海藻酸钠作为药物载体材料的改性研究

根据海藻酸钠作为药物载体材料的改性方法不同,分析了近几年国内外的研究成果,主要阐述了海藻酸钠的共混改性和化学改性及各自的载药性能,分析了改性材料在药物载体领域的应用上存在的优势与不足,并展望了海藻酸钠的改性方法及应用。

阿魏酸酯酶产生菌的筛选及产酶条件的优化

从土壤中筛选到1株阿魏酸酯酶活力较高的菌株,通过形态观察,初步鉴定其为曲霉.通过单因素轮换法,对其液态发酵的产酶条件进行优化.结果表明:在查氏培养基中,以质量体积比为6%的麦麸为碳源,质量体积比为5%的硝酸钠为氮源,在30℃下发酵培养6 d后,其酶活力最高可达16.33μkat·L-1.

新型ALG-g-Lys微胶珠的制备工艺优化

为了提高海藻酸钙胶珠的稳定性,采用海藻酸盐的改性材料ALG-g-Lys制备微胶珠,通过单因素考察结合正交设计优化了ALG-g-Lys微胶珠的制备工艺。优化后的制备工艺为:ALG-g-Lys浓度为15g/L,电压为8.0kV,推进速度为30mm/h,针头型号为24G,CaCl2浓度为15g/L。优化后制得的微胶珠粒径均匀,球形度好,拖尾率、半球率和小球率小,平均粒径为253±40μm。该工作提供了一种新型的载体材料替代海藻酸盐作为凝胶材料,未来可适用于医药、食品行业等领域。

Ⅱ型登革病毒NS1蛋白的表达及其免疫血清的制备

目的原核表达、纯化II型登革病毒NS1A蛋白(NS1蛋白1～180氨基酸即DENV2 NS1A),将其免疫动物制备免疫血清并鉴定。方法构建重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG低温诱导表达。表达的融合蛋白经Hitrap Talon crude柱亲和层析纯化后,免疫雌性日本长耳兔获得抗DENV2 NS1A兔抗血清,用Western blot和免疫荧光检测免疫血清对重组麻疹病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6Xhis的识别和结合特性。结果重组融合质粒p ET22b-p64K-L-DENV2 NS1A经双酶切和测序证明构建正确。表达的重组融合蛋白相对分子质量为100 000,纯化后蛋白纯度在85%以上,免疫获得的抗DENV2 NS1A兔抗血清可识别重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis表达的DENV2 NS1蛋白。结论原核表达并纯化了DENV2 NS1A蛋白,建立了基于NS1蛋白的重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的Western blot和免疫荧光检测方法,为登革热疫苗研制中重组病毒MV_(S191)-DENV2 NS1 6XHis的质检奠定了基础。

岭南文化粤剧在剧场设计中的运用

建筑设计体现的是一种艺术形式,其中渗透着一种文化内涵与审美特点,装饰设计是建筑设计的重点,越来越受到人们的重视。本文以广州粤剧院为例,浅谈岭南文化粤剧在剧场设计中的实际应用。

装修设计以建筑为本来达到整体的和谐统一——广州塔为例

随着现代化快速发展,我国人民生活质量水平得到显著提高,促使建筑业得到显著发展,其中装修设计是建筑设计重要的一环,所以装修设计是非常重要的,必须将装修设计以建筑为本来达到整体的和谐统一放在首位,因为装修设计才是第一要素,只有不断提高装修设计,才能促进建筑发展、降低成本、提高经济利益。将装修设计作为发展重点,同时将装修设计作为发展目标也能保证建筑事业的快速发展。本文主要是以广州塔为例浅谈文化娱乐的室内装修与建筑的融合。

麻疹疫苗株Schwarz反向遗传系统的建立

目的建立麻疹疫苗株Schwarz(MVSW)反向遗传系统。方法将MVSW全长cDNA分为F1~F7共7个片段,在F1片段的5′端插入T7启动子及锤头核酸酶序列(hammerhead ribozyme,HamRz),F7片段的3′端插入T7终止子及丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRz),分别将F1~F7片段克隆至pT7-MCS2载体上,7个重组质粒经酶切按顺序拼接MVSW全长cDNA,获得全长质粒pT7MVSW。同时构建表达MVSW核蛋白(N)、磷蛋白(P)、大蛋白(L)的3个辅助质粒。将全长质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒(pT7-T7RNAP及pCDIBP-T7RNAP)共同电转染Vero细胞,拯救获得病毒rMV_(SW)。收获的rMV_(SW)在Vero及CEC细胞中进行传代培养,观察细胞病变、检测病毒滴度并进行病毒测序,同时免疫小鼠检测抗r MVSW中和抗体。结果经酶切鉴定,全长质粒及辅助质粒均构建正确。拯救病毒rMV_(SW)在Vero及CEC细胞培养的病变典型特征类似;P2代病毒rMV_(SW)扩增片段与疫苗株MVSW理论序列一致;rMV_(SW)经Vero细胞连续培养P2~P10代病毒滴度稳定在5.5~6.5 lgCCID_(50)/mL之间;rMV_(SW)及疫苗株MVS191诱导的抗rMV_(SW)抗体滴度接近。结论成功建立了麻疹疫苗株MVSW的反向遗传系统,获得的具有良好遗传稳定性及免疫原性的拯救病毒rMV_(SW)有作为疫苗生产用毒种的潜力。

