小鼠激活素受体相互作用蛋白2的原核表达及抗血清制备

[目的]克隆小鼠激活素受体相互作用蛋白2(ARIP2)cDNA序列,利用大肠杆菌表达ARIP2,制备兔抗小鼠ARIP2的多克隆抗血清。[方法]采用RT-PCR方法,将小鼠ARIP2基因克隆到pET-32a(+)质粒,构建ARIP2原核表达载体并转化到大肠杆菌,IPTG诱导融合蛋白的表达,经亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白,免疫家兔后制备ARIP2抗血清,分别采用ELISA,Western blot检测抗体效价和特异性。[结果]测序结果表明重组质粒pET32a(+)-ARIP2构建成功;SDS-PAGE分析表明获得的重组蛋白为可溶蛋白;经过亲和层析后得到有效分离;Elisa法测定的抗血清效价为1∶50000;Western blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合。[结论]成功将ARIP2进行了原核表达并制备了高效价、高特异性的兔抗小鼠ARIP2抗血清,为进一步研究ARIP2功能提供了有力工具。

质谱智能选择反应监测用于蛋白质绝对定量中母子离子对确证的方法研究

质谱选择反应监测(SRM)技术在蛋白质绝对定量分析中的应用越来越广泛,其成功应用的关键是肽段母子离子对的正确选择与确证。触发采集二级图谱是目前常用的母子离子对确认方法,但分析效率有待于提高。质谱智能选择反应监测(iSRM)是新近发展的高通量分析方法。为了考察该方法用于通量化母子离子对确证时的效果,选用牛血清白蛋白(BSA)和酵母蛋白提取物作为样品进行分析。结果表明,该方法具有更高的分析灵敏度,可以对低至1 fmol BSA样品中的母子离子对进行确证,而且相对于触发采集二级图谱方法而言,具有更高的分析通量,为规模化母子离子对选择与确证提供了一种新的策略。

SARS-CoV灭活疫苗制备及小鼠免疫研究

用Vero细胞大量增殖 SARS-CoV病毒,使用β-丙内酯作为灭活剂灭活病毒后,用 Sepharose 4 FF层析柱纯化病毒颗粒得到灭活疫苗,并经Western-blot,质谱,ELISA和电子显微镜检测证实.用纯化的灭活疫苗加入或不加入氢氧化铝佐剂,以不同的剂量免疫小鼠,能够诱导小鼠产生抗体,加入氢氧化铝佐剂组所产生的抗体高于不加入佐剂组.