强风环境下超高层建筑防灾减灾技术关键分析与应对策略

超高层建筑因其高度和结构特性,对强风的响应尤为敏感。研究分析了风力对超高层建筑动力响应的影响,包括振动特性和结构安全。探讨了强风下建筑面临的主要问题和风险,并提出了防灾减灾技术,如结构控制和建筑外围防护。案例研究表明,通过合理设计与技术应用,能显著提升建筑物的抗风性能。

用单链和PCR相结合的方法合成绿豆胰蛋白酶抑制剂基因

本文报道用单链与PCR技术相结合的合成方法合成了胰蛋白酶抑制剂基因,包括氨基酸编码顺序、起始和终止密码子,上、下游两端的EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ限性酶识别顺序等全长共248个碱基对。合成基因的编码是参考其它植物的蛋白酶抑制剂基因的同源编码和植物基因的偏爱密码子来进行设计的。合成的基因双链经限制酶EcoR Ⅰ和Pst Ⅰ在两端切出粘性末端后克隆到pUC19中,克隆基因结构的正确性经过限制酶图谱和DNA序列分析得到完全的证明。

乙肝病毒反义DNA的合成

为了深入研究反义ＤＮＡ对乙肝病毒的抑制作用，设计合成了针对乙肝病毒基因不同功能区域的反义片段２０个，无关序列４个，长度为１５聚到１８聚，分为无修饰反义ＤＮＡ、反义ＤＮＡ－多聚赖氨酸共价连接物、部分硫代和全硫代反义ＤＮＡ四种。合成反应是在ＡＢＩ３８１型ＤＮＡ合成仪上以１μｍｏｌ或１０μｍｏｌ的规模进行的，但在计算机程序上作了一些修改以适应于部分硫代和全硫代ＤＮＡ合成。抑制实验的结果说明，所有合成的反义ＤＮＡ均对乙肝病毒有不同程度的抑制作用，互补于乙肝病毒ＰｒｅＳ＿２翻译起始区的反义１５聚－多聚赖氨酸表现出很强的抑制活性。针对核心蛋白翻译起始区的反义ＤＮＡ和针对聚合酶翻译起始区下游的反义ＤＮＡ也均表现出好的抑制活性。

聚合酶链反应用于高效基因定位改造

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)是近几年发展起来的一种DNA体外扩增技术,其原理和它的一些应用(诸如在临床医学、考古学和法医学等方面)已有综述[1,2,

基因工程技术的现状与发展

基因工程技术乃是近十多年来发展起来的一门新的生物学技术。它的出现对于推动分子生物学、细胞生物学、遗传学、生物化学以及其它生物学科诸多领域的发展都起了重要的作用。基因工程技术亦即重组DNA技术包括了多种技术。这些技术可以划分为以下三个方面,即:①基因的制备与扩增;②基因的转移、检测和DNA序列分析;③基因的表达与表达载体的构建。下面将简单谈谈有关这些方面的现状与发展。

DNA体外扩增技术的突破——聚合酶链反应(PCR)的发展与应用

过去,人们为了从生物材料中获得某一段特定的DNA(基因)顺序或者进行其顺序分析或鉴定,需要经过非常繁琐的步骤并耗费大量的时间,而且往往还会由于所从事样品的复杂性、不均一性或含量太少而无法达到目的。最近由美国Cetus公司人类遗传部的一个小组研究和发展起来的聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)

利用恒溶氧-补料分批技术高密度培养大肠杆菌生产重组人骨形成蛋白-2A

对表达人骨形成蛋白２Ａ（ＢＭＰ２Ａ）的重组大肠杆菌ＹＫ５３７／ｐＤＨＢ２ｍ在５００ｍｌ摇瓶中进行了培养条件的摸索实验，继后用５Ｌ自控发酵罐进行分批培养和分批补料培养，以获取ｒｈＢＭＰ２Ａ。两种培养方式结果比较表明，在培养过程中保持３０％～４０％左右的溶解氧和限制性流加葡萄糖可以使ＢＭＰ２Ａ的含量达到２７８ｇ／Ｌ，最终菌体密度为ＯＤ６００５３（相当于干菌２１２ｇ／Ｌ），重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的２５％。该培养技术的关键是：（１）在培养过程中保持适当的溶解氧；（２）限制性流加葡萄糖；（３）４２℃起始诱导的时间控制在对数生长中期，持续表达时间为４ｈ；（４）细菌持续生长的比生长速率控制在０３ｈ１左右。

