复方甘草酸苷注射液治疗传染性非典型肺炎的临床观察

目的 :观察复方甘草酸苷注射液治疗传染性非典型肺炎的疗效。方法 :将26例传染性非典型肺炎患者分成治疗组和对照组 ,治疗组在对照组治疗基础上加用复方甘草酸苷注射液。结果 :治疗组的症状体征改善时间、丙氨酸氨基转移酶复常时间、X线胸片肺部阴影吸收消散时间均明显短于对照组。结论 :复方甘草酸苷注射液有抑制病毒复制、保肝降酶、抗炎、抗渗出作用 ,毒副作用小 ,可用于治疗传染性非典型肺炎。

大容量人源噬菌体抗体库的构建

目的:构建大容量易于改造成Diabody的噬菌体单链抗体库,筛选人源性抗体。方法:从正常成人外周血和新生儿脐血中分离淋巴细胞提取RNA,经RT-PCR扩增轻重链可变区基因(VL和VH),通过重叠PCR(over-lapPCR)将VL和VH拼接成单链抗体(ScFv)基因(其中VH两侧是两个非同源的loxp基因),并克隆入噬菌体表达载体PDF,得到初级噬菌体抗体库。将初级抗体库以高MOI超感染Cre+菌株BS1365,通过loxp-cre定位重组系统,介导轻重链在菌内重组配对,然后低感染XL1-Blue菌,得到大容量的次级抗体库。以多种不同抗原对库进行筛选,得到多样性较好的特异性抗体。结果:经超感染重组,得到1·2×1010的大容量抗体库。经三种蛋白抗原筛选,均得到多株特异性较好的噬菌体抗体,并成功构建为活性较好的Diabody。结论:经Loxp-Cre定位重组系统在单细胞内重组,能够高效地构建大容量噬菌体单链抗体库。

抗HBsAg和抗RBC双特异minibody载体的构建及表达

目的 :用抗HBsAg和抗RBC单链抗体构建双特异minibody抗体模型。方法 :将人IgG1CH3 经点突变方式 ,在CH3界面由大分子氨基酸代替小分子氨基酸形成“knob”(T36 6W) (杵状结构 ) ,另一个CH3 分子由 3个小分子氨基酸代替 3个大分子氨基酸形成“hole”(T36 6S :L36 8A :Y40 7V) (臼状结构 ) ,并在此基础上在适当位置引入半胱氨酸残基形成二硫键 (S35 4C :T36 6W /Y34 9C :T36 6S :L36 8A :Y40 7V)。然后将“knob”和“hole”分别接连于抗HBsAg和抗RBC单链抗体基因 3’端 ,并将两基因组装于同一表达载体中 ,在大肠杆菌中分泌表达。结果 :依CH3 界面不同共构建 3种不同的表达载体 ,分别带有①野生型CH3 ,②杵臼结构 (T36 6W/T36 6S :L36 8A :Y40 7V)突变型CH3 ,③杵臼结构加二硫键 (S35 4C :T36 6W/Y34 9C :T36 6S :L36 8A :Y40 7V)突变型CH3 。大肠杆菌分泌表达后 ,ELISA法检测抗HBsAg和抗RBC活性 ,3种表达上清均有相同的抗HBsAg和抗RBC活性 ;两种带有突变型CH3 的minibody用血球凝集法可检测到抗HBsAg和抗RBC双特异活性。结论 :CH3 界面经适当改造可促进异源二聚体形成 ,并在大肠杆菌获得功能性表达 ,得到双特异minibody。

RT-PCR定量检测汉坦病毒RNA及在临床诊断中的价值

目的 建立敏感特异的检测肾综合征出血热（HFRS）病人血清中汉坦病毒RNA的定量RT-PCR方法。探讨HFRS患者血清中病毒RNA持续时间，水平及其病情严重程度的关系。方法应用套式RT-PCR扩增引物，自行设计和制备标准品获得标准曲线，使用实时荧光定量PCR技术检测了HFRS（SEO型）血清中的汉坦病毒的载量。结果14例HFRS病人血清中，SEO RNA阳性11例，SEO型病人的病毒载量一般可达10^2～10^4 copies／ml。其中2例发病第8天，2例第9天的病人血清PCR结果仍为阳性。结论：我们采用的实时荧光定量PCR方法可很好的反映HFRS病人血清中汉坦病毒RNA含量。HFRS病人病毒血症持续时间可超过1周，血清中RNA水平与病情严重程度有关。

