中国五省市甲型肝炎病毒基因分型的研究

为了解甲型肝炎 (甲肝 )病毒 (HAV)在中国几个城市的基因型分布 ,选择浙江杭州、江苏启东、安徽铜陵、云南昆明和上海市等的甲肝病人粪便标本或血清标本 ,以逆转录 -套式聚合酶链反应 (RT nPCR)扩增合成HAVVP1/2A交接区基因区 ,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果表明 ,从这些城市甲肝病人分离到的 17株HAV株均属基因Ⅰ型 ,为IA和IB亚型 ;所有HAV株间核苷酸差异均小于 15 % ,但约 5 0 %HAV株株间核苷酸差异大于 7 5 % ,说明中国流行或散发的HAV株可能有基因IA、IB亚型同时存在。该项研究结果将为HAV的分子流行病学追踪调查提供方法和依据。

甲型肝炎减毒活疫苗的研究Ⅱ.实验性疫苗的研制

用H_2M_(20)K_5(32℃)甲型肝炎减毒株在KMB_(17)人胚肺二倍体细胞上制备一批实验性甲型肝炎减毒活疫苗。经暂定的生物制品检定项目检测,疫苗内不含外源因子,感染性滴度为10^(6.5)TCID_50/ml,疫苗病毒为HAV。12只猕猴体内试验表明,疫苗接种后不引起具临床重要意义的肝炎指征,但可使全部猕猴产生抗HAV抗体。本批疫苗的安全性和免疫原性在猕猴体内得到证实,有必要在少量人群中作进一步试用观察。

细胞生长促进试验筛选新生牛血清

目的建立适合人二倍体细胞培养血清的筛选方法。方法通过测定细胞倍增时间和进行细胞生长促进试验对15批次的新生牛血清作了筛选,并将筛选出的11批次血清用于大规模细胞培养,观察细胞的生长维持情况。结果发现细胞倍增时间与相对生长率无明显相关性(P>0.05)。在大规模细胞培养中,相对生长率97%以上的血清更适合二倍体细胞生长。结论细胞生长促进试验比细胞倍增时间测定更能客观地反映血清促人二倍体细胞的生长能力。细胞生长促进试验可能是较佳的。

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2减毒株)接种后的中和抗体测定

采用甲型肝炎减毒活疫苗(H_2减毒株)接种者的双份血清与H_2减毒株(中和用)的病毒,根据ELISA双夹心捕捉原理建立了甲型肝炎中和抗体的测定方法。结果证明接种疫苗后产生的抗HAV抗体为中和抗体,1∶2稀释血清至少可以中和10~3TCID_(50)HAV。对此特异性抗体测定有助于评价甲肝减毒活疫苗的免疫效果。

甲肝减毒活疫苗(H_2株)二针法免疫效果观察

目的 观察甲肝活疫苗 (H2 株 )二针法的免疫原性。方法 用 0、 6免疫程序 ,选 85名免前抗HAV IgG阴性的易感者接种甲肝活疫苗 (TCID5 0 =10 6 5 /ml)。结果 一针免后 1月血清抗体阳转率 10 0 % ,抗体几何平均滴度 (GMT1 )等于 7 2 8± 2 2 1。二针免后 1月 ,抗体阳转率仍为 10 0 % ,GMT2 等于 48 7± 2 2 3 ,再免后抗体滴度比一针增加了 6 7倍。结论 89 4%的再免者抗体均有增长 ,其中增长 4倍以上的占 74 1%。

甲型肝炎疫苗研究进展显著

甲型肝炎是世界性传染病,全世界约有40亿人受其威胁.本病主要发生在经济欠发达的第三世界国家,但美国年发病人数也达10万人左右.在中国,35岁以上成年人中,甲肝抗体阳性率达90%以上,常引起季节性的流行.1988年春季的上海甲肝大流行,患病数高达30万人之多. 甲肝是由甲型肝炎病毒(HAV)引起的疾病.HAV是小RNA病毒,直径27nm,属肠道病毒中的一种。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗（H2株）的接种与血清学观察

