AccQ-Tag法测定复方氨基酸注射液(18AA-Ⅴ)中17种氨基酸的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸含量的方法。方法采用AccQ—Tag法，以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯（AQC）为衍生试剂，与复方氨基酸注射液（18AA—V）中17种氨基酸柱前衍生，用Waters2695 HPLC仪器，AccQ—Tag^TM柱，以醋酸钠（pH4．95）缓冲液为流动相A，乙腈为流动相B，水为流动相C进行梯度洗脱，检测波长为248nm，柱温为37℃，进样量为5止。结果17种氨基酸的线性回归方程r值为0．9996～0．9999（n=5），平均回收率为93．3％～104．4％（RSD值为0．88％～3．05％，n=6）。结论本法快速，简便，结果准确。

改进HPLC法测定门冬氨酸鸟氨酸原料药中的有关物质

目的:改进测定门冬氨酸鸟氨酸原料药中有关物质的方法。方法:采用高效液相色谱法。色谱柱为Phenomenex Luna NH2(两根串联),流动相为0.02 mol/L磷酸二氢钾缓冲液(p H 5.6)-乙腈(40∶60,V/V),流速为1.0 m L/min,检测波长为205 nm,柱温为35℃,进样量为20μL。结果:马来酸、3-氨基-2-哌啶酮、琥珀酸、苹果酸、富马酸、β-门冬氨酰门冬氨酸检测质量浓度线性范围分别为5.398~26.992μg/m L(r=0.999 1)、5.204~26.021μg/m L(r=0.999 3)、5.149~25.749μg/m L(r=0.999 6)、5.174~25.874μg/m L(r=0.999 3)、5.164~25.823μg/m L(r=0.999 3)、5.194~25.973μg/m L(r=0.999 5);定量限分别为0.22、0.53、51.50、103.50、0.26、8.31 ng,检出限分别为0.13、0.26、10.30、20.70、0.13、2.08 ng;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均不超过2%;加样回收率分别为99.30%~102.31%(RSD=1.02%,n=9)、99.88%~100.89%(RSD=0.37%,n=9)、99.36%~101.53%(RSD=0.70%,n=9)、99.13%~102.65%(RSD=1.15%,n=9)、100.18%~101.45%(RSD=0.38%,n=9)、99.39%~100.81%(RSD=0.58%,n=9)。6批样品均未检出马来酸、琥珀酸和β-门冬氨酰门冬氨酸;3-氨基-2-哌啶酮含量为0.006%~0.056%,苹果酸含量为0.014%~0.071%,富马酸含量为0.000 5%~0.003 4%,最大未知杂质含量为0.013%~0.110%,未知杂质总含量为0.013%~0.120%。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性均较好,可用于门冬氨酸鸟氨酸原料药中有关物质的测定。