麻疹病毒沪191株反向遗传系统的建立

建立麻疹病毒沪191株(MV-_(S191))反向遗传系统。提取MV-_(S191)的RNA,RT-PCR分7段扩增出麻疹病毒反基因组cDNA,通过酶切、连接,拼接出MV-_(S191)全长反基因组,并分别在其3′端和5′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(HdvRZ)和锤头核酸酶序列(HamRZ),克隆到pT7-MCS载体,获得pT7MV_(S191)。在MV-_(S191)的P-M基因间区域插入绿色荧光蛋白(GFP),获得pT7MV_(S191)-ATU-GFP,同时构建表达麻疹病毒核蛋白(N)、磷蛋白(P)和大蛋白(L)的3个辅助质粒。将pT7MV_(S191)、pT7MV_(S191)-ATU-GFP分别与辅助质粒通过脂质体介导共转染BSRT7细胞,热休克3h。转染3d后,取上清,感染Vero-SLAM细胞。经RT-PCR、显微镜检测绿色荧光蛋白表达及合胞体形成,在该系统中成功拯救到两种有感染活性的病毒。成功建立了MV-_(S191)的反向遗传系统,为以麻疹病毒为载体进行新疫苗的研发奠定了基础。

表达2型登革病毒NS1重组麻疹病毒的拯救及鉴定

以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×His,最后构建获得插入了外源基因DENV2 NS1 6×His的载体pT7MVS191-DENV2NS1 6×His。质粒pT7MVS191-DENV2NS1 6×His与表达麻疹病毒N、P、L蛋白的辅助质粒共转染BSRT7细胞完成病毒包装后,在Vero细胞内增殖,完成重组病毒的拯救。重组病毒在Vero细胞上传至第4代,基因测序证明重组病毒中成功插入了外源基因DENV2NS1 6×His;Western Blot、原位免疫荧光反应可检测到重组病毒中麻疹病毒N蛋白及外源抗原DENV2NS1 6×His的表达;重组病毒增值特性与疫苗株MVS191相似;P1至P4代的重组病毒滴度稳定在6log10CCID50/mL～6.5log10CCID50/mL之间;P4代重组病毒免疫家兔,兔抗血清中麻疹病毒中和抗体效价大于1∶160;Western Blot可检测到免疫兔血清中DENV2NS1的抗体。本文成功构建了以麻疹病毒为载体,表达外源抗原DENV2NS1的重组病毒,为以麻疹病毒为载体的登革疫苗研发奠定基础。

浅谈企业总部办公楼大堂室内设计——记中烟改造项目有感

在政府提出的"三旧改造、退二进三"的改造政策指导下,优化整合土地资源,合理运用现有资源,追求资源的极限利用是企业实现产业升级、不断走向壮大的重要一步。办公楼主入口大堂室内设计应提倡绿色环保和可持续发展,坚持吸收企业文化以及本地、本民族和民俗的母体文化特色,通过大堂空间设计充分诠释企业产品精神、文化底蕴和发展理念,从而树立企业良好形象、提升企业创新品牌。

腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立

目的建立腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1(JL1)反向遗传系统,获得单一成分的拯救病毒JL1R。方法将JL1全长cDNA基因序列分为7个片段(F1~F7),在F7片段的3′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRZ),分段合成后分别插入载体pT7-MCS3中,根据每段重叠区域的酶切位点拼接,构建全长表达质粒pT7-MCS3-MUVJL1(HdvRz);同时构建表达腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒;将全长表达质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒pCDIBP-T7RNAP共同电转染Vero细胞。对获得的病毒JL1R进行测序、病毒滴度及中和抗体测定。结果拯救病毒JL1R基因组SH及HN片段与疫苗株JL1对应片段的理论序列一致;JL1R经Vero细胞连续传代培养2~10代病毒滴度均在6 lgCCID50/mL以上;JL1R与疫苗株S79诱发抗MuV抗体滴度接近。结论成功构建了MuV疫苗株JL1的反向遗传操作系统,获得的单一成分拯救病毒JL1R可作为腮腺炎疫苗株的备选株,解决了S79疫苗生产中毒种及疫苗株的成分、纯度和批间一致性等问题,进一步提高了国内腮腺炎疫苗的免疫效果。