中性粒细胞胞外诱捕网放大脂多糖诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应

目的观察中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对脂多糖(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用。方法采用小鼠外周血中性粒细胞分离试剂盒分离提取C57BL/6小鼠外周血中性粒细胞。采用佛波酯(PMA)(100nmol/L)诱导中性粒细胞形成NETs,采用荧光显微镜及扫描电子显微镜观察NETs。体外培养大鼠肺泡巨噬细胞NR8383,分为⑴对照组:加入等体积PBS;⑵NETs组:加入制备好的(1.7×10~6个/ml)NETs;⑶LPS组:加入1mg/L LPS;⑷LPS+NETs组:LPS联合NETs共刺激,各组均刺激12h。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量。结果荧光显微镜下观察示对照组中性粒细胞核形态完整,无DNA与NETs的胞外共定位网状结构,PMA刺激组可见DNA网状结构,且与NETs共定位;扫描电子显微镜下也观察到中性粒细胞染色质呈网状结构释放至胞外,提示PMA诱导NETs形成成功。采用LPS、NETs分别刺激肺泡巨噬细胞12h,细胞上清液中的IL-1β、TNF-α含量均较对照组显著升高,LPS+NETs组上清液中的IL-1β含量较LPS组显著升高(P<0.05),上清液中的TNF-α较LPS组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NETs增加LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症因子释放,提示NETs可以放大LPS诱导的肺泡巨噬细胞炎症反应。

工艺品模型的特征添加与重构

将逆向工程引入到工艺品的设计制造中,可有效地提高工艺品的设计效率,降低设计周期,还可以方便地对数字模型进行特性添加,使得作品更符合顾客"胃口"。本文以人猿泰山为例,基于逆向工程方法获取工艺品原件的数字化模型,通过点云预处理、构建多边形、网格划分、曲面重构等方法还原一个更自由、造型语言更生动的数字模型。在三维软件Geomagic/Unigraphics NX进行曲面重构和创新,通过特征添加,将原型进行再设计,从而提高工艺品的设计质量。本文将为青瓷、石雕等工艺品的快速建模提供了一种新的方法和途径。

农业特产税政策 怎样更具可操作性

农业特产税的征收管理工作，政策性强，涉及面广，工作量大。为了做好各地方农业特产税的征管工作，使得征管工作中有法可依，从1994年起中央和广东省先后制定了一系列的法律法规，对纳税义务，征收范围，税率、计征办法、纳税环节、减免税范围及审批程序等作了明确的规定，但操作起来往往比较困难。

不同手术入路治疗胫骨平台骨折80例临床分析

目的探讨不同手术入路治疗胫骨平台骨折的临床效果。方法 80例胫骨平台骨折患者根据入路方式的不同分为治疗组与对照组各40例,两组都采用锁定钢板内固定治疗,对照组手术入路为"S"形传统切口,治疗组手术切口位于膝关节后外侧。结果治疗组患肢膝关节HSS评分值明显高于对照组(P<0.05),表明其膝关节功能恢复更好。两组手术时间、手术出血量和住院时间对比,差异无统计学意义(P>0.05),治疗组的并发症发生率明显少于对照组(P<0.05)。结论经膝关节后外侧入路锁定钢板内固定治疗胫骨平台骨折大都可以实现充分、直接的显露,方便在直视下复位、固定,创伤少,恢复快,值得临床推广应用。

不同术式对晚期胃癌患者的治疗效果分析

目的探讨不同术式对于晚期癌症患者的治疗效果。方法以我院2009年1月- 2012年7月间收治的83例晚期胃癌且可追溯患者为研究对象,采用回顾性研究的方法,按其手术方式，将姑息手术切除治疗者归为姑息切除组，将改道及探查手术治疗者归为非切除组，比较两组患者术后卫生经济学指标及生活质量的差异。结果研究结果显示，在卫生经济学指标的比较中，姑息切除组患者年化人院次数和年疾病花费低于对照组，在术后生活质量的比较中，姑息性切除组患者在心理健康、营养情况和活动能力方面得分髙于非切除组，在癌性疼痛方面得分低于非切除组，其差异皆有统计学意义（P 〈 0.05 ）。多因素分析结果显示,姑息性切除手术可提高晚期癌症患者生活质量。结论姑息性手术可以有效降低患者术后就诊频率，减轻经济负担，并提高患者的生活质量,应在条件允许的情况下，尽量选择姑息性手术治疗。

