桑黄总黄酮的提取、组分分析及其生物活性评价

为系统研究桑黄中总黄酮的提取工艺,明晰总黄酮中黄酮类化合物的组成及含量,探讨桑黄总黄酮的生物活性,本研究采用响应面法优化了桑黄总黄酮的提取工艺,高效液相色谱法分析了桑黄总黄酮的组成,并检测其生物活性。实验结果表明,以桑黄总黄酮得率为指标的最优提取条件为提取温度73℃、固液比1:50 g/mL、提取时间3 h,在此提取条件下桑黄总黄酮的得率达到了2.68%;采用高效液相色谱法测定了桑黄总黄酮中的黄酮种类及其含量,发现桑黄总黄酮中主要含有花旗松素、槲皮素和山奈酚,其中花旗松素含量最高达到3727.31 mg/kg;桑黄总黄酮生物活性分析结果显示,其具有一定的体外抗氧化、降脂、降糖活性,在其浓度为14μg/mL时对DPPH自由基的清除率达到58.63%±0.45%,浓度为0.08 mg/mL时,对羟基自由基的清除率达到52.51%±1.49%;桑黄总黄酮的降脂活性实验结果显示,桑黄总黄酮在浓度为6 mg/mL时对胰脂肪酶的抑制率达到10.56%±0.06%,在浓度为4 mg/mL时对胆固醇胶束溶解度的抑制率达到了32.59%±0.78%;桑黄总黄酮具有明显的降糖活性,其对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的IC_(50)分别为71.42 mg/mL和97.28 mg/mL。

桑黄改善非酒精性脂肪肝的分子机制研究

目的:为了探讨桑黄(Sanghuang Kangneng)醇提物(ethanol Sanghuang Kangneng,ESK)改善非酒精性脂肪肝的相关分子作用机制。方法:取人正常肝细胞WRL68细胞株作为体外试验对象,先使用游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)诱导WRL68细胞为高脂细胞,用不同质量浓度ESK处理高脂细胞,高效液相色谱法对ESK定性分析,MTT法测定细胞活力,试剂盒测定细胞内总蛋白、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量,实时荧光定量PCR分析细胞内基因表达水平。结果:高脂WRL68细胞随ESK质量浓度增加,细胞内脂质含量显著降低。ESK通过抑制细胞内Srebp-1c和Fas基因表达,抑制脂质合成;通过增加细胞内PPARα基因表达,促进脂肪酸氧化。结论:ESK通过抑制细胞内脂质增加,促进脂肪酸β氧化相关基因的表达,减缓非酒精性脂肪肝的第一发病阶段。

酶辅助超声微波协同提取桑黄黄酮及其抗氧化活性研究

采用纤维素酶辅助超声微波协同提取桑黄黄酮。以黄酮得率为指标,在单因素试验的基础上通过响应面法优化提取工艺,并分析桑黄黄酮的抗氧化活性。结果表明:最优提取工艺为纤维素酶添加量1.5%(以桑黄粉质量为基准)、液料比22∶1(mL/g)、提取温度50℃、提取时间39 min,在此条件下,桑黄黄酮得率为4.55%±0.23%。抗氧化活性试验结果显示,桑黄黄酮清除DPPH·、·OH和ABTS^(+)·的IC_(50)分别为0.046、0.056、0.115 mg/mL,表明桑黄黄酮具有较好的抗氧化活性。

桑黄不同极性溶剂分步提取物功能成分与生物活性及相关性分析

采用体积分数60%乙醇提取桑黄,依次用4种不同极性溶剂对乙醇粗提物分步萃取,分别减压浓缩后获得体积分数60%乙醇粗提物(SEP)、石油醚提取物(PP)、氯仿提取物(CP)、乙酸乙酯提取物(EP)、正丁醇提取物(NP)和水提取物(WP),分析其主要功能成分及抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶能力。结果表明:EP中多酚和黄酮含量最高;WP中多糖和三萜类化合物含量较高;PP中4种功能成分均较低。EP对DPPH·和·OH的清除能力及还原力最好,对α-葡萄糖苷酶的抑制效果最强。相关性分析表明,抗氧化和抑制α-葡萄糖苷酶能力与其多糖、多酚和黄酮的含量关系密切。