组织因子膜外区融合蛋白基因的表达及产物的分离纯化与活性分析

为构建表达组织因子 (TF)膜外区的融合载体 ,制备组织因子膜外区 ,抽提人胎盘组织的总RNA,通过 RT- PCR法扩增出 TF的 c DNA克隆至 p UC1 8并测定全序列 .然后以此为模板 ,再次PCR扩增出 TF膜外区 (soluble TF,s TF) c DNA,并将其插入到谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体 p GEX4T- 1 ,构建了 tac启动子控制下的 GST- s TF融合蛋白的表达载体 .表达的融合蛋白经亲和层析、凝血酶切得到纯化的 s TF.表达产物经 ELISA验证 ,能特异性地与 TF抗体结合 .重新脂化后 ,该产物具有较大凝血活性 .以上说明采用融合蛋白表达系统可以大量制备组织因子膜外区 ,为研制国产重组凝血活酶试剂和研究 s TF的结构和功能创造条件 .

乙型肝炎病毒前S区不同片段在酵母双杂交系统中的表达及对报告基因激活作用的检测

目的 用含乙型肝炎病毒 (HBV)前 S区不同大小的c DNA片段构建酵母双杂交诱饵载体 ,并检测其表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用 .方法 PCR扩增含 HBV前 S区不同大小的 c DNA片段 ,分别克隆入 p U C19质粒 ,经测序正确后 ,再分别亚克隆入酵母双杂交诱饵载体 p GBKT7中 .将重组质粒导入酵母菌 AH10 9,检测其表达产物在酵母细胞中对报告基因有无激活作用 .结果 成功获得含 HBV前 S区不同大小的 c DNA片段 ,HBV前 S区不同片段所表达的蛋白对酵母菌 AH10 9无毒性 ,但是对报告基因均有激活作用 .结论 不能利用酵母双杂交 Gal4系统 3来研究与 HBV前 S区相互作用的蛋白 ;证实了 HBV前S区不同片段所表达的蛋白的自激活功能 。

高密度培养大肠杆菌YK537/pSBHL-11生产重组人细胞白介素

在 Ｂ． Ｂｒａｕｎ Ｅ Ｓ１０ 型１５ Ｌ 和 Ｎ Ｂ Ｓ Ｂｉｏ Ｆｌｏ ３０００ 型５ Ｌ 发酵罐中，利用补料分批培养技术高密度表达培养含重组质粒ｐ Ｓ Ｂ Ｈ Ｌ１１ 的大肠杆菌 Ｙ Ｋ５３７ ，生产重组人白细胞介素３（ Ｉ Ｌ３） ，发现在发酵过程中，限制性流加甘油，控制溶解氧在３０ ％ ～４０ ％ 左右、３０ ℃生长１１ｈ ，４２ ℃诱导培养４ｈ ，能将发酵液中最终菌体密度从 Ｏ Ｄ１６６００ 提高到 Ｏ Ｄ５３６００（ 相当于每升发酵液含１０６ 克湿菌体） ，并且保持了白细胞介素３ 的表达量，占菌体总蛋白的３０ ％ 左右，含量超过３３ ％ ｇ／ Ｌ，使 Ｉ Ｌ３ 包涵体产量从湿重２２ｇ／ Ｌ 提高到８５ ｇ／ Ｌ，纯化步骤比较简单，超声破菌后经两次洗涤纯度就达到７０ ％ 以上。

