LC-MS/MS定量检测小鼠尿液RNA氧化标志物8-oxoGsn

目的建立快速高效的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)用于测定小鼠尿液中RNA氧化标志物8-氧化鸟苷(8-oxoGsn)水平。方法小鼠尿液37℃孵育离心后,用70%甲醇溶液(含30%10 mmol/L醋酸铵)1∶10稀释尿液上清,加入同位素内标[13C,15N2]8-oxoGsn,用Agilent ZORBOX SB-Aq色谱柱(100 mm×3 mm,1.8μm)分离,以含0.1%甲酸的10 mmol/L醋酸铵水溶液及甲醇溶液为流动相梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 mL/min,进样量5μL,电喷雾离子源正离子模式,多反应监测。结果8-oxoGsn响应和水平的线性关系良好,R^(2)为0.996,定量检测限为0.25 ng/mL,加标回收率86.21%~112.56%,基质效应为-5.01%,日内和日间变异系数分别为3.38%~7.17%、2.74%~9.52%,满足生物样品的分析要求;小鼠尿液检测结果显示C57小鼠对乙酰氨基酚(APAP)处理组8-oxoGsn水平明显高于C57对照组(P<0.01);乙型肝炎病毒转基因(HBV-Tg)小鼠APAP处理组8-oxoGsn水平明显高于HBV-Tg小鼠对照组(P<0.001)。结论建立的LC-MS/MS灵敏度高,准确可靠,适用于小鼠尿液中8-oxoGsn水平的测定。

P53凋亡刺激蛋白2介导酒精性肝病脂代谢相关基因的转录组学分析

目的应用转录组学测序探讨P53凋亡刺激蛋白2(apoptosis stimulating protein 2,ASPP2)对酒精性肝病脂代谢相关基因表达的影响。方法首先用慢病毒转染人肝细胞HL-7702细胞系,构建7702 Control-shRNA和7702 ASPP2-shRNA细胞模型。然后,两组细胞均用400 mmol/L乙醇处理24 h,构建7702 Control-shRNA和7702 ASPP2-shRNA酒精肝模型。Illumina测序平台筛选差异表达基因,并进行基因本体(gene ontology,GO)富集分析和互作分析。结果高通量测序以P<0.05且|log 2(foldchange)|>1的筛选标准获得150个差异表达的基因,其中上调的差异基因有58个,下调92个。其中,与脂代谢相关的上调差异基因有8个,下调差异基因有7个。GO富集分析发现4个脂代谢相关的细胞组分,包括高密度脂蛋白粒子,血浆脂蛋白粒子,脂蛋白粒子以及蛋白-脂质复合物。结论本研究发现15种脂代谢相关差异基因,这些基因可能参与ASPP2介导的酒精性肝病脂代谢,为进一步研究ASPP2在酒精性肝病脂代谢中的调控机制奠定了基础。

多种线上授课模式在传染病教学中的实施和探讨

在新的教学形势下,传染病学教研室开展传染病学课程的线上教学,使用钉钉+雨课堂+腾讯会议为主要教学软件对课前、课中、课后三个教学环节进行探索,总结分析教学过程中各软件优势与弊端。实践表明,传染病学教学中,多种线上授课软件的相互结合能达到甚至超过传统授课的效果,对于新形势下医学人才的培养具有重要的意义。

LC-MS/MS定量分析小鼠肝组织15种胆汁酸成分研究

目的 建立快速高效的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)同时测定小鼠肝组织15种胆汁酸(BAs)浓度。方法 采用活性炭制备无BAs的空白肝组织,作为制备标准样品和质量控制样品的生物基质。匀浆小鼠肝组织,加入碱性乙腈溶液(5%NH4OH)沉淀蛋白。以^(2)H_(4)-DCA,GUDCA-d_(5)和LCA-d4为内标物,用Agilent Poroshell 120 EC C18色谱柱(100 mm×4.6 mm, 2.7μm)分离,以醋酸铵水溶液和甲醇-乙腈溶液为流动相梯度洗脱,柱温30℃,流速0.3 mL/min,进样量为2μL,采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式,多反应监测(MRM)。结果 15种BAs线性关系良好,R^(2)均大于0.993,定量检测限均小于2 ng/mL,基质效应为90.76%~109.25%;日内、日间准确度和精密度均小于15%, 4℃24h、反复冻融、冷冻保存1个月稳定性良好,满足生物样品的分析要求;小鼠肝组织检测结果显示游离型BAs和结合型BAs(G-BAs、T-BAs)都以母体CA为主,TCA含量最高;游离BAs浓度为(723.89±50.65)ng/mL,显著高于G-BAs【(56.90±11.28)ng/mL,P<0.001】,T-BAs浓度为(40322.90±14034.80)ng/mL,显著高于游离BAs(P<0.001)或G-BAs(P<0.001)。结论 建立的LC-MS/MS方法灵敏度高,准确可靠,适用于检测小鼠肝组织BAs浓度。

