采用CRISPR/Cas9系统构建HIF-1α基因敲除质粒及功能验证

目的采用簇状规则间隔短回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑技术构建质粒并敲除HEK-293细胞的HIF-1α基因。方法通过在线软件设计3号外显子上靶向HIF-1α的sgRNA,并将其构建到CRISPR/Cas9载体中。经Sanger测序验证质粒构建正确后,将重组质粒通过Lipofectamine 3000转染到HEK-293细胞中。通过药物筛选提取细胞DNA和蛋白,用T7E1酶和Western blotting检测基因变化和蛋白表达情况。结果Sanger测序结果显示,所设计的sgRNA成功插入到CRISPR/Cas9载体中,序列验证正确,重组质粒构建成功。T7E1酶切实验成功切除3条带,sgRNA的打靶效率为33.8%。Western blotting结果显示,经过氯化钴诱导、转染药筛后的HEK-293细胞蛋白表达水平较野生型细胞明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9载体,载体靶向敲除HIF-1α基因功能验证成功。

牙周炎和前列腺疾病相关性研究现状

牙周炎是常见的口腔炎症性疾病,有大量文献报告牙周炎与全身系统性疾病存在密切联系,如心血管疾病、2型糖尿病、早产低出生体重儿等。牙周炎与前列腺疾病有相似的风险因素,年龄、吸烟、肥胖和糖尿病以及炎症的刺激对疾病有显著影响。该文主要对牙周炎和前列腺疾病的相关性的研究情况,共同的影响因素,以及相关的生物学机制等进行综述。

Nd: YAP激光治疗牙周炎的疗效评价及其对龈下微生物的影响

目的比较龈下刮治和根面平整术(scaling and root planning,SRP)联合Nd:YAP激光与单纯SRP治疗对牙周炎患者疗效的差异和龈下微生物的影响。方法选择符合纳入标准的牙周炎患者。每位患者龈上洁治1周后为本研究基线,随机半口分组。试验侧采用SRP联合Nd:YAP激光治疗;对照侧仅采用SRP治疗。每位患者选择一组同颌同名单根牙,进行龈沟液(gingival crevicular fluid,GCF)和龈下菌斑取样。分别在基线、治疗完成后6周和12周进行探诊深度(probing depth,PD)和探诊出血(bleeding on probing,BOP)的数据采集、龈沟液及龈下菌斑样本的采集。ELISA法检测龈沟液中炎症因子白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的浓度。16S rDNA高通量测序对各龈下菌斑样本的菌群构成进行分析和比较。结果试验侧与对照侧的各项临床指标较基线时均有显著改善(P<0.05),但两组间无明显差异。两组的IL-6浓度较基线均显著下降,治疗后6周,试验侧的IL-6浓度明显低于对照组(P<0.05)。龈下菌斑α多样性分析,治疗后6周及12周,对照侧的Shannon指数高于基线,Simpson指数低于基线(P<0.05)。测序结果显示,治疗后6周,试验侧的普氏菌属(Prevotella)和Saccharibacteria_incertae_incerta_sedis的相对丰度较基线显著下降;密螺旋体属(Treponema)的相对丰度低于对照侧,嗜二氧化碳噬细胞菌属(Capnocytophaga)的相对丰度高于对照侧(P<0.05),12周时无明显差异。结论在本研究中,Nd:YAP激光联合SRP和单纯SRP治疗牙周炎均有明显效果,而两种治疗方法在临床指标上无明显差异,辅助使用Nd:YAP激光在短时间内更有利于GCF IL-6浓度的降低和部分牙周致病菌的控制。