盐酸地巴唑原料药和片剂中有关物质的测定及最大未知杂质结构的推测

目的:建立测定盐酸地巴唑原料药及片剂中有关物质的方法,并对其最大未知杂质的结构进行推测。方法:采用高效液相色谱法测定盐酸地巴唑原料药及片剂中的有关物质(邻苯二胺、苯乙酸),色谱柱为KromasilC18,流动相为水-甲醇-冰醋酸-三乙胺(45∶55∶0.5∶0.5,V/V/V/V),流速为1.0 mL/min,检测波长为220 nm,柱温为30℃,进样量为10μL。采用超高效液相色谱-飞行时间质谱法、氢谱、碳谱推测最大未知杂质的结构,色谱柱为Waters Acquity UPLC BEH C18,流动相为水-甲醇(45∶55,V/V),流速为0.2 mL/min,柱温为30℃,进样量为1μL,离子源为电喷雾离子源(ESI),扫描模式为负离子扫描模式,一级质谱扫描范围为m/z 100~800,毛细管电压为3000 V,离子源温度为100℃,去溶剂气体为氮气,去溶剂气体流速为600 L/h,锥孔流速为50 L/h。结果:邻苯二胺、苯乙酸、盐酸地巴唑检测质量浓度的线性范围为0.427~4.27μg/mL(r=0.9989)、0.403~4.03μg/mL(r=0.9989)、0.82~8.20μg/mL(r=0.9999);定量限分别为0.0427、0.1343、0.0887μg/mL,检测限分别为0.0214、0.0671、0.0443μg/mL;精密度、稳定性、重复性、耐用性试验的RSD均小于2%;邻苯二胺的加样回收率为98.31%~102.81%(RSD=1.60%,n=9)、苯乙酸为99.78%~102.23%(RSD=0.70%,n=9)。6批盐酸地巴唑原料药中均未检出邻苯二胺,苯乙酸含量为0~0.04%,最大未知杂质含量为0.05%~0.25%,未知杂质总量为0.05%~0.31%;77批盐酸地巴唑片剂中,邻苯二胺含量为0~0.11%,苯乙酸含量为0~0.03%,最大未知杂质含量为0.06%~0.51%,未知杂质总量为0.10%~0.62%。推测最大未知杂质为2-(羟苯基甲基)苯并咪唑(羟苄唑)。结论:所建方法快速、准确、专属性好,可用于测定盐酸地巴唑原料药及片剂中的有关物质。最大未知杂质可能为苯并咪唑类化合物。

人血白蛋白中铝离子含量稳定性试验结果的探讨

目的:考察人血白蛋白铝离子含量的稳定性。方法:根据抽样原则,选取生产时间在2013年至2017年之间的158批人血白蛋白样品(4家国内生产企业共90批次,6家进口企业共68批次),按《中国药典》2015年版四部通则3208人血白蛋白铝残留量测定法,分别测定样品在批签发发行时(储存时间<8个月)与有效期内(储存时间为9个月至有效期内)的铝离子含量;并对其中29批次样品(4家国内生产企业共17批次,6家进口企业共12批次)进行加速稳定性试验(温度为30℃,湿度为65%)。结果:29批次的国产人血白蛋白有效期内的铝离子含量超过200μg·L^-1。国产人血白蛋白铝离子含量与储存时间呈高度相关,进口人血白蛋白铝离子含量与储存时间呈低度相关;人血白蛋白铝离子含量与加速稳定性试验(温度为30℃,湿度为65%)放置时间无相关性。长期稳定性试验中,采用特殊设计的多层聚乙烯塑料瓶作为包装材料的人血白蛋白铝离子含量增加率最低,其次为中性化处理的钠钙玻璃瓶,最高的为中性硼硅玻璃瓶。结论:长期稳定性试验结果表明本品在有效期内铝离子含量均呈上升趋势;加速稳定性试验(温度为30℃,湿度为65%)结果表明,本品铝离子含量无明显变化。药品包装材料对人血白蛋白铝离子含量增加有一定影响。

HPLC法测定复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中有关物质的含量

目的:建立测定复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中有关物质含量的高效液相色谱法。方法:采用Ultimate AQ-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.01 mol·L^(-1)磷酸氢二铵溶液(pH 2.0)-甲醇(98∶2)为流动相,流速为0.7 mL·min^(-1),检测波长为205 nm,进样量为50μL。结果:在选定的色谱条件下,环-(甘氨酰谷氨酰胺)峰、焦谷氨酸峰和环-(甘氨酰酪氨酸)峰与各自相邻色谱峰可以有效分离;环-(甘氨酰谷氨酰胺)、焦谷氨酸、环-(甘氨酰酪氨酸)分别在7.863～52.42μg·mL^(-1)、5.256～35.04μg·mL^(-1)、0.939 3～6.262μg·mL^(-1)的范围内线性关系良好(r=0.999 9);精密度试验的RSD值均小于0.2%;重复性试验的RSD值均小于2.0%;环-(甘氨酰谷氨酰胺)、焦谷氨酸和环-(甘氨酰酪氨酸)定量限分别为3.15、14.0和7.5 ng,检测限分别为0.95、7.0和2.5 ng;加样回收率分别为103.0%、101.5%和103.3%(n=9),RSD值分别为1.0%、0.9%和0.9%。9批样品环-(甘氨酰谷氨酰胺)的量为383～492 mg·L^(-1),焦谷氨酸的量为191～315 mg·L^(-1),环-(甘氨酰酪氨酸)的量为39～49 mg·L^(-1)。结论:该方法专属性强,结果准确,可用于复方氨基酸(15)双肽(2)注射液中有关物质的测定,能有效地反应药品质量。