目的 观察H2株冻干甲型肝炎减毒活疫苗接种人体后的安全性和血清学免疫反应。方法 选择广西自治区蒙山县一小学学生(年龄7～12岁)164人和浙江省台州市椒江区一幼儿园儿童(年龄3～6岁)114人，免前筛选抗-HAV-IgG阴性，SGPT正常，无肝炎病史、症状和体症者，分别接种二个批号的H2株冻干甲肝疫苗。观察疫苗接种后30分钟、8、24、48、72小时的局部及全身反应，以后隔天记录体温及其它有关临床反应；接种疫苗后1、2个月采静脉血作SGPT及抗-HAV-IgG测定；同时长期随访作免后13、24个月血清抗-HAV-IgG抗体水平检测。抗体测定用EIA竞争抑制法，用WHO提供的标准品(含100mIU／ml)进行标定。结果 在整个观察期间，所有观察者未见有中、强副反应及其它临床副反应发生，SGPT检测结果无异常升高。H2株冻干甲肝疫苗与液体剂型一样具有良好的安全性。疫苗接种后的抗体应答，免后2个月抗体阳转率为99％～100％，13～24个月阳转率仍高达97．8％～98．9％；免后2个月抗体水平达到高峰，GMT达1607mIU／ml，在免后24个月抗体水平仍维持在448mIU／ml，比同类产品免后2个月抗体还高4倍以上。结论 H2株冻干甲肝疫苗安全性良好，接种后有较高的抗体阳转率和抗体水平，优于同类产品报道。

甲型肝炎疫苗研究的重大突破

本文论述了我国甲型肝炎严重流行的基本原因，指出发展疫苗以预防甲肝应是主要措施，报道了H2减毒株的培育及首批人体接,12中接种者在接种后长达20周的临床及血清酶反应中未发现任何不良反应，全部接种者均产生抗HAV抗原，抗体阳性时间平均为接种后第3周。

不同进箱温度对冻干甲肝疫苗的影响

目的:评价冻干进箱板层温度-20℃与5℃对冻干甲肝减毒活疫苗的CCID50、外观的影响。方法:选择同一批号,采用两种不同进箱温度,其余冻干工艺均相同的的冻干甲肝疫苗,分别比较CCID50、外观、废品率。结果:两种进箱温度的冻干甲肝疫苗的感染性滴度CCID50没有明显差异,5℃进箱外观要好于-20℃进箱,5℃进箱废品率更低。结论:5℃进箱冻干甲肝疫苗外观更饱满,废品率更低,利于大规模生产。

甲型肝炎减毒活疫苗H_2株的免疫效果

1987年5月以来,分3批为11451人接种了甲型肝炎减毒活疫苗H2株（甲肝疫苗）,对其中785人于接种后进行了血清甲肝抗体检测,甲肝抗体阳转率达92.9%,开始阳转的时间为接种后2周～5周,抗体滴度1∶2～1∶32。

流行性感冒的预防和控制

流行性感冒(以下简称流感)病毒是当今引起急性呼吸道疾病的最常见原因,也是影响全球发病率和死亡率的主要原因。在过去25年的流感发病季节中,美国的住院率最高达270/10万,年均死亡2万人、经济损失达30～50亿美元。流感对老年人及慢性病患者的影响已众所周知。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗的安全性及免疫原性观察

目的观察采用不含明胶、不含人血白蛋白保护剂制备的冻干甲型肝炎（甲肝）减毒活疫苗接种后的安全性及免疫原性。方法在浙江杭州及河北正定二个点，筛选了183名甲肝病毒易感者，给予冻干甲肝减毒活疫苗一针免疫。观察疫苗接种后7d内的局部和全身反应，同时采集接种后的血清样本，检测甲肝抗体阳转率及抗体产生的水平。结果观察期间主要表现为轻度反应，肝功能检测未见异常，未发生与疫苗有关的重度反应、皮疹及不良事件。疫苗接种后2个月的抗体阳转率为98．2％，抗体的几何平均滴度为135．5mlU／mL。结论不含明胶、不含人血白蛋白的保护剂制备的疫苗安全性及免疫原性良好。