黄芪复方浸膏制备工艺优化及对大鼠缺铁性贫血的改善研究

以黄芪、大枣、当归、白芍、熟地黄为主要原料制备黄芪复方浸膏。以浸膏得率为指标,在单因素试验的基础上,采用正交试验优化黄芪复方浸膏提取工艺,并研究其对缺铁性贫血(IDA)大鼠的改善作用。结果表明:最佳浸膏提取工艺为液料比25∶1(mL/g)、浸提温度100℃、浸提时间2.0 h、浸提次数3次,在此条件下浸膏得率为37.21%。黄芪复方浸膏具有改善IDA大鼠的作用,可作为保健食品配料。

蝉花虫草中核苷类成分的分离纯化和鉴定

对蝉花虫草子实体中的核苷类成分进行分离纯化,并对获得的组分进行鉴定。结果显示:采用65%乙醇超声波法提取的蝉花虫草子实体提取物于10000r/min离心5min后,经反相HPLC制备液相制备(色谱条件为:流动相为0～100%甲醇,梯度洗脱,洗脱速率为15mL/min,进样量1mL,检测波长260nm),分离得到6种主要化合物,经鉴定,6种化合物均为核苷类产品,分别为胞嘧啶、尿苷、肌苷、鸟苷、腺苷和虫草素。对6种化合物进行纯度验证,结果表明,6种化合物的纯度均在95%以上,说明采用反相HPLC分离制备蝉花虫草中的核苷类成分方法是可行的,并且该方法简便、准确。

虫草饲料添加剂对肉仔鸡肌肉营养成分的影响

将一种虫草无性型菌株P5深层液体发酵菌丝体作为饲料添加剂,在日粮中按0.25%的添加量喂养土杂商品肉用仔鸡,56日龄屠宰,取同一部位的胸肌和腿肌进行主要营养成分的测定,考察虫草饲料添加剂对肉仔鸡肌肉营养成分的影响。研究结果表明:与对照组相比,在日粮中添加0.25%的虫草饲料添加剂不仅可显著提高肉仔鸡胸肌和腿肌中蛋白质和氨基酸的总含量(P<0.05),并且可显著提高肉仔鸡肌肉中人体必需氨基酸和风味氨基酸的含量(P<0.01)。实验结果还可以看出,虫草饲料添加剂对肉鸡肌肉中水分、灰分和微量无机元素的含量没有显著性影响(P>0.05),但是可以显著降低胸肌和腿肌中粗脂肪的含量(P<0.05)。

人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性

以天然蝉花虫草生药为对照,以中国仓鼠卵巢肿瘤(Chinese?hamster?ovary,CHO)细胞株为模型,采用刃天青染色法检测人工培育蝉花虫草的抗肿瘤活性。结果表明:人工培育蝉花虫草和天然蝉花虫草生药都具有抗肿瘤活性,且活性成分均为中等极性化合物。对人工培育蝉花虫草中的抗肿瘤活性成分进行分离制备,得到两种化合物,命名为化合物1和化合物2。化合物1经鉴定为虫草素,化合物2经纯度验证为纯品,活性验证结果发现当其质量浓度为50?μg/m L时,对CHO细胞抑制率高达(94.55±2.33)%。

古尼拟青霉小孢变种的主要有效成分分析

对古尼拟青霉小孢变种RCEF0864的深层发酵产物进行了有效成分分析,结果表明,菌丝体和发酵液中氨基酸总量明显高于冬虫夏草生药;菌丝体中粗蛋白、总糖、麦角甾醇、甘露醇及腺苷等多种物质的含量亦高于冬虫夏草生药;RCEF0864深层发酵菌丝体和发酵液中均含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca等元素,尤以Ca的含量最高;用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对RCEF0864菌丝体和发酵液冻干粉甲醇提取物中的清除自由基活性物质进行了分析,发现2种提取物均具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0 mg/mL,37℃下保温10 min时,2种提取物对0.4 mg/mL的DPPH自由基的清除率分别为53.86%和59.66%。

蝉拟青霉代谢产物清除DPPH自由基和抗真菌活性的研究

用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和酶标仪法对一株蝉拟青霉P3菌丝体和发酵液甲醇提取物的清除自由基活性进行了定性和定量测定,发现两种提取物具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/mL,于37℃下保温10min时,两种样品对0.4mg/mL的DPPH自由基的清除率分别可达55.52%和74.86%。以一种黑曲霉菌为指示菌,采用薄层色谱法对蝉拟青霉菌丝体和发酵液甲醇提取物进行抑菌活性试验,实验中根据抑菌圈大小判定代谢物抑菌活性的大小。同时,以致病菌白色假丝酵母菌为指示菌,采用牛津杯法对提取物进行进一步抑菌活性验证,结果表明,菌丝体和发酵液提取物样品浓度为5.0mg/mL时,其抑菌圈直径分别可达11.23mm和21.42mm。

