泽漆新苷 >槲皮素 >芸香苷 >金丝桃苷 >山奈素 >甘草查尔酮 >橙皮苷 >石吊兰素 ,而川陈和补甲 Ac无效。结论 ①A环上羟基和 /或B环上羟基是清除O-·2 2的主要活性基团 ;②A环上具有邻位羟基和 /或B环上具有邻位羟基可大大增强清除O-·2 能力 ;③A环上 6位羟基和B环上 3′、4′位羟基清除O-·2 的活性都很强 ;④糖苷对清除O-·2 也有贡献 ,其作用因糖苷种类而异 ;⑤酚羟基化合物往往具有清除O-·2 作用。

应用荧光探针法研究某些多糖与DNA的直接作用

用荧光探针法研究了云芝糖肽、灵芝多糖和香菇多糖与ＤＮＡ的相互作用以了解它们防癌抗癌的效用。结果表明，这三种多糖都能与ＤＮＡ相互作用，其中灵芝多糖效果最佳，云芝多糖效果次之，香菇多糖效果居后。

大黄清除活性氧的作用

目的：检测和确定大黄（ＲｈｅｕｍｏｆｆｉｃｉｎａｌｅＢａｉｌ．）清除活性氧的作用。方法：利用多种产生和检测活性氧的化学发光体系来检测大黄清除多种活性氧的作用，并以抑制各体系发光强度５０％的大黄浓度（ＩＣ５０值）作指标。结果：在Ｏ２、Ｈ２Ｏ２、全血吞噬细胞、亚油酸脂质过氧化发光体系中，大黄的ＩＣ５０值分别为６．０μｇ／ｍｌ，９５μｇ／ｍｌ，７．５ｍｇ／ｍｌ和２８μｇ／ｍｌ。然而，大黄对ＯＨ·无清除作用。结论：大黄能清除Ｏ２、Ｈ２Ｏ２和其它活性氧，抑制脂质过氧化，是一种有效的抗氧化剂。

褪黑素清除活性氧作用的研究

采用多种分析体系检测了褪黑素清除活性氧的作用．结果表明，褪黑素能有效地清除包括Ｏ２·、·ＯＨ、Ｈ２Ｏ２在内的多种活性氧，能显著地抑制·ＯＨ对ＤＮＡ的损伤，是一种有效的抗氧化剂．

银杏叶黄酮抗氧化作用的研究

利用化学发光法和分光光度法研究了银杏叶黄酮W和H抗氧化作用。结果表明，水溶性的黄酮W和醇溶性的黄酮H不仅能有效地清除O-·2、H2O2，而且能抑制脂质过氧化，并提示两者都有可能清除LO、LOO和1O2。然而，两者清除这些活性氧能力差异显著，且都无清除OH能力。

非泛素依赖地降解蛋白质研究进展

如何识别和选择性降解蛋白质是细胞生命过程中非常重要的环节,泛素-蛋白酶体需能降解途径的发现,揭示了蛋白质在细胞内选择性降解的普遍方式,成为研究焦点.然而,很少关注蛋白酶体以非泛素依赖方式降解蛋白质的可能性.近年来,已发现不少蛋白质被蛋白酶体以非泛素依赖方式降解.该途径涉及降解某些短寿命的调节蛋白、错误折叠蛋白、衰老蛋白和氧化蛋白,以及新合成蛋白的"质量控制",并涉及病理过程如癌症、神经退行性疾病,所以具有非常重要的生理和病理作用.总结了近一二十年来发现的一些具有代表性的被蛋白酶体以非泛素依赖方式降解的蛋白质,并重点论述了其作用的分子机制,以期以点带面地展示这一领域的研究概况.