甲型肝炎减毒活疫苗(H_2株)10年流行病学效果观察

目的 观察在甲型肝炎 (甲肝 )高发县、区用甲肝减毒活疫苗 (H2 株 )大面积接种后长期的流行病学保护效果。方法 选择浙江省嵊泗县和椒江区二个试点。二组小学生定群研究 ,观察 4年。试点内 1～ 15岁儿童普遍接种甲肝活疫苗。部分研究对象作血清中和试验、免疫回忆反应及免后 10年抗体检测。结果 接种组与未接种组甲肝发病率差别具有显著性 (P <0 .0 1) ,疫苗保护率为10 0 %。疫苗接种率与甲肝发病率二者具有明显负相关。全人口甲肝发病率分别下降了 94.5 %和90 .3% ,1～ 15岁儿童组发病专率分别下降了 96 .9%和 97.9% ,10年期间没有发生甲肝流行。血清学检测结果 :免后阴性血清 ,用体外中和法验证有 6 3.8%仍有中和作用 ,加强免疫 1针后回忆反应明显。免后 10年抗 HAV IgG的阳性率为 80 .2 %。结论 甲肝减毒活疫苗 (H2 株 )长期的流行病学效果明显。通过普遍接种甲肝活疫苗 。

甲型肝炎减毒活疫苗（H2株）一针接种后免疫保护效果的15年观察

目的 评估甲型肝炎（甲肝）减毒活疫苗（H2株）一针接种后的15年血清学和流行病学保护效果.方法 在浙江省台州市椒江区选择220名免前抗甲肝抗体阴性儿童（年龄1～3岁）作为血清免疫学追踪观察对象,分别于接种H2株疫苗后的2个月、12个月、6年、10年和15年观察抗甲肝抗体阳性率和几何平均滴度（GMT）.分析该观察区1～15岁儿童组疫苗接种率和甲肝发病率之间的关系及整个人群15年流行病学效果观察.血清学检测方法采用ELISA法（用WHO标准品校正）和ABBOTT（美国）AxSYM mEIA法.结果 在血清学追踪观察人群中疫苗接种后2个月和接种后15年,抗体阳转率分别为98.6%和81.3%,抗体阳转率下降缓慢 15年后抗-HAV-IgG的GMT为128 mIU/ml,显著高于WHO专家建议的20 mIU/ml保护水平.随着疫苗接种率的逐年提高,1～15岁年龄组儿童的甲肝发病率明显下降,二者之间有非常明显的相关性（Kendall-Rank 相关性检验,τ=-0.931,P＜0.01）.疫苗接种者连续15年累计观察236 413人年,未发生一例甲肝 而未接种者累计观察27 206人年,发生甲肝4例,疫苗保护率为100% 儿童大规模免疫接种为整个人群建立了良好免疫屏障,甲肝发病率下降幅度达96.7%.结论 甲肝减毒活疫苗（H2株）一针接种后的血清学和流行病学保护效果持久,可达15年.

甲型肝炎减毒活疫苗病毒(H_2株)人群水平传播的能力

目的观察甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗(H_2减毒株)接种后病毒在密切接触者中是否传播。方法分别于1987年5月对浙江省医学科学院职工和家属5例、1988年4月对杭州市某小学2(2)班学生15例及1989年3月对同一所小学1(1)班、1(3)班学生42例,共62例志愿者进行甲肝减毒活疫苗(H_2减毒株)接种。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测接种者血清甲肝IgM抗体及总抗体,采用ELISA双夹心捕捉抗原法和细胞培养法检测5名志愿者接种后的粪便。甲肝的诊断依据临床表现、转氨酶升高和甲肝IgM抗体等标准。结果4例志愿者接种后的31份粪便用ELISA双夹心法检测甲肝抗原全部阴性。取上述其中8份标本接种人胚肺二倍体细胞(KMB17),经二次传代有3例接种者在8～21 d时检测到甲肝病毒(HAV)。与42例接种者抗体全部阳转不同,在免疫接种后的10～11个月,作为密切接触者的24名同班同学,甲肝抗体阴性。在部分接种甲肝减毒活疫苗的班级中观察了经历一次自然甲肝野毒流行后的免疫反应。50名学生中,15名接种者甲肝抗体全部阳性,未接种者中30名甲肝抗体阴性,5名甲肝IgM抗体阳性。结论甲肝减毒活疫苗(H_2减毒株)接种后,有少量HAV疫苗病毒在粪便中排出,但目前未观察到在人群中引起水平传播。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗H_2株的安全性和免疫原性研究