脱氧胆酸对HBV复制及肝癌细胞自噬影响的研究

目的观察脱氧胆酸(deoxycholic acid,DCA)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)复制的影响,及其对肝癌细胞自噬的影响程度,探讨其可能的作用机制。方法观察不同浓度DCA对HepG2及HepG2.215细胞活性的影响,进而测定不同浓度DCA对HepG2.215细胞HBV DNA的载量及HBsAg、HBeAg和HBcAg表达水平的影响,蛋白免疫印迹检测自噬水平;将HepG2.215细胞转染乙型肝炎病毒X(HBX)蛋白突变表达质粒后,观察HBX对DCA处理的HepG2及HepG2.215细胞的HBV DNA载量以及HBsAg、HBeAg和HBcAg表达水平的影响,蛋白免疫印迹检测细胞自噬水平。结果①CCK-8实验结果显示随着DCA浓度的升高,细胞活力均呈现梯度下降趋势(P<0.01);②HepG2.215细胞的HBV DNA载量以及HBsAg、HBeAg、HBcAg水平均随着DCA浓度的提高而上升(P<0.01);③HepG2与HepG2.215细胞的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P<0.01),HepG2细胞的p62蛋白水平随着DCA浓度的升高而下降(P<0.01),HepG2.215细胞的p62蛋白水平随着DCA浓度的升高而上升(P<0.01);④未经DCA处理的对照组、经100μmol/L DCA处理的对照组、未经DCA处理的HBX突变表达质粒转染组、经100μmol/L DCA处理的HBX突变表达质粒转染组的HBV DNA载量、HBsAg、HBeAg、HBcAg水平、HBX蛋白水平以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均呈现依次上升趋势(P<0.01),p62蛋白水平呈现依次下降趋势(P<0.01)。结论①DCA处理可以降低肝癌细胞的活力;②DCA可以促进HBV的复制;③DCA可以促进HepG2细胞的自噬,在HepG2.215细胞中促进不完全自噬;④DCA可以通过促进HBX蛋白的合成来加强HBV的复制,进而促进不完全自噬。

南通市老年人生活质量的影响因素

目的了解南通市老年人生活质量状况及其危险因素。方法采用分层整群抽样的方法,欧洲五维健康量表及自制量表为调查工具,对南通市986名60岁以上老年人进行调查。结果南通市老年人对行动能力、自我照顾能力和焦虑或沮丧的满意度较高,对躯体疼痛或不适以及日常活动的满意度较低,且每个维度得分均是男性好于女性(P<0.05)。多因素分析显示南通是老年人生活质量的影响因素依次是居住方式、慢性病个数、体育锻炼、年龄、性别和职业。结论鼓励老年人适当参加体育锻炼,建立和谐的社会关系,提高老年人生活质量。

转导野生型p53的K562细胞出现生长抑制和凋亡

把重组有编码野生型p53的逆转录病毒载体转导到p53蛋白缺失的K562细胞,以观察野生型p53蛋白在K562细胞表达后对K562细胞增殖和凋亡的影响。应用RT-PCR和Western印迹杂交方法检测K562细胞p53表达,应用流式细胞仪计数检测细胞的增殖,采用梯形DNA和细胞形态学方法检测细胞凋亡变化。研究结果表明:感染pLXSN-p53病毒24小时后,K562细胞p53表达阳性,K562-p53细胞的生长受到抑制,少数细胞进入凋亡状态。结论提示,野生型p53可促进p53表达阴性的K562细胞生长抑制与凋亡。

BCL—2蛋白不能抑制VP16诱导的乳腺癌细胞(Bcap37)凋亡

目的 为了解BCL—2在Bcap37细胞表达增高能否抑制足叶乙甙诱导的细胞凋亡,把重组的逆转录表达载体pLXSN—bcl—2和pLXSN—neo转染Bcap37细胞,经G418筛选获得表达细胞(Bcap37—bcl—2,Bcap37—neo)。方法 经RT—PCR和Western blotting检测bcl—2基因的表达,并用不同浓度的VP16处理两种细胞16小时,经细胞形态观察、细胞凋亡原位显示、MTT实验检测细胞的凋亡变化。结果 两种细胞的凋亡变化没有显著差异。结论 BCL—2高表达不能阻滞VP16诱导的Bcap37细胞凋亡,这与我们以前所做的关于BCL—2能阻滞VP16诱导的K562细胞凋亡作用相反,推测BCL—2的抗凋亡作用可能和细胞类型有关,可能还有其它因素参与BCL—2对细胞凋亡的调节。

FEKO软件的RCS仿真应用

通过介绍FEKO软件计算雷达散射截面(RCS)的建模步骤及算法选择,将不同目标RCS仿真结果与有关文献资料进行比较,并以表格的形式对不同目标的不同算法进行综合比较,分析FEKO求解RCS的准确度以及各参数与硬件性能和计算时间的相应关系。