一种新颖的测定和分析羟自由基氧化损伤RNA及其分子机理的化学发光体系

近年来 ,羟自由基 ( ·OH)对DNA氧化损伤已受到广泛关注。但是很少研究·OH对RNA的氧化损伤。其实 ,RNA与DNA一样 ,也是核酸的两大组分之一 ,也有许多重要功能。所以·OH攻击RNA也会引起严重后果 ,会造成细胞功能衰退甚至细胞死亡等。为此 ,我们建立了Vit C CuSO4 Phen H2 O2 RNA这一产生和测定·OH氧化损伤RNA的化学发光体系 ,以便加强·OH氧化损伤RNA的研究。通过对本体系测定条件的研究 ,得出了本体系最佳组方是 :Vit C、CuSO4 、Phen、H2 O2 和RNA ,浓度分别为 35 0 μmol/L、5 5 μmol/L、35 0 μmol/L、0 2mol/L和 2 0 μg/mL ,体系pH为 5 5 ,体系终体积为 1mL。随后 ,利用本体系检测了槲皮素、咖啡酸、黄芩甙和芦丁抗·OH氧化损伤RNA的作用 ,发现这四种抗氧化剂均能有效抑制·OH对RNA的氧化损伤 ,从而也证明了本体系的可行性和实用性。我们也利用此体系和特异抗氧化剂分析了·OH氧化损伤RNA的分子机理 ,结果发现 ,·OH清除剂硫脲几乎抑制全部发光 ,推测是因硫脲清除了引发剂·OH而不能引发RNA氧化损伤所致 ;过氧化氢酶几乎能抑制全部发光 ,推测是因过氧化氢酶清除了H2 O2 而不能产生引发剂·OH所致 ;O2 ·清除剂SOD只能抑制小部分发光 ;1O2 清除剂叠氮化钠和苯甲酸都能抑制绝大部分发光。这?

一种新的产生和检测过氧亚硝基的化学发光体系

研究产生和消除过氧亚硝基(Peroxynitriteanion,ONOO?)是自由基生物学和医学的一项紧迫任务。为此,建立了一种新的产生和检测ONOO?的化学发光体系,并评估了检测的最佳条件。该方法为:10mmol/L羟胺与0.5mol/LNaOH、1mmol/L、乙二胺四乙酸二钠(Disodiumethylenediaminetetraacetate,EDTA)反应产生ONOO?,随后用MnO2粉末过滤反应液以除去H2O2,然后在测量管内加入100μL抗氧化剂和860μL0.1mol/L的碳酸盐缓冲液(pH10),再加入40μL过滤后的ONOO?反应液、混匀、延迟10s,测10s化学发光强度。以抗氧化剂茶多酚、抗坏血酸、芦丁和黄芩苷作清除ONOO?的实验。结果表明,本体系是一种灵敏价廉、可靠易行的筛选ONOO?清除剂的新方法。

自噬系统和蛋白酶体系统之间的相互联系

在真核细胞中已发现两条主要降解途径,即自噬系统和蛋白酶体系统.长期以来,这两条降解途径一直被认作是完全独立的路径,然而最近的证据强烈提示,这两条主要降解途径之间相互联系.其中,发现干扰这两条途径的任一条可影响另一条途径的活性,抑制蛋白酶体可刺激自噬活性.同时发现泛素的作用比先前想象更广泛,不仅具有标记蛋白酶体降解蛋白质这一"经典作用",还涉及自噬-溶酶体途径降解底物泛素化,是这些主要降解途径的共同标签.这些降解系统分享某些底物和调节分子,显示协同作用,在某些背景下,显示补偿功能.降解系统之间的协同和补偿作用在许多细胞过程中显得至关重要.因此这些降解系统异常或联系失常不仅导致细胞功能的异常,而且也与多种重要疾病的发生和发展密切相关.对这些降解途径功能及其联系的深入了解可拓展人们对这些降解途径的认识,有助于对多种细胞分解代谢过程的深入理解,也有助于相关新药的研发.

原花青素对·OH致损的鼠肝线粒体的保护作用

采用分光光度法和荧光偏振法,检测了原花青素对·OH引起的鼠肝线粒体损伤的保护作用。结果表明,原花青素能有效增加受损伤的线粒体的膜脂流动性,明显减少受损伤的线粒体肿胀及脂质过氧化物的形成,从而维护线粒体结构和功能的完整性。以上结果为原花青素的进一步开发提供了新的资料。

测定OH产生与清除的化学发光体系

一种产生和检测OH的化学发光体系;用抗坏血酸-Cu^(2+)-H_2O_2产生OH,加酵母扩增化学发光,并通过对测定条件的研究,得到测定的最佳方案。所做结果证明,其体系灵敏度高、稳定性好、特异性强、操作简便、测量快速,值得推广。