用人工神神经网络法辨识发酵动力学模型参数

本文提出发酵动力学模型参数辩识的人工神经网络方法，并对几种典型的模型进行了具体尝试，结果表明，用这种方法估计参数效果极好。

乙型肝炎病毒PreS基因的克隆表达及亲和层析纯化

目的 获取乙型肝炎病毒前 S区基因 (HBVpre S) ,序列测定正确后进行融合表达 ,为今后研究其机制及应用创造条件 .方法 利用乙型肝炎病毒基因组为模板体外扩增HBVPre S基因后进行基因克隆 .目的基因经测序正确后克隆入融合表达载体 p RSET- C中 ,转化大肠杆菌 JM10 9(DE3) .目的基因经 IPTG诱导 ,由 T7启动子调控表达了氨基端带 6个连续组氨酸残基的 HBV- Pre S蛋白 ,在变性条件下对目的蛋白进行纯化 .结果 成功地扩增到 pre S区全长基因 ,得到融合 6个 His的 HBV- Pre S蛋白纯度大于 90 % .结论 构建了乙型肝炎病毒前 S区基因的重组表达载体 ,获得了稳定表达的工程菌 .

高密度培养大肠杆菌TG1/pGEX-hCT和高表达重组人降钙素

目的 :高密度、高表达培养重组大肠杆菌 TG1/p GEX- h CT,生产重组人降钙素 (rh CT)。 方法和结果 :应用 NBSBio Flo30 0 0型 5 L 自控发酵罐 ,采用分批培养和补料分批培养相结合的培养技术 ,控制碳源和氮源的补加 ,控制溶解氧 ,使重组菌 E.coli TG1/p GEX- h CT发酵光密度 [D(6 0 0 ) ]达到 5 8.6 ,人降钙素和 GST融合蛋白 (GST- h CT)的含量达到 3.2 g/L。结论 :本研究为工业化生产重组 h CT奠定了基础。

人白细胞介素-3基因翻译起始区的改造提高其在大肠杆菌中的表达水平

为了提高人白细胞介素-3(hIL-3)在大肠杆菌中的表达,在计算机辅助下,设计合成了PCR突变引物,用于改造起始密码AUG上下游序列,并在不改变5＇端氨基酸编码的前提下,尽可能选用大肠杆菌高频使用的密码子。将经改造后的hIL-3cDNA和翻译起始区置于P_L启动子之下,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导后,获得表达产物,提高表达水平近一倍,表达量达到菌体总蛋白量的30％左右。表达产物经Western blot验证,经PVDF膜转移后进行N端顺序分析,证明前15个氨基酸正确,产物经包涵体纯化后,纯度提高至80％以上,初步复性后能明显促进hIL-3依赖细胞的生长。

脯氨酰内肽酶培养条件的优化及高密度发酵

基因工程菌E.coliBL21/pGEMPEP可以组成型表达重组的点状产气单胞菌脯氨酰内肽酶(PEP),但培养条件极大地影响着酶的产量,为了获得高效表达,首先测定了工程菌表达PEP的稳定性并考察了培养温度、pH、发酵时间、碳源、氮源、无机盐等对产酶的影响,得到了优化的发酵条件,L9(34)正交试验进一步明确了摇床转速、培养温度、pH值、培养时间对产酶量的影响都有高度的统计学意义。在此基础上利用NBSBioFlo3000型5L自控发酵罐进行了高密度、高表达发酵、经20h培养,最终菌体密度达OD60060(相当于干菌体225g/L),PEP表达量为28%,每升发酵液中含PEP酶315g。