HPLC法测定盐酸地巴唑原料及片剂含量

目的:建立HPLC法测定盐酸地巴唑原料及片剂含量,并与高氯酸滴定法进行比较。方法:色谱柱:Kromasil C18(250mm×4.6 mm,5μm);流动相:水-甲醇-冰醋酸-三乙胺(45∶55∶0.5∶0.5);流速:1.0 ml·min^-1;检测波长:220 nm;柱温:30℃;进样量:10μl。结果:盐酸地巴唑的线性范围为4.102~205.100μg·ml^-1(r=0.9999),盐酸地巴唑定量限为0.273μg·ml^-1,原料和片剂的回收率分别为101.2%和99.5%,RSD分别为0.9%和1.3%(n=9)。两种方法测定的原料和片剂含量结果无差异。结论:该方法操作简便,专属性强,结果准确,能有效反应药品质量,与高氯酸滴定法测定结果无明显差异,可作为盐酸地巴唑原料及片剂的含量测定方法。

盐酸地巴唑片质量分析研究

目的探讨盐酸地巴唑片的质量现状及存在的问题。方法按现行质量标准[WS1-24(B)-89]对抽验样品进行法定检验;建立以下探索性研究方法:模拟处方工艺考察盐酸地巴唑片表面色斑的来源;采用超高效液相色谱-飞行质谱联用(UPLC-QTOF-MS)法和核磁共振波谱(NMR)法鉴定杂质;采用紫外-可见分光光度(UV)法测定不同溶出介质、不同厂家产品的溶出度,并计算不同批次产品的含量均匀度;建立测定样品含量的高效液相色谱(HPLC)法。结果法定检验中,183批次样品的合格率为53.55%;探索性研究中,样品表面的色点可能由辅料引入或压片机缺乏及时保养维护导致;最大未知杂质为2-(羟基苯基)苯并咪唑;样品在pH 5.8和pH6.8的磷酸盐缓冲液中溶解度较低,在pH 1.0盐酸溶液中的溶出行为相似;9批次样品含量均匀度的A+2.2 S值>15.0;建立的HLPC法测定结果与高氯酸滴定法比较无显著性差异(P>0.05)。结论盐酸地巴唑片总体质量水平一般,其现行质量标准的有效性和安全性指标设立不足,不能完全有效控制药品质量,需尽快提高质量标准。

利用酸水解氨基酸法测定脑蛋白水解物片中肽的含量

目的：探讨脑蛋白水解物片中肽含量的测定方法。方法：采用盐酸水解多肽方法，利用WatersAccQ-Tag氨基酸衍生技术，使用Kromasil100-5C，8色谱柱（250．0mmX4．6mm，5μm）进行液相色谱分析，以乙酸钠（pH=5．00）缓冲液为流动相A，60％乙腈为流动相B进行梯度洗脱，检测波长为248nm，柱温为37℃，进样量为5肛l。水解后游离氨基酸总量扣除水解前氨基酸总量即为肽含量。结果：各氨基酸测定结果具有良好线性（r=-0．999 1-0．9999，n=5），未水解氨基酸平均回收率为100．6％（RSD为0．7％，n=9），肽含量平均回收率为100．4％（RSD为1。1％，n=9）。结论：本方法准确可行，可作为药品中肽含量测定的方法补充和完善。

