电镜在病毒感染诊断中的应用

本文系统温习了动物病毒分类与命名以及人类重要致病病毒电镜诊断的形态学指征。自１９６９年以来，我们应用超薄切片、负染和免疫电镜技术对６００余份病毒感染的培养细胞、实验动物组织以及少数临床样品（血清和粪便病毒提取液以及皮肤活检组织等）进行了电镜检查和诊断。检出的病毒有：触染性软疣病毒、鼠痘病毒、疱疹病毒、腺病毒、人乳头瘤病毒、马脑炎病毒、乙型脑炎病毒、登戈病毒、流感病毒、鼠副流感病毒、合胞病毒、狂犬病毒、流行性出血热病毒、鼻病毒、肠道病毒以及人免疫缺损病毒（艾滋病病毒）等。在送检的样品中有少数是应用电镜最先发现的病毒，如新疆出血热病毒、冠状病毒和呼肠孤病毒，还有乙型肝炎病毒和甲型肝炎病毒。文中还简要介绍了从不同临床样品中快速检出病毒的电镜技术方法。

在可能的生物恐怖袭击中病毒的电镜诊断 附:微波和数码图像技术应用于快速电镜诊断简介

本文介绍了在可能的生物恐怖袭击中,电镜在病毒诊断和鉴别诊断的应用。文中重点描述了痘病毒科和4种不同科的出血热病毒,包括:丝状病毒科、沙拉病毒科、布尼病毒科和黄病动毒科所属病毒在电镜下的形态学和形态发生学特征。电镜在痘病毒与疱疹病毒的鉴别诊断中也是快速和可靠的方法。在附录中还简要介绍了微波和数码图像技术在快速电镜诊断中的应用。

离体培养鸡胚脑神经细胞的超微结构研究

本文应用扫描电镜和透射电镜,观察离体培养鸡胚脑细胞的超微结构,侧重描述了神经细胞及其突起间突触连接的形态特征。培养4天后,分化发育成为双极和多极的神经细胞及其突起,彼此已连成网络,并出现初期的突触连接,还见有突触前袋样结构和桥粒样细胞连接。培养7天后,神经细胞之间的轴-树、轴-体和轴-轴等类型的突触连接数目增多,透明突触囊泡密集,结构更完善。培养10天和14天后,神经细胞之间的突触连接仍较多,但已出现神经细胞变性,纤维性神经胶质细胞明显增多。

病毒感染电镜诊断和病毒分类命名的新进展

病毒感染电镜诊断和病毒分类命名的新进展陈德蕙张贺秋王国华（军事医学科学院基础医学研究所，北京１００８５０）电镜是检出病毒感染和对病毒进行分类、鉴定的有力工具。从理论上讲，电镜可以检出任何在体外或体内组织细胞内复制、增殖的病毒及其所产生的细胞病变，并提...

培养细胞中病毒共感染的形态学依据

本文综合报道根据电镜下病毒的形态学和形态发生学的特征,从134份普通感冒和2份SARS患者鼻腔分泌物或咽拭子分离病毒阳性或可疑阳性的体外细胞培养物中发现有9份是两种病毒的共感染。它们是:腺病毒与副粘病毒共感染2份;疱疹病毒与副粘病毒共感染2份;鼻病毒与冠状病毒共感染1份;鼻病毒与正粘病毒共感染1份;鼻病毒与副粘病毒共感染1份以及冠状病毒与呼肠病毒共感染2份。十分罕见的是,在两份冠状病毒的感染细胞内分别观察到与鼻病毒和呼肠病毒的共感染,在感染细胞内和/或细胞外两种病毒的成熟病毒粒子均较多,而且在细胞浆内相互紧密接触。提出,在病毒共感染的培养细胞内,病毒在复制和组装的过程中各自病毒的基因和毒力是否会发生变异均值得病毒学工作者深入研究。

感染细胞内Q热立克次氏体增殖的电镜观察

Q热是一种人畜共患疾病,其病原体为伯纳特氏立克次氏体(Coxiella burneri),通称Q热立克次氏体Q-R。本文报告应用电镜观察感染细胞内Q-R的增殖过程及细胞超微结构改变。小白鼠腹腔内接种从人体分离的Q-R。动物发病后取脾脏组织按常规制作超薄切片,透射电镜观察。部分动物接种减毒株Q-R。电镜下,感染毒力强Q-R小鼠脾网状内皮细胞和中性粒细胞胞浆内含数目不等的Q-R剖面。有的仅单个Q-R被吞食与溶酶体融合形成吞噬体,其中Q-R超微结构完好,细胞壁外薄内厚的双层脂质膜和质膜均清晰可辨。