温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法对神经根型颈椎病的疗效分析

目的:探析神经根型颈椎病患者采用温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法治疗的效果。方法:样本选取年限为2019年10月-2021年10月,样本为120例神经根型颈椎病患者,以数字表法分为对照组(60例)与观察组(60例),对照组采用提拉推按复位法治疗,观察组采用温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法治疗,比较两组临床疗效、治疗前后颈椎功能情况[颈部功能障碍指数(Neck Disability Index,NDI)]、疼痛程度[视觉模拟评分法(Visual Analogue Scale,VAS)]、血清疼痛因子水平[前列腺素E2(Prostaglandin E2,PGE2)、P物质(Substance P,SP)、基质金属蛋白酶3(Matrix Metalloproteinases 3,MMP3)],以及生活质量水平[日常生活能力评定量表(Activity of Daily Living Scale,ADL)]。结果:与对照组比较,观察组治疗总有效率明显更高(P<0.05);治疗前,两组患者NDI评分、VAS评分、ADL评分差异不大(P>0.05),治疗2周后,与对照组患者比较,观察组患者NDI评分、VAS评分更低,ADL评分更高(P<0.05);治疗前,两组患者PGE2、SP、MMP3等指标水平差异不大(P>0.05),治疗2周后,与对照组患者比较,观察组患者PGE2、SP、MMP3等指标水平更低(P<0.05)。结论:对神经根颈椎病患者采用温经通脉壮骨汤联合提拉推按复位法治疗可获得较好的效果,能够有效改善患者的颈椎功能,缓解疼痛感,提高生活质量,具有较高的临床推广价值。

股神经阻滞在股骨骨折患者中的临床应用分析

目的:观察股神经阻滞在股骨骨折患者中的应用效果。方法:将80例股骨骨折切开复位内固定术患者随机平分为两组,治疗组采用腰丛股神经阻滞方法,对照组采用坐骨股神经阻滞方法,两组阻滞穿刺药为罗哌卡因。结果:两组切皮10min后,MAP和HR明显升高(P<0.05);同时对照组较治疗组升高显著(P<0.05)。治疗组的疼痛消失时间明显少于对照组(P<0.05),且Bromage评分也少于对照组(P<0.05)。结论:神经阻滞镇痛属于外周阻滞镇痛中的一种,其中股神经阻滞在股骨骨折手术治疗中镇痛完全,麻醉起效快,值得推广应用。

62000 m^(3)/h常压循环流化床气化炉优化调整试验

以某62000 m^(3)/h循环流化床气化炉为例,在气化炉运行稳定且不结焦的基础上,研究了原煤粒度分布、炉膛中下部温度、空气煤比、蒸汽煤比及氧气流量对煤气组分、煤气热值和炉渣含碳量的影响,并进行了综合调整。结果表明:调整各影响参数均可以在一定程度上提高煤气热值和有效组分含量,并且可以明显降低炉渣含碳量;同时调整各影响参数,在75%和100%额定负荷下,煤气热值能够提高到6504~6603 kJ/m^(3),炉渣含碳质量分数可降低至13.45%~16.27%。调整效果良好,可为同类型气化炉经济性运行调整提供参考。

髌骨适形加压接骨板配合加压骨栓治疗老年髌骨非粉碎性骨折的效果分析

目的 探讨髌骨适形加压接骨板配合加压骨栓治疗老年髌骨非粉碎性骨折的临床效果。方法 选取2012年2月~2013年8月东莞市虎门中医院和东莞市第五人民医院收治的68例老年髌骨非粉碎性骨折患者随机分为观察组和对照组,对照组采用克氏针张力带钢丝固定术治疗,观察组采用髌骨适形加接骨板配合加压骨栓治疗,比较两组患者手术时间、术中出血量及临床骨折愈合时间,对两组患者随访8个月统计两组患者并发症发生情况及膝关节功能恢复情况。结果 观察组手术时间和术中出血量均少于对照组,但两组比较无统计学意义（P〉0.05）;观察组临床骨折愈合时间明显短于对照组,两组比较有统计学意义（P〈0.05）;观察组术后8个月膝关节功能优良率为100.00%明显高于对照组88.24%的优良率,两组比较有统计学意义（P〈0.05）;观察组并发症发生率为2.94%明显少于对照组14.71%的发生率,两组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 髌骨适形加压接骨板配合加压骨板治疗老年非粉碎性骨折具有显著固定效果,可促进骨折愈合、减少并发症发生,提高膝关节功能恢复,具有显著临床治疗效果,值得在临床中推广应用。