柱前衍生液相色谱法与柱后衍生液相色谱法测定疫苗中游离甲醛残留量的对比研究

目的:建立柱前衍生液相色谱法与柱后衍生液相色谱法测定疫苗中游离甲醛残留量,并考察2种方法测定结果的一致性程度。方法:柱前衍生液相色谱法色谱条件:岛津LC-20AT液相色谱仪(SPD-20A紫外检测器),采用Kromasil 100-5-C_(18)(250 mm×4.6 mm)色谱柱,流动相为60%乙腈溶液,流速0.8mL·min^(-1),柱温40℃,测定波长360 nm。柱后衍生液相色谱法色谱条件:岛津LC-20AT液相色谱仪(SPD-M20A二极管阵列检测器和vector衍生装置),采用纳谱AQ-C_(18)(250 mm×4.6 mm)色谱柱,流动相为0.2%(V/V)磷酸溶液,流速1.0 mL·min^(-1),柱温25℃,检测波长412 nm;衍生溶液为醋酸缓冲液,流速0.5 mL·min^(-1),温度100℃。分别对2种方法的精密度、重复性、加样回收率等项目进行考察,并对测定结果进行显著性检验(F检验和t检验)。结果:柱前衍生液相色谱法线性范围为0.025~100μg·mL^(-1)(R=0.9999,n=12),精密度RSD为0.06%,重复性RSD为0.3%~1.4%,平均加样回收率为97.3%~104.8%(RSD为0.7~2.9%),定量限为0.02μg·mL^(-1),检出限为0.01μg·mL^(-1)。柱后衍生液相色谱法线性范围为0.025~100μg·mL^(-1)(R=0.9999,n=12),精密度RSD为0.02%,重复性RSD为0.07%~3.5%,平均加样回收率为105.6%~114.6%(RSD为0.3%~1.9%),定量限为0.02μg·mL^(-1),检出限为0.006μg·mL^(-1)。对21批样品测定结果的F检验和t检验结果表明两者无显著性差异。结论:2种方法操作简便,专属性强,灵敏度高,结果准确,可用于疫苗中游离甲醛残留量测定。

气相色谱法测定人血白蛋白中乙醇残留量

目的:建立气相色谱法测定人血白蛋白中乙醇残留量。方法:采用DB-624毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm×1.8μm);氢火焰离子化检测器(FID);进样口温度为200℃,检测器温度为250℃;载气为氮气,载气流速为2.0 mL·min^(-1);采用程序升温法:起始温度为40℃,保持8 min,以50℃·min^(-1)速度升温至200℃,保持5 min。进样方式为顶空进样,顶空平衡温度为80℃,平衡时间为30 min。结果:乙醇在1.0056~377.0975μg·mL^(-1)范围内与峰面积线性关系良好(r为0.9998,n=9);精密度的RSD为2.5%,重复性的RSD为1.5%;平均加样回收率为100.2%(n=9,RSD为3.4%)。定量限为1.0056μg·mL^(-1),检出限为0.3352μg·mL^(-1)。测定人血白蛋白原液59批和成品78批,均低于250μg·mL^(-1)。结论:该方法操作简单、结果准确,灵敏度高,专属性强,可用于人血白蛋白中乙醇残留量测定。

水解氨基酸法测定注射用促肝细胞生长素中肽的含量

探讨注射用促肝细胞生长素中肽含量的测定方法并比较不同厂家产品的质量差异。采用盐酸水解多肽方法,利用AccQ-Tag氨基酸衍生技术,使用Kromasil 100-5 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行液相色谱分析,水解后游离氨基酸总量扣除水解前氨基酸总量即为肽含量。各氨基酸测定结果具有良好线性(r=0.999 1～0.999 9,n=6),游离氨基酸回收率为101.1%～104.6%,水解氨基酸平均回收率为101.8%～104.1%。本方法可作为注射用促肝细胞生长素中肽含量测定的方法补充和完善。

