山西省牛羊蓝舌病血清流行病学调查与分析

为了解蓝舌病病毒(BTV)在山西省的感染及分布情况,采用竞争ELISA方法,对分别在2013年和2015年的5—6月份采自山西省11个市的1 090份牛羊血清样品进行了BTV抗体检测,分析BTV阳性分布与地理、气候因素的关系。结果共检测出BTV抗体阳性样品127份,总阳性率为11.65%。其中,羊阳性血清96份,阳性率为19.28%(96/498);牛阳性血清31份,阳性率为5.24%(31/592)。结果表明,山西省部分地区牛羊群中存在BTV感染,且阳性率与纬度、降雨量有关。

单味中药对猪嗜血支原体黏附红细胞的影响

研究单味中药对猪嗜血支原体(M.suis)黏附红细胞作用的影响,筛选具有抑制M.suis黏附红细胞作用的中药。应用悬滴镜检法、血液直接PCR法筛选M.suis阳性血液和M.suis阴性血液;利用qPCR技术研究单味中药与M.suis阳性红细胞、M.suis、红细胞作用后,红细胞黏附M.suis的拷贝数变化。结果显示,青蒿、黄芩、槟榔、甘草、秦皮、苦参、丹参作用于M.suis阳性红细胞,可极显著降低红细胞黏附M.suis的拷贝数(P<0.01);青蒿、黄芩、槟榔、甘草、秦皮、苦参、丹参作用于M.suis可极显著减少红细胞黏附M.suis拷贝数(P<0.01);青蒿、黄芩、槟榔、甘草作用于红细胞,可极显著抑制红细胞黏附M.suis拷贝数(P<0.01)。结果表明,青蒿、黄芩、槟榔、甘草、秦皮、苦参、丹参可抑制M.suis对红细胞的黏附,可用于预防和治疗M.suis感染和猪附红细胞体病中药的研发。

复方中药对猪嗜血支原体感染预防作用的研究

为研究复方中药对猪嗜血支原体(M.suis)感染的预防效果,将复方中药Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和强力霉素分别与M.suis阳性血液在细胞培养液中进行培养,间隔12h用qPCR检测培养物中M.suis拷贝数。选取临床健康的35日龄仔猪进行M.suis PCR检测,将50头M.suis PCR阳性仔猪随机分为5组,每组10头,每组隔离饲养。三个复方中药组采用拌料方式连续喂服7d,强力霉素组拌料喂服5d,对照组饲料中不添加任何药物。分别于用药前、用药后第10、20、30天前腔静脉采血,对血液M.suis拷贝数、红细胞SOD活力、红细胞膜ATP酶(Na+K+-ATPase、Ca2+Mg2+-ATPase)活力、淋巴细胞(T、B)增殖率、血清IgG含量进行检测。结果显示,三种复方中药在体外培养时均可极显著降低培养物中M.suis拷贝数(P<0.01);在仔猪预防试验中,与对照组和强力霉素组相比,复方中药Ⅰ可以极显著降低血液中M.suis拷贝数(P<0.01),提高红细胞SOD活力与B淋巴细胞增殖率(P<0.05或P<0.01);复方中药Ⅱ可以提高红细胞SOD活力、Na+K+-ATPase活力与淋巴细胞增殖率(P<0.05),但无法长时间抑制M.suis生长;复方中药Ⅲ可以极显著降低血液中M.suis拷贝数(P<0.01),显著提高红细胞SOD活力(P<0.05)。结果说明:复方中药Ⅰ对M.suis自然感染有良好的预防作用。

锌、NAC对镉染毒巨噬细胞的保护作用

探讨镉(Cd)对家禽巨噬细胞的毒性损伤和免疫功能的影响,以及锌、N-乙酰半胱氨酸(NAC)对Cd染毒巨噬细胞的保护作用。试验建立Cd^(2+)(20,50μmol/L)染毒HD-11细胞模型,研究不同时间段(6,12 h)Cd对HD-11细胞毒性损伤,并通过向细胞培养基中补充Zn^(2+)(20μmol/L)、NAC(500μmol/L)的方式,探讨Zn^(2+)和NAC对Cd染毒巨噬细胞细胞骨架、细胞凋亡、ROS产生、线粒体膜电位(MMP)水平及免疫功能的影响。通过检测细胞金属元素结合原件(MTF-1)、金属硫蛋白(MT-1)基因转录水平,揭示Zn^(2+)和NAC对Cd染毒巨噬细胞的调控机理。结果显示,Cd染毒造成HD-11细胞骨架蛋白降解、ROS产生、MMP水平下降、细胞凋亡增加以及IL-1β、IL-8、IL-10基因表达量降低。Zn^(2+)、NAC添加能不同程度地降低Cd染毒巨噬细胞结构损伤,减少ROS产生和MMP去极化水平,增强细胞抗氧化能力和免疫功能,促进MTF-1和MT-1基因表达。结果表明,Cd染毒可以造成鸡巨噬细胞浓度—时间依赖性结构损伤和免疫功能紊乱,单独或联合添加Zn^(2+)、NAC可通过增强细胞抗氧化水平,有效抑制Cd染毒鸡巨噬细胞毒性损伤,改善细胞免疫功能。

血液直接PCR方法在猪嗜血支原体检测中的应用

为临床上能快速准确检测猪嗜血支原体感染,建立了一种检测猪嗜血支原体的血液直接PCR方法。该方法能特异性地扩增猪嗜血支原体16SrRNA基因中的一段396bp序列,而对猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等没有扩增到目的条带;该方法能检测到每微升抗凝血中猪嗜血支原体的最低拷贝数为5.52×101 copies,与常规PCR相当;应用血液直接PCR和常规PCR对100份抗凝血样进行检测,阳性检出率分别为65%和69%,差异不显著(P>0.05)。结果表明,血液直接PCR方法具有良好的特异性、较高的灵敏度和较快的检出速度,适用于临床上对猪嗜血支原体感染进行快速确诊和流行病学调查。

抗猪嗜血支原体中药单体的体外筛选

为体外筛选具有杀灭猪嗜血支原体(M.suis)作用的中药单体,应用血液直接PCR扩增中药单体作用不同时间后培养体系中的M.suis,通过比较电泳条带灰度值筛选出具有抗M.suis作用的中药单体;应用qPCR测定所筛选中药单体作用后培养体系中M.suis的拷贝数,通过杀灭率来评估中药单体对M.suis的杀灭效果。结果筛选出丹参酮ⅡA磺酸钠、甘草酸二钾、秦皮甲素、黄芩苷和肉桂酸5种具有体外抗M.suis作用的中药单体,其中在药物作用18h,丹参酮ⅡA磺酸钠、甘草酸二钾和秦皮甲素对M.suis杀灭率分别为76.9%,90.6%和79.2%。体外试验表明,丹参酮ⅡA磺酸钠、甘草酸二钾和秦皮甲素对M.suis的杀灭效果较好,是理想的抗M.suis目标药物,具有潜在的临床应用与研究价值。