新流行期汉城型汉坦病毒全S及部分L与M基因核苷酸序列测定及研究

目的 :为获得 SEO型病毒基因组更为详尽的资料 ,也为局部爆发的原因提供科学的资料。方法 :病毒分离、Mc Abs分型 RT- PCR扩增及核苷酸序列测定。结果 :首次测出我国 SEO型病毒较为完整的全 S片段及部分 L 片段和 M片段并与 76 - 118、Seoul、SR1 1 (在全 S片段 ) ;76 - 118、C4、L99、Seoul(在 L 片段 ) ;10 A、A9、C1 - 1 、JB3、L99、SD2 2 7、SD70 、SEO(M片段 )株核苷酸同源性进行比较 ,分别为 6 4.2 %、 91.89%、 96 .8%及 70 .8%、 72 .0 %、 95 .3%、 95 .9%及 97.3%、6 3.0 %、 6 6 .0 %、 93.0 %、 94.3%、 96 .3%、 97.3%、 94.7推导出的氨基酸同源性分别为 :80 .5 %、 95 .4%、 97.36 %及 75 .6 %、75 .1%、 97.7%、 97.36 %及 96 .0 %、 78.8%、 79.8%、 94.9%、 98.0 %、 97.0 %、 98.0、 97.0 %。结论 :1不存在病毒基因组间的重排 ,即基因重排不是造成此次 HFRS流行的原因。 2 SEO型病毒表现出明显的地理聚集现象。

卡培他滨在进展期结直肠癌治疗中医疗成本的分析

目的 :评价卡培他滨在进展期结直肠癌治疗中的医疗成本。方法 :比较卡培他滨与经典MAYO方案在临床疗效和医疗费用方面的特点。结果与结论 :卡培他滨价格较传统药物贵 ,但从医疗资源角度看 ,应用卡培他滨节省的医疗成本最大限度地抵消了药价的成本 ,其医疗成本优于传统药物。

DMSO诱导的MEC—1细胞在裸鼠中的致瘤性实验

本实验以一定浓度的二甲基亚砜（ＤｉｍｅｔｈｙｌＳｕｌｆｏｘｉｄｅＤＭＳＯ）对涎腺粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ—１细胞进行体外诱导，诱导后的细胞及未诱导的细胞以１．１×１０６浓度分别接种裸鼠。体外经细胞形态及ＤＮＡ指标观察，诱导后ＭＥＣ—１细胞异型性降低，有向成熟细胞分化的趋势。动物实验，诱导组成瘤率７５％，对照组成瘤率１００％，两组有显著差异（Ｐ＜０．０１）；诱导组肿瘤生长速度缓慢，快速生长期肿瘤倍增时间延长（Ｐ＝０．０１２４＜０．０５）；诱导组裸鼠生存期较长。

欧盟药品价格管理经验及对我国的启示

目的:为完善我国药品价格管理提供参考。方法:比较欧盟主要国家药品价格管理方式,总结其经验。结果与结论:建议完善我国药品价格制订原则,建立药品价格动态调节机制,实行药品价格分类管理。

自身抗体对干燥综合征诊断意义的研究进展

干燥综合征（SS）是一种全身自身免疫性疾病，我国人群患病率为0．3％-0．7％，老年人群中患病率为3％-4％，临床主要表现为口干、眼干，全身症状可有乏力、低热、关节痛、皮疹，30％～50％患者有肾损害，还可表现为消化不良、肝硬化、周围神经炎、甲状腺功能低下、

汉坦病毒重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化

目的:探讨重组蛋白检测血清中特异性IgA、IgM抗体的动态变化。方法:用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白(rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原,检测14例61份急性期SEO型病人系列血清中的特异性IgA、IgM,寻找HFRS病人IgA、IgM抗体的动态变化规律。结果:几乎所有HFRS病人早期即有强烈的IgA、IgM应答,尤其是针对rNP的抗体出现早且滴度高,抗rGP出现亦早,但滴度偏低。结论:应用rNP和rGP为抗原,在发病早期检测IgM的同时,检测I-gA,可以起到互补的作用,特别是对HFRS早期临床表现不典型的病例。