石墨炉原子吸收法测定氢化大豆油中镍的含量

目的建立测定氢化大豆油中镍含量的方法。方法采用石墨炉原子吸收光谱法，以塞曼背景校正，标准加入法测定。结果标准加入法所得相关系数r=0．9995，平均加样回收率为91．4％-97．0％。结论本方法操作简单，结果稳定准确，灵敏度高，可有效控制该药用辅料的质量。

胃蛋白酶片质量分析及探索性研究

目的:评价国内不同企业生产的胃蛋白酶片的质量,并从溶出曲线、纯度、比活力等方面进行探索性研究,为企业提高产品质量提供改进方法。方法:采用4种溶出介质考察各企业产品的溶出行为;采用HPLC法,以1.7 mol·L^-1硫酸铵磷酸盐缓冲液(pH 7.0)为流动相,梯度洗脱的方法测定胃蛋白酶片的纯度,并与SDS-PAGE蛋白电泳进行比对;采用蛋白质测定法与效价测定法对比活力进行研究。结果:(1)53批样品中,溶出度最大值为112%,最小值为28%;(2)HPLC结果与SDS-PAGE电泳结果显示胃蛋白酶为多组分物质;(3)原料比活力为12.2~13.2 U·mg-1蛋白,片剂比活力为8.0~15.3 U·mg-1蛋白。结论:胃蛋白酶片现行质量标准安全性和有效性指标控制不足,建议企业加强药品生产全过程风险管理,降低产品批次间的差异,进一步提高制剂工艺的稳定性。本文为全面评价胃蛋白酶片的质量和完善其质量标准提供借鉴和参考。

小牛血去蛋白提取物注射液质量分析

目的:评价国内不同企业生产的小牛血去蛋白提取物注射液系列品种的质量现状及存在问题。方法:采用法定检验方法和探索性研究进行样品检验,探索性考察样品的活力测定,肽段分析、降压物质、钾、钠含量等。结果:按照法定检验,总合格率为81.6%,不合格项目主要为总固体、可见异物、呼吸活性等。结论:目前国内小牛血去蛋白提取物注射液系列产品的质量标准及产品质量均存在一定缺陷,需进一步完善。

琼脂糖凝胶电泳法测定人血白蛋白及人免疫球蛋白类制品的纯度

目的:建立琼脂糖凝胶电泳法测定人血白蛋白及人免疫球蛋白类制品的纯度。方法:采用Helena公司的SPIFE Touch型自动电泳仪及配套的试剂盒,对琼脂糖凝胶电泳法的方法学进行验证。以供试品浓度5%,对33批人血白蛋白样品以及16批人免疫球蛋白类制品进行纯度测定,并与《中国药典》2015版规定方法(醋酸纤维素薄膜法)的测定结果进行比较。结果:该方法检测正常人血清中白蛋白与免疫球蛋白的RSD分别为1.15%和1.45%,最佳供试品蛋白浓度为5%,仪器通道间差异的RSD小于0.4%,重复性的RSD均小于0.5%。对比两种方法的检测结果,人血白蛋白的两法结果趋势一致且高度相关(Pearson′s r=0.88),但琼脂糖凝胶电泳法比醋酸纤维素薄膜法测定结果低1%~4%;人免疫球蛋白类制品的检测结果两种方法基本一致(Pearson′s r=0.66,两法差值小于1%)。结论:该法经方法学验证,可作为人血白蛋白和人免疫球蛋白类制品的纯度测定替代方法。

恩替卡韦分散片微生物限度检查方法适用性研究

目的建立恩替卡韦分散片的微生物限度检查方法。方法参照2015年版《中国药典》《药品微生物检验手册》和《中国药品检验标准操作规范》(2010版)收载的微生物限度检验方法检查恩替卡韦分散片微生物限度。结果采用1∶20的供试液进行试验,计数方法用平皿法(倾注法),各试验菌比值均在0.5~2.0内;控制菌用《中国药典》方法,各阳性试验菌均检出,阴性对照菌均无菌生长。结论所建立的微生物限度检查方法可行,能有效检出该药品中污染存活的微生物。