微波膨化菊芋脆片的研制

对不同预处理的菊芋片进行微波膨化,研究菊芋片厚度、预处理方式、水分含量、水分均衡时间、微波功率和时间、固化处理方式对微波膨化效果的影响。得出最佳工艺参数:菊芋片厚度6mm,90℃热风干燥3.5h,预处理后菊芋片初始水分含量降至20%,水分均衡4h,用低档(额定功率800W)进行微波膨化150s,在此条件下,产品的酥脆度、色泽和外型均良好,最大膨化率达到2.18。以不同质量浓度糊精、NaCl或CaCl2处理新鲜菊芋片。结果表明:NaCl是影响膨化的最重要因素,其次是糊精和CaCl2,实验的最优组合为NaCl1.5g/mL、糊精1g/mL、CaCl20.4g/mL,此条件处理后的菊芋脆片的酥脆性、膨胀率和色泽均得到了改善。

细脚拟青霉活性成分分析及清除自由基活性研究

以冬虫夏草生药为对照品,对细脚拟青霉RCEF0441的深层发酵菌丝体和发酵液冻干粉进行活性成分分析。结果表明:RCEF0441菌丝体和发酵液冻干粉中粗蛋白和氨基酸总量均明显高于冬虫夏草生药;菌丝体中多糖、麦角甾醇、甘露醇及腺苷等多种物质的含量亦高于冬虫夏草生药;RCEF0441深层发酵菌丝体和发酵液冻干粉中还含有丰富的对人体健康非常重要的Zn、Fe、Ca等元素。用二苯代苦味肼基自由基(DPPH)-TLC法和DPPH酶标仪法对RCEF0441菌丝体和发酵液冻干粉的甲醇-乙酸乙酯混合液提取物清除DPPH自由基活性进行分析,发现两种提取物均具有较强的清除自由基活性,在浓度为5.0mg/ml,于37℃下保温10min时,两种提取物对0.4mg/ml的DPPH自由基的清除率分别达到61.28%和81.12%。

激素对蝉拟青霉深层液体发酵生长代谢的调控作用

以生物量、腺苷产量、胞内多糖产量和虫草素产量为指标,考察不同添加量的细胞分裂素6-苄氨基嘌呤(6-BA)和保幼激素Ⅲ对蝉拟青霉深层液体发酵的调控作用。各实验组在整个发酵过程中的生长代谢节奏与对照组有一定的差异性,两种激素均具有提高蝉拟青霉生物量的作用,其中6-BA添加量为4mg/L时比对照组提前12h到达生物量最大值,并且其最大生物量较对照组最大生物量提高了28.96%。两种激素均可调节蝉拟青霉菌丝体中活性物质的代谢节奏,低剂量6-BA可显著提高胞内多糖产量(P<0.05);而保幼激素Ⅲ中、高两剂量组则在培养36h以后表现出了明显抑制多糖合成的作用(P<0.05)。虫草素和腺苷产量分析结果也表明激素可改变两种活性物质的代谢节奏。

蝉拟青霉代谢产物抑制单胺氧化酶和抗肿瘤活性研究

以单胺氧化酶(MAO)为靶标对蝉拟青霉RCEF0947菌株发酵液和菌丝体甲醇乙酸乙酯提取物体外抑制单胺氧化酶活性进行研究,结果发现,RCEF0947发酵液提取物对MAO-A具有较强的抑制活性,其对单胺氧化酶MAO-A的半数抑制浓度(IC50)为272.97μg/ml。而对于MAO-B的抑制活性而言,当样品反应浓度为400μg/ml时,发酵液和菌丝体提取物对MAO-B的IC50分别为538.37μg/ml和509.36μg/ml,经统计分析二者之间无显著性差异(p>0.05)。以中国仓鼠卵巢(CHO)细胞株作为模型,用Resazurin法检测生长抑制率,对RCEF0947菌株发酵液和菌丝体提取物进行体外抗肿瘤活性实验,结果发现,两种提取物均具有较强的体外抗肿瘤活性,两种提取物对CHO细胞株的IC50分别为122.35μg/ml和171.93μg/ml。