线粒体自噬对肺泡巨噬细胞焦亡的调控作用及其机制

目的初步探讨线粒体自噬对肺泡巨噬细胞(AM)焦亡的调控作用及其机制。方法选取大鼠肺泡巨噬细胞NR8383作为研究对象,使用1μg/ml的脂多糖(LPS)刺激18 h构建脓毒症肺损伤体外模型,使用低浓度溴化乙锭(EtBr)处理大鼠AM构建胞质无线粒体DNA(mtDNA)的ρ0细胞,使用羟基氰氯苯腙(CCCP)增强线粒体自噬,通过转染上调胞质mtDNA水平。设立CON组、LPS组、LPS+ρ0组、LPS+CCCP组、LPS+CCCP+mtDNA组;采用qRT-PCR检测mtDNA拷贝数、胞质mtDNA水平;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞培养上清液中白介素(IL)-18、IL-1β等炎症因子的分泌水平;采用Western Blot检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶1前体(pro-caspase-1)、胱天蛋白酶1剪切体(P20)、消皮素D(GSDMD)和消皮素D剪切体(cle-GSDMD)等焦亡相关蛋白的表达水平;采用免疫荧光观察细胞内caspase活性及细胞膜通透性;采用透射电镜观察细胞内线粒体自噬水平;采用Western Blot检测微管相关蛋白轻链B(LC3B)Ⅱ型、LC3BⅠ型等自噬相关蛋白表达水平。结果LPS刺激可诱导mtDNA释放至胞质,并促进炎症因子水平、焦亡相关蛋白表达水平、细胞内caspase活性及细胞膜通透性显著升高。通过CCCP增强线粒体自噬可抑制LPS诱导的IL-18(P<0.01)、IL-1β(P<0.01)等炎症因子及NLRP3(P<0.001)、P20(P<0.05)、cle-GSDMD(P<0.01)等焦亡相关蛋白表达水平的上调,并抑制caspase活化及细胞膜透化。而转染外源性mtDNA可逆转CCCP的作用,诱导IL-18(P<0.05)、IL-1β(P<0.01)等炎症因子及NLRP3(P<0.001)、P20(P<0.05)、cle-GSDMD(P<0.05)等焦亡相关蛋白表达水平升高,并活化caspase,增加细胞膜通透性。结论增强线粒体自噬可通过降低胞质mtDNA水平抑制LPS诱导的大鼠AM焦亡,减轻炎症反应。

线粒体DNA介导细胞焦亡放大肺泡巨噬细胞炎症反应

目的观察线粒体DNA（mtDNA）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用，并初步探讨其可能机制。方法提取SD大鼠肝脏组织mtDNA，采用超微量分光光度计及1％琼脂糖凝胶电泳检测其浓度及质量。分离和培养SD大鼠肺泡巨噬细胞，取处于对数生长期的细胞，并将其分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS组、mtDNA组和LPS＋mtDNA组4组，前3组分别在肺泡巨噬细胞培养基中加入等体积的PBS、LPS1mg／L或mtDNA10mg／L刺激6h和12h；LPS＋mtDNA组在肺泡巨噬细胞培养基中加入1mg／LPS刺激6h后再加入10mg／LmtDNA共同刺激6h。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞焦亡关键蛋白Gasdermin D（GSDMD）的表达。结果①所提取的大鼠肝脏组织mtDNA在波长260nm和280nm处的吸光度比值（A260/280）介于1．8-2．0，琼脂糖凝胶电泳可见大小约16kb的单一条带。②LPS、mtDNA分别刺激肺泡巨噬细胞6h和12h后IL-1β、TNF-α含量均较PBS组明显升高。LPS刺激6h后再加入mtDNA共同刺激6h组IL-1β含量较LPS12h组进一步升高（ng／L：366．27±23．35比154．70±23．32，P〈0．01），而TNF-α含量与LPS12h组相比差异无统计学意义（ng/L：836．13±25．01比802．67±30．48，P〉0．05）。⑧LPS组、mtDNA组、LPS＋mtDNA组GSDMD蛋白表达均较PBS组明显升高（GSDMD／β-actin：1．77±0．05、1．65±0．04、2A0±0．05比1．00±0．02，均P〈0．01），且LPS＋mtDNA组GSDMD蛋白表达较LPS组进一步升高（P〈0．01）。结论mtDNA对LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应具有放大作用，其机制可能与mtDNA增加细胞焦亡有关。