人胸腺素α1在大肠杆菌中的融合表达

利用基因工程表达的方法 ,在大肠杆菌中通过与GST蛋白融合的方式高效表达了胸腺素α1前体基因 ,随后经亲和层析和SP强阳离子树脂纯化相结合的方式 ,得到了胸腺素前体肽段 31肽和N 端未经乙酰化修饰的 2 8肽。融合蛋白表达量达到菌体总蛋白的 35 %～ 40 % ,样品肽的产量也达到了约 2 0 0mg L(肽 发酵液 )的产量。经质谱测定 ,分子量分别为 336 6和 30 6 6。BalB C小鼠脾脏淋巴细胞体外测活表明 ,所构建的GST Tα1融合蛋白和纯化后的产物对于淋巴细胞具有比较明显的增殖作用 ,其中N 端未经乙酰化的 2 8肽产物与 31肽产物活性相近 。

基因工程菌高密度发酵液中碳源物质甘油的定量检测及其浓度的优化控制

比较了高碘酸氧化法、铜离子络合法、高压液相色谱法和甘油激酶法四种不同的方法定量测定重组工程菌ＹＫ５３７／ｐＳＢ－ＴＫ高密度发酵液中甘油（作为细菌生长的碳源物质）的浓度，发现甘油激酶法可以排除发酵液中其他物质的干扰，精确测定甘油的含量。在此基础上对发酵培养基中甘油的浓度进行了优化，结果表明，甘油浓度控制在较低的水平有利于菌体密度的提高。在５Ｌ自动发酵罐中，控制甘油浓度在５ｇ／Ｌ左右，经２０ｈ的培养，最终细菌密度达到１２０ＯＤ６００（相当于４８ｇＤＣＷ／Ｌ），重组蛋白ｒｈＴＮＦα的表达量占细菌总蛋白的３０％左右。

人肿瘤坏死因子及其突变体的基因工程下游工艺研究

研究了重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦα）及其突变体［Ｌｙｓ２］人肿瘤坏死因子［Ｌｙｓ２］ｒｈＴＮＦα）的基因工程下游工艺。ｒｈＴＮＦα和［Ｌｙｓ２］ｒｈＴＮＦα的温控表达工程菌株在Ｂ．ＢｒａｕｎＥ１０型１５Ｌ自控罐中经发酵每升可得５０ｇ湿菌体。ｒｈＴＮＦα和［Ｌｙｓ２］ｒｈＴＮＦα的表达水平仍能保持在５０％以上，且表达产物为可溶性蛋白。所得菌体经超声破菌、硫酸铵沉淀，然后依次用ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ、ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ２００柱层析进行分离纯化，由每升发酵液菌体最终可得１ｇ左右的纯品，纯度达到９８％左右，ｒｈＴＮＦα的比活为～１５×１０８ＩＵ／ｍｇ，［Ｌｙｓ２］ｒｈＴＮＦα的比活为～６×１０８ＩＵ／ｍｇ。

谷氨酸发酵过程的神经网络模拟预测模型

人工神经网络是八十年代迅速兴起的一门非线性科学。它力图模拟人脑的一些基本特性,如自组织性、自适应性和容错性能等,已在模式识别、数据处理和自动化控制等方面得到了初步应用,取得了很好的效果。 本文根据上海某味精厂某发酵罐的一批批报数据,利用人工神经网络的一典型模型—“反向传播”

重组人胸腺肽α1工程菌的高密度发酵

为实现重组人胸腺肽α1工程菌E .coliTop10 /pThioHis Tα的高密度高表达发酵 ,首先进行了培养条件的摸索 ,确定了该工程菌的最佳培养条件、诱导剂IPTG的浓度、诱导起始和结束时间 ,然后用 5L自控发酵罐进行分批补料培养 ,发酵中采用分阶段限制性流加氮、碳源 ,保持溶解氧在 35 %左右 ,结果经 3mmol/LIPTG诱导 5h ,3批重复发酵 ,最终菌体密度均达到 6 0A60 0 以上 (相当于干菌 2 5 .6 g/L) ,保持并超过了该重组蛋白在试管和摇瓶中的表达量 ,融合蛋白ThioHis Tα的表达占菌体总蛋白的 42 .4%左右 ,含量达到 5 .7g/L ,相当于胸腺肽α12 .4g/L 。