他克莫司胶囊微生物限度检查方法的建立

目的:建立他克莫司胶囊微生物限度检查方法。方法:参照《中国药典》(2015版)、《药品微生物检验手册》和《中国药品检验标准操作规范》(2010版)收载的微生物限度检验方法,建立他克莫司胶囊微生物限度检查方法。结果:实验证明采用薄膜过滤法对他克莫司胶囊进行微生物限度检查,能有效检出该药品中污染存活的细菌,检测后回收比值均在0.5~2范围内。结论:建立了适用于他克莫司胶囊微生物限度检验的薄膜过滤法,该法能有效地滤除药品中抑菌物质的干扰,其检出率高。

阿德福韦酯片微生物限度检查方法的建立

目的按照《中华人民共和国药典》2015年版进行阿德福韦酯片的微生物限度检查,并对其进行方法适用性试验,以建立阿德福韦酯片微生物检查方法。方法参照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则1105非无菌产品微生物限度检查:微生物计数法、1106非无菌产品微生物限度检查:控制菌检查法和1107非无菌药品微生物限度标准。取供试品10 g,加pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 mL,用力振摇,溶解,制得1∶10供试液,按平皿法(倾注法)进行试验。结果采用平皿法(倾注法)对阿德福韦酯片进行微生物限度检查,供试品最低稀释级别(即1∶10)也能有效检出该药品中污染存活的需氧菌、霉菌和酵母菌。各试验菌回收比值均在0.5~2范围内,控制菌生长良好。结论建立了适用于阿德福韦酯片的微生物限度检查方法。

气相色谱法测定胃蛋白酶中丙酮的残留量

目的:采用气相色谱法测定胃蛋白酶丙酮的残留量,对国内市场上胃蛋白酶的丙酮残留进行风险监测。方法:采用DB-WAX(15 m×1 mm,0.53μm)色谱柱,以氮气为载气,流速为2.0 mL·min^(-1),柱温60℃,进样口温度200℃,FID检测器温度250℃,顶空瓶平衡温度85℃,平衡时间45 min,分流比1∶1,对胃蛋白酶进行丙酮残留检测。结果:丙酮浓度在31.75~500μg·mL^(-1)时,丙酮含量与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9997);检测限与定量限分别为0.0126和0.126μg·mL^(-1);精密度与重复性良好,RSD分别为1.16%和3.47%;胃蛋白酶平均回收率94.84%,RSD为2.01%。在全国征集到的13批样品中,有12批胃蛋白酶的丙酮残留检测结果在0.04%~0.39%之间,有1批胃蛋白酶的丙酮残留检测结果为7.41%。结论:该方法可用于胃蛋白酶中丙酮残留的检测。丙酮作为胃蛋白酶生产过程中引入的杂质,应予以关注。

HPLC法测定小儿复方氨基酸注射液(19AA-Ⅰ)中乙酰酪氨酸含量

目的建立测定小儿复方氨基酸注射液（19AA-Ⅰ）中乙酰酪氨酸含量的高效液相色谱法（high performance liquid chromatography,HPLC）。方法采用Agilent 1200型高效液相色谱仪,使用Agilent Hypersil ODS色谱柱（250 mm×4.0 mm,5μm）,以20 mmol/L磷酸二氢钠溶液（用磷酸调节p H值至2.5）-乙腈（90∶10）为流动相,流速1.0 m L/min,检测波长210 nm,柱温25℃。结果乙酰酪氨酸峰与其他氨基酸色谱峰分离度良好,乙酰酪氨酸在12.062~120.62μg/m L范围内呈良好的线性关系（r=0.9999）,平均加样回收率（n=9）为100.0%,RSD%（n=9）为0.9,其定量限（S/N=10）为0.15μg/m L。结论建立的HPLC法可用于小儿复方氨基酸注射液（19AA-Ⅰ）中乙酰酪氨酸的质量控制。