感染神经元内流行性出血热病毒抗原的免疫金标记

在所有的RNA病毒中,布尼安病毒科(Family Bunyaviridae)的病毒是唯一的具有在感染细胞高尔基复合体及其邻近光面囊泡内芽生成熟的形态发生学特征。我们曾应用常规超薄切片电镜技术,在我国两种出血热(流行性出血热,EHF和新疆出血热,XHF)病毒感染的新生乳鼠大脑海马回神经元内观察到病毒在增生、扩张的高尔基扁囊和囊泡内芽生成熟的图象。本研究应用低温包埋免疫金标记技术进行感染细胞内EHF病毒抗原分子的亚细胞定位,以求阐明高尔基复合体异常增生与病毒抗原分布的关系。

潜伏

拍摄时间：2000年10月18日;样品类型：体外培养昆虫细胞; 制作方法：常规电镜超薄切片方法;仪器型号：Philips CM120 作品描述：多年前曾应用透射电镜观察按常规方法制作的体外培养细胞超薄切片样品中检出经重组Bacmid转染的昆虫细胞Sf9细胞表面有大量成簇排列密集芽生成熟的杆状病毒科（Baculoviridae）病毒粒子（左图Χ45 000）。

盼生安对人肝癌细胞超微结构的影响

目的:以氟尿嘧啶(5 Fu)作为阳性对照观察了盼生安对BEL 7402肝癌细胞超微结构的影响,为该药物的抑癌作用提供形态学依据。方法:用透射电镜观察经不同剂量药物处理后细胞超微结构的变化。结果:经盼生安处理后,胞浆空泡化,细胞器中线粒体严重空泡变性,其次是高尔基体和粗面内质网的空泡化,核糖体减少。胞内次级溶酶体,多泡小体,自噬体及髓样小体增多。5 Fu对肝癌细胞形态的影响不如盼生安明显。结论:盼生安主要导致显著的线粒体超微结构改变,胞浆空泡化,抑制了肿瘤细胞的能量代谢和蛋白质合成系统而使细胞功能减退,代谢缓慢最终使细胞退变死亡。

电子显微镜在人类疾病诊断中的应用——过去、现在和将来

The continued application of electron microscopy as an adjunct procedure for the diagnosis of human diseases has been questioned in light of the explosive development and refinement of immunophenotyping, cytogenetic and molecular techniques (nucleic acid hybridization, molecular genetics, and the polymerase chain reaction). Accumulated fact demonstrated lately that a combination of immunohistochemistry and molecular techniques could not identify every disease and some diagnostic problems went unanswered. And immunohistochemistry sometimes produced results that are entirely convincing but incorrect. It is confirmed by our experience and that of many other investigations that electron microscopy can be applied to human disease diagnosis still as a powerful tool. It can help diagnose nonimmunoreactive diseases, nonneoplastic or neoplastic, clarify diagnoses in cases with complex and confusing immunophenotypes, promote understanding of the differentiation of new or controversial entities, and , as a result, enhance light microscopy diagnostic expertise.

呼肠病毒与细胞凋亡

从SARS患者生前咽拭子和尸检肺组织分离病毒阳性的培养细胞超薄切片中,在电子显微镜下不仅发现了呼肠病毒,而且还查见具有超微结构形态特征的凋亡细胞。凋亡早期的感染细胞,其细胞核染色质浓缩、边集显著,胞浆内尚可查见病毒包涵体的残迹。多数凋亡细胞胞浆内未查见呼肠病毒及其包涵体。在早期,凋亡细胞胞核形状变化不大,核染色质呈不规则的边集、浓缩,或呈平台状。继而,凋亡细胞胞核形状高度不规则,染色质浓缩、致密,可见核孔残迹,但细胞轮廓尚保存完好,外周可查见含核质凋亡小体。到后期,凋亡细胞高度皱缩,核固缩并碎裂成细小的片块或颗粒,胞质稀少,胞体呈芽球状,细胞膜外围可查见大小不等、形状多样的含核质凋亡小体。此研究结果提示:与SARS相关呼肠病毒所诱导的细胞凋亡有可能在SARS的发病机制中起重要作用。

呼肠孤病毒与SARS相关的形态学依据

SARS患者病理尸检肺组织样品分离病毒出现细胞病变的Hep2培养细胞,按常规制作超薄切片,透射电镜下观察.电镜下,检出在感染细胞内复制、组装的呼肠孤病毒及其包涵体.病毒粒子衣壳立体对称、无包膜、直径在60～80nm.成熟病毒粒子核心致密常排列呈晶格状,不成熟病毒粒子核心空亮.数目不等的上述两种病毒粒子、长短不等的微管样结构和病毒浆常在核旁胞质内组成大小不等、无定形的病毒包涵体.此发现进一步提供了呼肠孤病毒感染有可能与SARS相关的形态学依据.