高温和强光对蛹虫草子实体成分和酪氨酸酶抑制活性的影响

以蛹虫草子实体为研究对象,研究高温和强光对蛹虫草培养后期子实体中多糖、核苷含量和酪氨酸酶抑制活性的影响。结果表明,在蛹虫草子实体培养后期,提高温度和增加光照强度,可显著提高蛹虫草子实体多糖、尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、腺苷和虫草素等核苷类物质的含量(P<0.05),尤其是多糖、腺苷和虫草素的含量较常规培养子实体分别提高0.77、1.76倍和3.58倍。另外发现经过高温和强光胁迫蛹虫草子实体抑制酪氨酸酶活性也有所增强,并且从子实体甲醇提取物中分离到酪氨酸酶抑制活性纯品物质,结果显示该物质对单酚酶活性的IC50为27.8386μg·m L^(-1),二酚酶活性的IC50为38.1432μg·m L^(-1)。

细脚拟青霉深层发酵菌丝体核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对细脚拟青霉RCEF0441深层发酵菌丝体中核苷类化学成分进行分析。结果表明,细脚拟青霉RCEF0441菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、胸苷和腺苷6种核苷,其中胞苷的含量为冬虫夏草生药的3倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7和9倍左右,尿苷和腺苷的含量也显著高于对照品冬虫夏草生药(p<0.05)。

古尼拟青霉小孢变种核苷类成分分析

以已知核苷为标样,并以冬虫夏草生药作对比,利用反相高效液相色谱法对古尼拟青霉小孢变种RCEF0864菌丝体和发酵液中核苷类化学成分进行分析,结果表明古尼拟青霉小孢变种RCEF0864菌丝体中主要含有胞苷、尿苷、鸟苷、肌苷、环磷腺苷和腺苷等6种,其中腺苷和尿苷的含量均为冬虫夏草生药的3倍左右,肌苷和鸟苷的含量则分别是冬虫夏草生药的7倍和10倍左右,尿苷的含量也高于对照品冬虫夏草生药。古尼拟青霉小孢变种RCEF0864发酵液中主要含有尿苷、胞苷、胸苷、肌苷、环磷腺苷和腺苷等6种核苷类物质,其中,腺苷和胞苷的含量均高于对照品冬虫夏草生药。

女贞内生真菌清除自由基活性成分的分离纯化

采用组织块分离法对女贞的内生真菌进行分离,对分离到的菌株进行清除1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl,DPPH)自由基活性研究,并对活性较强菌株代谢产物中的清除自由基成分进行分离纯化。从女贞的叶片、茎、根、枝条等组织共分离出101株内生真菌,研究发现NZ-18菌株清除自由基活性最强,并采用液相色谱法对NZ-18发酵液中清除自由基活性成分进行制备。分离到一种活性较强的化合物1,经高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)法和薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)法纯度验证,发现该化合物为纯品化合物经活性验证发现化合物1在样品质量浓度为0.5 mg/mL时对0.2 mg/mL的DPPH自由基清除率为94.88%。结果表明,女贞内生真菌中存在大量的清除自由基活性菌株。

蛹虫草多糖的提取及抗氧化活性研究

[目的]研究蛹虫草多糖的提取及抗氧化活性。[方法]在比较几种常见的蛹虫草多糖提取方法的基础上,以蛹虫草多糖的得率为指标,采用正交试验法优化了蛹虫草多糖的提取工艺,并对蛹虫草多糖抗氧化活性进行了分析。[结果]热水浸提法的多糖提取率优于超声浸提法,蛹虫草多糖的最优提取工艺:料液比1∶20(g/m L),浸提温度80℃,浸提时间1.5 h,在此条件下蛹虫草多糖的提取率达到9.31%。在抗氧化活性方面,蛹虫草随着多糖浓度的增加,DPPH自由基清除活性和铁离子螯合能力均增加,在多糖浓度为4 mg/m L时,DPPH自由基清除率为38.69%,之后活性趋于平稳;在多糖浓度为3.5 mg/m L时,其铁离子螯合率为56.66%,此后铁离子螯合能力亦保持平稳。[结论]该研究可为蛹虫草多糖的进一步分离纯化、活性研究及开发利用奠定基础。

食品微生物学实验课程中模块化教学的应用探索

食品微生物学作为微生物学的重要分支,在食品科学、食品质量与安全等相关专业中具有重要作用。食品微生物学实验可以有效培养学生的实践能力和创新精神,为了改革现有教学过程中存在的学生积极性不高、教学内容陈旧等问题,笔者依据多年的教学经验提出了模块化实验教学思路。本文结合食品微生物学实验课程的特点,对模块化教学体系进行了概述,并提出了模块化教学体系应用于教学的具体方案及应用效果,为实践课程教学改革提供参考。