保定地区肾综合征出血热病人血清PCR分型及核苷酸序列测定

明确保定肾综合征出血热疫区型别。［方法］采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测急性期肾综合征出血热病人血清汉坦病毒ＲＮＡ，并进行分型及部分核苷酸序列测定和与国内外汉坦病毒的代表株进行比较。［结果］３１份急性期病人血清经分型，２４份为家鼠型（ＳＥＯ）型，２份为野鼠型（ＨＴＮ）型，测得ＳＥＯ型Ｃ_３株Ｍ基因（１９８５到２３１４位），ＨＴＮ型ＬＢＹ株Ｍ基因（１９９６到２３１４位）核苷酸序列与国内外代表株比较：Ｃ３与７６－１１８、Ａ_９、ＬＢＹ核苷酸同源性分别为６８．７９％、６７．５％、６８．０３％；氨基酸同源性分别为７７．２７％、７７．２７％、７８．３％。Ｃ_３与Ｓｅｏｕｌ、Ｒ_(２２)相比，核苷酸同源性分别为９５．１５％、９３．９４％；氨基酸均为９７．２７％。ＬＢＹ与７６－１１８、Ａ_９、Ｓｅｏｕｌ、Ｒ_(２２)核苷酸同源性分别为９８．７５％、８７．１５％、６８．３４％、６８．０３％；氨基酸同源性分别为 １００％、９６．２３％、７８．３％。［结论］首次发现与韩国 ７６－１１８同亚型ＨＴＮ型汉坦病毒在我国的存在，首次证实 ＨＴＮ型汉坦病毒在保定的存在，明确保定疫区为混合性疫区。

一种用基因工程抗体快速检测HBsAg的方法

目的 用抗乙肝表面抗原 (HBsAg)和抗红细胞 (RBC)双特异Diabody ,建立一种简便、快速、用全血检测血中HBsAg的方法。方法 用病人指血 ,耳血 ,抗凝全血 ,或残留未凝血细胞的非抗凝全血 2 0 μl与 5 0 μl双特异Diabody上清混合 ,分别在玻片和 96孔U型板观察血细胞凝集。结果 实验的简便性和敏感性以玻片法为优。用凝集法与ELISA法平行检测病人5 12例 ,以ELISA法结果为标准 ,凝集法假阳性率 0 % (n =3 47) ,假阴性率 2 4 % ( 4 / 165 )。自身红细胞凝集法检测HBsAg与ELISA方法符合率 97 6%。结论 本方法的优点是快速。

社区医院就诊患者的特点研究

目的研究社区就诊人群的疾病特点,指导社区医疗工作。方法收集2008年8-11月社区门诊就诊患者进行分析。精神评定用Zong焦虑自评量表(SAS)和抑郁自评量表(SDS)。结果社区就诊的患者年龄偏大,有66%的患者年龄在50～79岁,患2种以上慢性病者占11.2%以上,骨关节炎患者占9.2%以上,焦虑抑郁患者占28.7%。结论社区就诊患者以老年人为主,以高血压、糖尿病等慢性病多见,焦虑抑郁状态也不少。社区医疗应以疾病为中心的模式转变为以健康为中心的生物-心理-社会医学模式,关心患者身心健康、进行健康教育至关重要。

二硫键稳定的双特异diabody的构建及表达

目的 :在双特异diabody中设计和引入二硫键结构 ,提高其稳定性。 方法 :在抗HBsAg/RBC双特异dia body表达载体中分别将抗HBsAg或抗RBC抗体的轻重链可变区基因适当部位进行突变 ,引入半胱氨酸残基 ,使diabody结构中形成共价键。大肠杆菌中分泌表达或包含体表达。 结果 :使抗HBsAg/RBC双特异diabody的热稳定性和在尿素中的稳定性得到了较大程度的提高 ,改善了diabody的性能。 结论