电镜诊断学的兴起与发展

电子显微镜用于临床研究和诊断已有四十余年历史，它在这方面所起的作用是重大的，现已成为临床疾病诊断中不可缺少的重要工具之一，并已建立了新兴的电镜诊断学。目前认为要发展电镜诊断学，必须加强三个平台的建设，走联合道路，组成相应的电镜诊断中心，做到优势互补，一定能为我国电镜诊断学的发展作出新贡献。

中国猕猴逆转录病毒的分离

国内首次从捕自中国三个地区的猕猴分离到三株逆转录病毒,经ELISA、免疫荧光检查与SRV-1呈阳性反应。免疫蛋白印迹试验加以证实,血清抗体与SRV-1呈阳性反应,其中有一株与SRV-1和STLV血清抗体有交叉反应。电子显微镜下见有大量病毒颗粒,具有典型逆转录病毒结构。

流行性出血热患者外周血细胞病毒抗原的免疫金标记

应用流行性出血热(EHF)病毒抗体及胶体金探针对EHF患者外周血细胞进行病毒抗原的定位·光镜免疫金银染色(IGSS)结果显示患者外周血淋巴细胞及血小板表面EHF病毒抗原阳性。采用LowicrylK4M低温快速包埋电镜免疫金染色(IGS)方法,发现金探针特异性定位于淋巴细胞胞质的大小空泡和液泡内(可能为病毒芽生、成熟部位增生、扩大的高尔基囊泡)以及血小板质膜、开放管道系统扩张的管腔内。结果表明EHFV能在人外周血淋巴细胞中复制成熟。血小板表面IGSS阳性物质主要为循环血中EHFV抗原与抗体形成的免疫复合物。

应用免疫金标记技术分析福氏2a痢疾杆菌膜抗原

本文报告应用抗福氏２ａ痢疾杆菌膜成份ＭｃＡｂ及胶体金探针对细菌膜抗原进行了定位。结果显示４种抗脂多糖ＭｃＡｂ（３Ａ６、２Ｅ６、４Ｆ１．２Ａ３）可不均一的识别位于细菌表面的抗原，而另外一种抗ＬＰＳＭＣＡｂ（１Ｇ８）和一抗膜蛋白ＭｃＡｂ（１Ａ１）识别的抗原未暴露于细菌表面。应用细菌膜碎片包埋前染色成功地定位了抗胰蛋白ＭｃＡｂ１Ａ１位于细菌内膜的抗原。与ＭｃＡｂ的生物学活性比较表明。阳性标记细菌表面抗原的ＭｃＡｂ的抗原与其阻断志贺氏菌接触性溶血试验和对小鼠的被动保护力密切相关。提示免疫电镜标记技术确定抗原表位在细菌表面的可及性和拷贝数对构建和筛选痢疾工程菌苗具有重要意义。

福氏2a痢疾杆菌膜抗原的免疫电镜定位

本文报告应用抗福氏2a痢疾杆菌膜成份McAb及胶体金探针对细菌膜抗原进行了定位。结果显示4种抗脂多糖McAb(3A6、2E6、4F1、2A3)可不均一的识别位于细菌壁表面的抗原,而另外一种抗LPS的McAb种(1G8)和一种抗膜蛋白McAb(1A1)识别的抗原未暴露于细菌表面。应用细菌膜碎片包埋前染色成功定位了抗膜蛋白McAb(1A1)位于细菌内膜的抗原。与McAb的生物活性比较表明阳性标记细菌表面抗原的McAb的抗原与其阻段志贺氏菌接触性溶血试验和对小鼠的被动保护力密切相关。提示免疫电镜标记技术确定LPS抗原表位在细菌表面的可及性和拷贝数对构建和筛选痢疾工程菌苗具有重要意义。

小鼠心房肌分泌心钠素的免疫电镜观察

心钠素(ANF)主要存在于心房肌细胞的特殊颗粒(SG)内。本实验采用给小鼠钠负荷,以促进ANF分泌及禁水使ANF分泌减少的方法,采用放射免疫分析法测定血浆ANF浓度,应用免疫电镜技术观察心房肌细胞的超微结构及ANF颗粒的形态改变,探索心房肌细胞ANF分泌的形态学依据。结果显示钠负荷组小鼠血浆ANF浓度(3.91±1.02)显著高于禁水组(2.73±1.20),P<0.05。免疫电镜观察结果表明,禁水5天后,心房肌内具ANF免疫活性的SG主要集中于核两端肌浆带内。

微波辐射固定及其在免疫金标记技术中的应用

应用微波辐射快速固定大鼠胰腺组织和白血病病人骨髓细胞悬液,再按常规制作电镜超薄切片。包埋后超薄切片免疫金标记β细胞中的胰岛素分泌颗粒显示组织细胞结构清晰,标记率高,(图1)。骨髓细胞悬液包埋前免疫金标记和酶反应定位血小板表面糖蛋白(GPⅡb/Ⅲa)和胞浆内过氧化物酶均呈现阳性结果(图2)。电镜观察结果表明,经微波辐射固定的生物样品能较好地保存细胞的超微结构,抗原性及其酶活性。根据多次反复试验,我们取得的经验是,在进行微波辐射固定生物样品时,电镜样品固定温度和时间以26～28℃,15秒为宜。由于微波辐射加热温度升高很快。