脊髓缺血再灌注损伤对大鼠CaMKIV基因及蛋白表达的影响

目的分析大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)后钙调蛋白依赖性蛋白激酶4(Ca MKIV)基因及蛋白表达的变化。方法雄性SD大鼠84只,按随机数字表法分为假手术组、SCII 0 d组、SCII 1 d组、SCII 3 d组、SCII 7 d组、SCII 14 d组、SCII 28 d组,每组12只。假手术组仅暴露肾动脉下腹主动脉,不阻断。SCII各组采用Naslund法阻断腹主动脉,复制SCII模型。采用免疫组织化学法、Western blot、实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测各组大鼠Ca MKIV蛋白及基因的表达,BBB评分评价大鼠后肢运动功能。结果免疫组织化学法结果显示,假手术组Ca MKIV蛋白表达很少,SCII组Ca MKIV蛋白高表达于神经元的细胞浆和细胞核;在伤后3 d,Ca MKIV阳性细胞数最多,且高于假手术组(P<0.05)。Western blot结果提示,Ca MKIV蛋白表达在再灌注0 d即高于假手术组(P<0.05),于再灌注3 d达峰值后逐渐降低;至28 d,Ca MKIV蛋白表达量与假手术组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。q RT-PCR结果表明,Ca MKIV基因表达在再灌注0 d开始增加,与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.05),于3 d达峰值后降低,至28 d仍高于假手术组(P<0.05)。BBB评分显示,SCII各组大鼠后肢功能随再灌注时间延长有所改善,但至28 d时仍差于假手术组。结论 SCII早期可快速诱导Ca MKIV基因表达上调和蛋白合成,Ca MKIV在SCII中可能发挥重要作用。