人类一条新的类蛋白质二硫键异构酶cDNA的克隆和表达

利用 SMART技术构建了人胎脑 c DNA文库 ,通过大规模测序筛选出一条 16 45 bp的人类 c DNA。此c DNA含有一个 888bp的开放阅读框 (ORF) ,编码一个 2 96个氨基酸的蛋白质 ,预测分子量 34 .0 KD。与目前数据库中序列比较 ,该 c DNA编码的蛋白质与蛋白质二硫键异构酶的同源性达 36 % ,命名为类蛋白质二硫键异构酶(PDI- L)基因。多组织 Northern blot分析显示 PDI- L c DNA在心、脑、肝、肾等组织中均有表达。该 c DNA的读框片段正确插入到改造后的 p BV2 2 0表达载体中 。

人Rab蛋白cDNA的克隆和表达

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的RabcDNA ,全长 92 0bp ,拟编码 2 13个氨基酸残基 ,该蛋白预测的分子质量为 2 45 6 7u ,等电点 7.34,经同源比较 ,该cDNA与GenBank数据库中登录号为X1496 4的Rab蛋白有 83 %的相似性和 76 %的相同性 .将该cDNA克隆到经改造的PBV2 2 0表达质粒 ,转化DH5α菌株诱导表达出该蛋白 .取 2 4种不同组织的总cDNA各 10 0ng ,用该基因序列设计引物作PCR ,结果在胎肝组织中检测到有明显条带 ,表明该Rab基因相对在胎肝有高表达 .

人酪蛋白激酶CK1γ1 cDNA的克隆、染色体定位和组织表达谱分析

从人胎脑cDNA文库中克隆到一种新的酪蛋白激酶的cDNA ,全长 175 4bp ,拟编码 438个氨基酸残基 ,该蛋白预测的分子质量为 5 0 2 72u ,等电点 9.37.经同源分析 ,该基因与大鼠的CK1γ1蛋白有 94%的相似性 ,为人 1型酪蛋白激酶 γ1亚型 (CK1γ1)基因 .人CK1γ1基因同时与 15号和 17号染色体的基因组部分序列完全一致 ,但RH法却将基因定位于 15 q2 2区段的D15S15 9 D15S12 5Marker之间 .多组织Northern膜 (MTN)杂交分析显示 ,人CK1γ1基因在肝、结肠、肾和骨胳肌特别在肝组织中有高表达 .

用基因芯片的方法对人酪蛋白激酶CK1γ1基因进行表达谱和聚类分析

将人酪蛋白激酶基因CK1γ1的cDNA与 40 96个胎脑cDNA一起点在玻璃介质的基因芯片上 ,用 16种不同组织或细胞系的mRNA分别杂交该基因芯片 ,以正常人混合组织mRNA作共同对照 ,检测CK1γ1基因的表达谱变化 ,结果显示人CK1γ1基因在 15种组织表达没有变化 ,但在肝癌组织中的表达却显著下调 .采集的 7例肝癌标本的cDNA与正常肝组织的cDNA重复 7次芯片杂交 ,结果肯定了CK1γ1基因在肝癌组织中表达下调 .同时 ,对芯片杂交结果通过聚类分析 ,按基因表达谱特征将CK1γ1基因与其他 7种基因聚类在一起 ,提示CK1γ1基因可能在生物学作用方面与这 7种基因有某种相关性 .

类硫氧还蛋白hTRXLⅠcDNA的克隆和原核表达

从人 18周胎脑中抽提mRNA ,建立cDNA文库 ,通过大规模测序克隆出一条人类基因 ,该基因全长16 44bp ,开放阅读框 1146bp ,编码一个含 372个氨基酸的蛋白 ,预测分子质量约为 46 8ku .经与蛋白数据库比较 ,发现具有人硫氧还蛋白结构 ,命名为人的类硫氧还蛋白基因Ⅰ (humanThioredoxinlikegeneⅠ ,hTRXLⅠ ) .多组织膜Northernblot结果显示在心脏、脑、胎盘、肝、骨骼肌、肾、胰腺等各个组织中均有表达 ,肺中表达不明显 .通过Unigene染色体定位 ,将hTRXLⅠ定位于 11q11,把hTRXLⅠ的读框克隆入经改造的PBV2 2 0质粒中 ,在E .coli中诱导后获得表达 .

Fe65L2基因存在4种剪接形式

Ｆｅ６５Ｌ２是一种与老年痴呆症相关蛋白——淀粉样肽前体蛋白（ＡＰＰ）相互作用的蛋白．报道了Ｆｅ６５Ｌ２基因的２种新的剪接形式，并证实了该基因存在４种剪接形式．这４种剪接形式是由同一个内含子中分别为６ｎｔ和 ２１ ｎｔ的 ２段外显子序列按不同组合拼接而成的，