人源性抗地高辛单链抗体(scFv)及diabody的获取

目的:从大容量噬菌体抗体库中筛选人源性抗地高辛单链抗体(scFv),并构建双价抗体(diabody)。方法:以固相化的Dig对构建的大容量噬菌体抗体库进行筛选,4轮后挑取集落,用ELISA法鉴定其特异性,并对抗Dig阳性抗体基因进行DNA指纹分析及测序分析。选取活性好的抗体基因进行改造,构建diabody。结果:在抗体库的筛选过程中可见到明显的富集现象,获得4株可与Dig特异性结合的人源单链抗体,经DNA指纹分析及测序分析证明为不同抗体基因,分泌抗Dig抗体的阳性克隆的可变区基因轻链均属于λ第1亚群,重链基因分别属于第3和第4亚群。选取4号克隆进行基因改造,构建diabody的表达载体,获得活性较好的diabody。结论:利用噬菌体抗体技术获得了人源性抗Dig的抗体,并改造成应用前景较好的diabody,为临床诊断及治疗洋地黄类药物的中毒提供了具有实用价值的人源抗体。

六亚早基二乙酰胺体外诱导人粘液表皮样癌细胞分化的实验研究

用六亚甲基二乙酞胺（ＨＭＢＡ）作为分化诱导剂，对人涎腺粘液表皮样癌细胞系ＭＥＣ－１细胞进行体外诱导（诱导浓度１ｍｍｏｌ／Ｌ），探讨ＨＭＢＡ对粘液表皮样癌细胞的诱导分化作用。实验经细胞生长动力学、细胞ＤＮＡ含量、核仁区嗜银蛋白染色指标观察，显示在ＨＭＢＡ作用下ＭＥＣ－１细胞有向成熟细胞分化的趋势，而且诱导所需浓度低，分化作用明显，有进一步研究价值。

双价和双特异性Diabody的构建及表达

单链抗体（ScFv）是由一个重链可变区（VH）、一个轻链可变区（VL）经连接肽（linker）连在一起构成的单价小分子抗体,为使其能组装成双价,我们对一个抗人红细胞的ScFv进行了改造,将其连接肽由17个氨基酸[SR（GGGGS）3]缩短为6个氨基酸（SRGGGS）,强迫不同分子间的VH和VL组合成FV,从而形成双价小分子抗体（Diabody）,在大肠杆菌中分泌表达后,显示:①具有血球凝集活性:抗人RBC ScFv虽可与RBC结合。

人粘液表皮样癌MEC-1细胞诱导分化实验研究

恶性肿瘤是一种分化异常疾病，其细胞属于未分化成熟的细胞，具有再分化潜能。许多恶性肿瘤细胞在一些分化诱导剂的作用下，可以向良性或正常细胞分化，粘液表皮样癌是比较多见的恶性唾液腺肿瘤，发病率居恶性唾液腺肿瘤首位，其对传统化疗不敏感，放射治疗效果不稳定，低分化型者手术局部复发病率高，

汉坦病毒重组蛋白检测血清中特异性IgA抗体动态变化的研究

目的探讨重组蛋白检测血清中特异性IgA抗体的动态变化及其诊断价值。方法用杆状病毒表达的汉坦病毒重组核蛋白(rNP)和糖蛋白(rGP)为抗原,检测14例61份急性期SEO型病人系列血清中的特异性IgA抗体,寻找肾综合征出血热(HFRS)病人IgA抗体的动态变化规律。结果几乎所有HFRS病人早期即有强烈的IgA应答,尤其是针对rNP的抗体出现早且滴度高,抗rGP出现亦早,但滴度偏低。结论应用rNP和rGP为抗原,在发病早期检测IgA抗体,具有较好的特异性诊断价值,特别是对HFRS早期临床表现不典型的病例。

保定地区HFRS流行高峰年中1株家鼠型病毒株的分离鉴定及其核苷酸序列分析

目的 探讨保定地区 HFRS流行高峰的原因。方法 对 HFRS病人急性期血清用 RT- PCR方法进行病毒基因分型 ,从 1例家鼠型 (SEO型 )汉坦病毒感染的病人血清中分离病毒 ,并进行核苷酸序列测定。结果 31例病人中 ,2例为姬鼠型(HTN型 ) ,2 4例为家鼠型 (SEO型 ) ,1例 SEO型病毒经分离鉴定测序后与 SEOU L、R2 2 株进行比较 ,M基因核苷酸同源性分别为 :95 .15 %、93.94% ;氨基酸同源性均为 97.2 7%。结论 所分离 SEO型汉坦病毒为 1996年流行高峰年的主要流行株 ,未发现病毒基因片段的重排 ,流行不是由病毒基因重排引起。不同地区 SEO型病毒分子结构差异较小 。