胸腰椎不稳定性爆裂性骨折的前路减压和稳定术

目的：探讨前路减压和应用器械稳定治疗腰腰椎不稳定性爆裂性骨折的可行性。方法：20例患者中，18例病人（90%）应用了髂骨及肋骨支撑，2例（10%）应用了Cage和肋骨支撑移植。18例单独应用了Kaneda方法，2例在应用Kaneda方法的同时又应用了Cage加骨移植。结果：所有病人手术中彻底切除向椎管内挤压的碎骨片，完全减压为止；平均失血1.6升。没有一位病人在减压和稳定后出现神经症状加重。手术后测量的脊柱后凸角度平均是12度（n=20)。较术前改善了9度。18例有术后远期随访X线片，平均后凸角度9度，矫正角度丢失了3度。无医源性神经损伤及血管损伤，无内固定松动及骨移植失败。结论：前路手术在椎管清楚率，术后载荷效果，降低骨移植失败方面优于后路手术，对神经恢复能创造合理的条件。但前路手术也存在潜在的严重的并发症和大多数外科医生不熟识这一入路的缺点。

我国医院垃圾集中焚烧处理技术的探讨

本文论述了我国医院垃圾集中焚烧处理的重要性,介绍了目前国内外医院垃圾焚烧处理的现状。详细阐述了采用回转 窑热解焚烧技术集中处理医院垃圾的技术优势及工艺、设备,展望了该技术在焚烧处理医院垃圾等危险废物领域的应用前景。

论发挥大学生党员先锋模范作用长效机制的构建

本文针对大学生党员的特点提出了其发挥作用的实践途径和模式构建,并从完善培训制度、构筑作用平台、创新考评体系等方面对先进性建设长效机制作了深入探讨。

我国城市生活垃圾焚烧厂建设模式的探讨

本文论述了焚烧处理在我国城市生活垃圾处置方式中的重要地位。回顾了国外垃圾焚烧的历史与现状,详细介绍了我国现阶段已经建设运行的垃圾焚烧厂的几种炉型模式,针对不同的建设规模对新建焚烧厂的选用模式进行了探讨和分析。

全员化、全面化与全程化——高等教育大众化时代高校学生就业服务体系的构建

就业关乎民生,也关乎高校的全面改革和人才培养质量的提升。在高等教育大众化时代,构筑全员化、全面化、全程化的大学生就业服务体系,是高校坚持以"学生为本"整合就业服务资源、拓展就业服务外延、提升就业服务内涵的需要,也有利于推动高校就业服务工作的更好开展。

化学发光杂交进行菌落克隆的原位筛选

用化学发光杂交试剂代替３２Ｐ进行菌落原位筛选重组Ｐ５３阳性克隆，可减少同位素的放射性损害和污染及半衰期短等缺点．本方法实验周期短、特异性可和同位素相当，可用于重组目的基因的原位杂交筛选．

高校开放办学的价值、内涵与策略

开放办学是经济社会发展的现实需求,是高等教育发展的基本规律,也是高校内涵建设的必然选择。开放办学核心在于区域协同和国际合作,关键在于开放理念的树立以及机制和平台的构建。开放办学在"一体两翼"的框架下,要坚持遵循从被动服务走向主动合作,从配合研究走向协同创新,从单边合作走向双边互惠,从容纳吸收走向交流融合的行动策略。

构建高校辅导员职业化平台的探索与实践

当前高校辅导员队伍面临着工作强度大、收入待遇底、身分认同差的"职业尴尬",要消除辅导员的"职业尴尬",克服辅导员的"职业倦怠",需要形成辅导员职业发展的基本平台。文章论述了从课堂教学平台、理论研究平台、专业培训平台、工作支撑平台四个方面整体构建辅导员职业化平台的理论意义和实践探索。

高校党内民主建设的理论原则和实践路径

高校党内民主建设是高校党的建设的重要内容,是高校科学发展的必然要求,也是高校人才培养的内在逻辑。高校党内民主建设的理论原则可以分为两个层次:第一个层次是主体性原则,第二个层次是约束性原则。高校党内民主建设的实践路径包括:推行民主选举与实行民主决策相统一,坚持表决民主与扩大协商民主相配套,发扬民主作风与完善民主制度相兼顾,行使民主权利与培养民主意识相同步。

论办好人民满意的教师教育

办好人民满意的教师教育要求按照教育发展规律,为基础教育源源不断地培养优质师资,这是党的"为人民服务"宗旨在教育领域的集中体现。办好人民满意的教师教育是"民族复兴"、"民生幸福"等"中国梦"实现的基础,具有重要的时代意义。为了办好人民满意的教师教育,需要推广实施免费师范生制度,重视对教师教育机构的评估,强化师德教育,进一步完善教师资格制度。