脂多糖刺激肺泡上皮细胞分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞的致炎效应

目的探讨脂多糖（LPS）刺激肺泡上皮细胞（RLE-6TN）分泌的外泌体对肺泡巨噬细胞（NR8383）的致炎效应。方法运用Transwell共培养体系，将经过不同处理的RLE-6TN细胞（正常组、LPS刺激组、外泌体抑制剂组、外泌体抑制剂预处理＋LPS刺激组）分别与NR8383细胞共培养，NR8383细胞单培养作为空白对照组，共培养12h后利用荧光定量PCR（qPCR）法检测各组NR8383细胞中IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA相对表达量。为进一步探讨肺泡上皮细胞分泌的外泌体对NR8383炎症反应的影响，采用差速超速离心法分别提取实验组外泌体（LPS刺激RLE-6TN细胞分泌的外泌体）和对照组外泌体（正常RLE-6TN细胞分泌的外泌体），运用透射电镜、蛋白免疫印迹鉴定外泌体，用qNano粒子直径分析仪检测外泌体粒子直径。将NR8383细胞分为实验组，对照组，PBS组，分别加入外泌体悬液（10μg／mL，实验组和对照组）和等体积的PBS，培养12h后，用激光共聚焦显微镜观察NR8383细胞对外泌体的吞噬，用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞上清液中炎症因子的IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平。结果①Transwell共培养实验中，与空白对照组相比，LPS组的炎症因子mRNA相对表达量显著升高（P〈0．01），而与LPS组相比，外泌体抑制剂预处理＋LPS组的炎症因子mRNA相对表达量却明显降低（P〈0．01）；②提取的外泌体经过透射电镜观察为圆形或椭圆形囊泡，直径为40-100nm，表达外泌体标志物CD63和CD9；③两组外泌体与NR8383细胞共培养5h后，激光共聚焦显微镜下见胞内散在分布被吞噬的红色荧光外泌体。实验组、对照组外泌体分别作用于NR8383细胞后，与PBS组相比，实验组外泌体引起NR8383细胞炎症因子表达的显著升高（P〈0．01），对照组外泌体则差异无统计学意义（P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡上皮细胞分泌的外泌体能够激活肺泡巨噬细胞产生致炎作用。

人诱导多能间充质干细胞来源外泌体对肺泡巨噬细胞焦亡的抑制作用

目的探讨人诱导多能间充质干细胞来源外泌体(iMSC-Exos)对肺泡巨噬细胞(AM)焦亡的作用及机制。方法通过旋转超滤法提取人诱导多能间充质干细胞(iMSC)培养上清液中的外泌体,并利用透射电镜、蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)、高分辨率可调电阻脉冲对提取的外泌体进行鉴定。体外培养大鼠AM细胞株NR8383,取对数生长期细胞分为3组:对照组在AM上清液中加入等量磷酸盐缓冲液(PBS);脂多糖/三磷酸腺苷(LPS/ATP)组AM经500μg/L的LPS刺激23 h后再加入5 mmol/L的ATP刺激1 h诱导细胞焦亡;iMSC-Exos组将100 mg/L iMSC-Exos与NR8383细胞共孵育3 h后再给予LPS和ATP刺激。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)和乳酸脱氢酶(LDH)分析检测细胞毒活性;采用免疫荧光法观察细胞凋亡和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)表达;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测AM释放炎性因子白细胞介素(IL-1β、IL-18)水平;采用Western blotting法检测NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径及焦亡相关蛋白消皮素D(GSDMD)表达。结果提取的外泌体经透射电镜观察为圆形囊泡,Western blotting显示外泌体标志物CD63、CD9呈阳性表达,高分辨率可调电阻脉冲检测显示粒子平均直径130 nm,提示外泌体提取成功,能被AM吞噬。与对照组相比,LPS和ATP刺激后,细胞活性下降〔(0.56±0.05)%比(1.06±0.07)%,P<0.01〕,坏死物质LDH释放增加(U/L:1218.86±22.73比188.30±1.61,P<0.01),炎性因子分泌增加〔IL-1β(ng/L):958.91±32.78比194.63±5.14,IL-18(ng/L):870.89±21.86比288.85±24.48,均P<0.01〕,细胞凋亡率〔(55.35±6.19)%比(12.01±1.32)%,P<0.01〕及caspase-1表达均升高(荧光强度:41.06±3.65比2.80±0.54,P<0.01),提示LPS联合ATP可成功诱导细胞焦亡。与LPS/ATP组相比,给予iMSC-Exos预处理后,AM活性增加〔(0.81±0.05)%比(0.56±0.05)%,P<0.01〕,LDH释放减少(U/L:535.05±42.55比1218.86±22.73,P<0.01),炎性因子分泌减少〔IL-1β(ng/L):381.82±19.50比958.91±32.78,IL-18(ng/L):533.77±31.54比870.89±21.86,均P<0.01〕,细胞凋亡率〔(19.74±2.96)%比(55.35±6.19)%,P<0.01〕和caspase-1表达均下降(荧光强度:12.16±1.31比41.06±3.65,P<0.01),同时NLRP3炎症小体途径及焦亡相关蛋白GSDMD表达水平受到显著抑制〔NLRP3蛋白(NLRP3/β-actin):0.62±0.06比1.89±0.11,活化的caspase-1蛋白(cleaved caspase-1/β-actin):0.42±0.07比1.22±0.17,GSDMD蛋白(GSDMD/β-actin):0.57±0.05比1.22±0.05,均P<0.01〕。结论iMSC-Exos抑制了LPS/ATP诱导的AM焦亡和炎性因子表达,可能与靶向抑制NLRP3炎症小体途径有关,提示iMSC-Exos能抑制AM焦亡,发挥抗炎效应。