青藤碱调控NLRP3/caspase-1通路抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症的机制研究

目的探究青藤碱调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)通路抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症的机制。方法以氧糖剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型诱导BV-2细胞焦亡模型,采用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、50、100μmol/L)的青藤碱干预BV-2小胶质细胞24h后的细胞活性,筛选药物浓度。将BV-2细胞分为正常组、OGD/R组和OGD/R+青藤碱组(20μmol/L)进行研究。使用微量酶标法测BV-2小胶质细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性。采用赫斯特(Hoechst)/碘化丙啶(PI)细胞染色法检测BV-2细胞中PI阳性细胞数。采用RT-PCR和Western blot方法检测青藤碱对BV-2小胶质细胞硫氧还蛋白结合蛋白(TXNIP)、NLRP3、caspase-1、白细胞介素(IL)-1β和IL-18的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果10、20μmol/L青藤碱干预24h后,OGD/R诱导的BV-2小胶质细胞活性较对照组无显著差异[(97.69±0.51)%、(96.03±1.13)%比(100.00±0.00)%,P均>0.05)],50、100μmol/L青藤碱干预24h后,OGD诱导的BV-2小胶质细胞活性较对照组显著降低[(78.92±3.02)%、(64.12±4.55)%比(100.00±0.00)%,P均<0.05]。与正常组比较,OGD/R组BV-2小胶质细胞LDH相对释放量明显上升[(2.23±0.19)比(1.00±0.00),P<0.05],PI活性细胞比例明显升高[(46.28±4.02)%比(3.52±0.31)%,P<0.05],TXNIP、NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA[TXNIP:(1.58±0.20)比(0.69±0.08),P<0.05;NLRP3:(2.32±0.18)比(0.88±0.09),P<0.05;caspase-1:(1.61±0.11)比(0.77±0.15),P<0.05;IL-1β:(3.17±0.43)比(1.03±0.09),P<0.05;IL-18:(1.82±0.22)比(0.81±0.13),P<0.05]和蛋白表达水平明显上调[TXNIP:(1.26±0.13)比(0.72±0.09),P<0.05;NLRP3:(0.43±0.04)比(0.16±0.04),P<0.05;caspase-1:(1.30±0.09)比(0.58±0.07),P<0.05;IL-1β:(1.21±0.11)比(0.39±0.06),P<0.05;IL-18:(0.54±0.07)比(0.23±0.06),P<0.05]。与OGD/R组比较,OGD/R+青藤碱组BV-2细胞LDH相对释放量明显下降[(1.28±0.09)比(2.23±0.19),P<0.05],PI活性细胞比例显著减少[(23.08±3.46)%比(46.28±4.02)%,P<0.05],TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1βmRNA[TXNIP:(0.95±0.11)比(1.58±0.20),P<0.05;NLRP3:(1.26±0.12)比(2.32±0.18),P<0.05;caspase-1:(0.95±0.05)比(1.61±0.11),P<0.05;IL-1β:(1.55±0.18)比(3.17±0.43),P<0.05]和蛋白表达水平显著下降[TXNIP:(0.78±0.04)比(1.26±0.13),P<0.05;NLRP3:(0.26±0.03)比(0.43±0.04),P<0.05;caspase-1:(0.71±0.05)比(1.30±0.09),P<0.05;IL-1β:(0.54±0.03)比(1.21±0.11),P<0.05],IL-18蛋白水平下降[(0.34±0.08)比(0.54±0.07),P<0.05]。结论青藤碱可能通过下调NLRP3/caspase-1通路磷酸化水平,抑制BV-2小胶质细胞焦亡及炎症反应。

选择性脾动脉栓塞治疗儿童创伤性脾破裂1例

随着社会的发展,儿童意外伤害,在国外从20世纪70年代开始,在我国从上世纪90年代开始,成为儿童死亡的首要原因[1],占儿童全部死亡人数的50%。交通伤和高处坠落伤等高能量致伤因子是儿童严重创伤的主要致伤因子;同时,由于儿童身体发育不成熟,导致救治难度增加,创伤的病死率和致残率高居不下[2]。脾脏是腹腔内最容易受伤的脏器,占腹部创伤的40%~50%。同时,脾脏也是重要的免疫器官,尤其对身体发育未成熟的儿童尤为重要。如何在抢救生命的前提下,实现保留脾脏功能非常重要[3]。现报道1 例选择性脾动脉栓塞治疗儿童创伤闭合性脾破裂病例。