两种纤毛虫营养细胞和休眠细胞蛋白组成的比较分析

应用生化抽提和SDS-PAGE方法显示,膜状急纤虫(Tachysoma pellionella)的营养细胞含38条蛋白谱带,休眠细胞含29条蛋白谱带,两者共有谱带为26条,特有谱带各为12条和3条,相似度为77.6%;休眠细胞的包囊壁含22条蛋白谱带,细胞脱包囊后残留的包囊壁含15条蛋白谱带,两者共有谱带为14条,特有谱带各为8条和1条,相似度为76%。包囊游仆虫(Euplotes encysticus)的营养细胞和休眠细胞均含23条蛋白谱带,两者共有谱带为19条,特有谱带各为4条,相似度为82.6%;休眠细胞的包囊壁和细胞脱包囊后残留的包囊壁均含20条蛋白谱带,两者共有谱带为19条,特有谱带均为1条,相似度为95%。结果表明,两种纤毛虫的营养细胞向休眠细胞转化过程中,细胞结构的主要蛋白质成分发生了明显变化,这些变化与细胞在不同生理状态下结构的分化及其生命活动特征相关。形成“毛基体吸收型包囊”的急纤虫与形成“毛基体非吸收型包囊”的游仆虫相比较,前者营养期和休眠期细胞蛋白组成有更明显的差异,这可能与其细胞结构更大程度的脱分化有关;根据纤毛虫休眠细胞的包囊壁和细胞脱包囊后残留的包囊壁两者蛋白组成的差异推测,前者包囊壁可能含有与休眠细胞生命活动相联系的“活性”成分。

河狸香抗氧化作用

本研究用多种化学发光法测定了河狸香抗氧化作用。结果表明，河狸香能有效地清除O2、OH'和其它活性氧，抑制脂质过氧化，是一种良好的抗氧化剂。

CO_3·^-化学发光体系的研究和应用

·OH与碳酸盐反应产生CO3·?并产生化学发光。研究了其发光行为,对影响化学发光强度的实验因素进行优化,建立了检测CO3·?的化学发光体系。该体系由80μL2mmol/LCuCl、110μL6.5mmol/LH2O2和810μL75mmol/L碳酸盐缓冲液(pH9.8)组成,反应总体积为1mL。该体系具有简便、快速、灵敏和价廉的优点,已成功地应用于检测茶多酚、芦丁和槲皮素清除CO3·ˉ的能力,结果满意。

快速检测甲胎蛋白的免疫层析试条的研制

研制了可简便、快速检出原发性肝癌标志物——人血清中甲胎蛋白 ( AFP)的免疫层析试条。为此 ,研究了用国产试剂和材料制备胶体金、用此胶体金标记抗 AFP单抗的影响因素以及抗 AFP抗体固化条件、抗 AFP抗体与其 AFP结合能力等。结果表明 ,自制国产胶体金质量不亚于进口商品 ;金标单抗和固化抗体活性稳定 ,能分别显示出结合 AFP分子不同表位的特异性。所得检测试条的检出速度在 5至 2 0 min内 ,检测阳性阈值定为 2 0 ng AFP/m L血清。

一种新的测量单线态氧的化学发光体系

通过试验，建立了以磺化铝酞菁（Ａｌｐｃｓ）－海萤萤光素类似物（ＣＬＡ）经Ｈｅ－Ｎｅ激光照射产生并可检测单线态氧的化学发光体系，该体系灵敏、简便、快速、实用．

不同生理状态下膜状急纤虫大核DNA和线粒体DNA的多态性比较

为探索纤毛虫在营养及休眠条件下两套遗传系统的作用关系,对膜状急纤虫(Tachysomapellionella)营养细胞和休眠包囊大核DNA、线粒体DNA进行了RAPD比较。结果显示,在所选用的34条随机引物中,大核DNA共扩增出203条片段,其中以休眠包囊大核DNA为模板扩增出45条特有片段,以营养细胞大核DNA为模板扩增出36条特有片段,两者存在40%的差异。在所选用的32条随机引物中,线粒体DNA共扩增出216条片段,其中以休眠包囊线粒体DNA为模板扩增出35条特有片段,以营养细胞线粒体DNA为模板扩增出47条特有片段,两者有38%的差异。结果表明,膜状急纤虫休眠包囊与营养期的大核DNA结构存在显著的差异;两者的线粒体DNA结构也存在较大差异。这表明,膜状急纤虫在包囊形成过程中,大核及线粒体DNA结构可能都发生了一定的变化,并且这些变化可能与包囊形成过程中的形态结构和代谢活动等剧烈变化以及休眠状态下的生理生化变化密切相关。