为观察H2 株冻干甲型肝炎 (甲肝 )减毒活疫苗接种人体后的安全性和免疫原性 ,选择广西壮族自治区蒙山县一小学学生 (年龄 7～ 12岁 ) 16 4人和浙江省台州市椒江区一幼儿园儿童 (年龄 3～ 6岁 ) 114人为接种对象 ,免疫前筛选抗甲肝病毒IgG抗体 (抗 HAV IgG)阴性 ,血清丙氨酸氨基转移酶 (SGPT)正常 ,无肝炎病史、症状和体征者 ,分别接种 2个批号的H2 株冻干甲肝活疫苗。观察接种疫苗后 30min ,8、2 4、4 8、72h的局部及全身反应 ,以后隔天记录体温及其它有关临床反应。接种疫苗后 1、2个月采静脉血测定SGPT及抗 HAV IgG ,同时长期随访检测免疫后13、2 4个月血清抗 HAV IgG水平。检测用酶免疫测定 (EIA)竞争抑制法 ,用世界卫生组织 (WHO)提供的标准品(含 10 0mIU/ml)进行标定。结果显示 :在整个观察期间 ,所有观察者未见中、强反应及其它临床反应发生 ,SGPT检测结果无异常升高。H2 株冻干甲肝活疫苗具有良好的安全性。接种疫苗后 2个月抗体阳性率为 99 1%～10 0 0 % ,13～ 2 4个月阳性率仍高达 97 8%～ 98 9% ;免疫后 2个月抗体几何平均滴度 (GMT)达 16 0 7mIU/ml,在免疫后 2 4个月抗体GMT仍维持在 4 4 8 3mIU/ml。表明H2 株冻干甲肝活疫苗安全性良好 ,接种后有较高的抗体阳转率和GMT。

甲型肝炎病毒中国流行株5′NCR核苷酸序列异质性研究

目的 了解甲型肝炎病毒中国流行株 5′非编码区 (5′NCR)核苷酸序列的异质性。方法 选择浙江、江苏、安徽、云南等地的甲肝病人粪便或血清标本 ,以逆转录 套式聚合酶链反应 (RT nPCR) ,扩增合成 5′NCR高变区基因片段 ,并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果 所有甲型肝炎病毒株间 5′NCR高变区核苷酸差异≤ 3nt;与美国株LA差异≥ 4nt;与澳大利亚株HM175差异≥11nt;差异的大小与基因型无关。结论 甲肝病毒基因结构非常稳定 ,变异率极低。

冻干甲型肝炎减毒活疫苗H2株的安全性和免疫原性研究

为观察H2株冻干甲型肝炎(甲肝)减毒活疫苗接种人体后的安全性和免疫原性，选择广西壮族自治区蒙山县一小学学生(年龄7～12岁)164人和浙江省台州市椒江区一幼儿园儿童(年龄3-6岁)114人为接种对象，免疫前筛选抗甲肝病毒IgG抗体(抗-HAV-IgG)阴性，血清丙氨酸氨基转移酶(SGPT)正常，无肝炎病史、症状和体征者，分别接种2个批号的H2株冻干甲肝活疫苗。观察接种疫苗后30min，8、24、48、72h的局部及全身反应，以后隔天记录体温及其它有关临床反应。接种疫苗后1、2个月采静脉血测定SGPT及抗-HAV-IgG，同时长期随访检测免疫后13、24个月血清抗-HAV-IgG水平。检测用酶免疫测定（EIA)竞争抑制法，用世界卫生组织(WHO)提供的标准品(含100mlU／ml)进行标定。结果显示：在整个观察期间，所有观察者未见中、强反应及其它临床反应发生，SGPT检测结果无异常升高。H2株冻干甲肝活疫苗具有良好的安全性。接种疫苗后2个月抗体阳性率为99．1％-100．0％，13～24个月阳性率仍高达97．8％-98．9％；免疫后2个月抗体几何平均滴度(GMT)达1607mlU/ml，在免疫后24个月抗体GMT仍维持在448．3mlU／ml。表明H2株冻干甲肝活疫苗安全性良好，接种后有较高的抗体阳转率和GMT。

不同牛血清对人胚肺二倍体细胞增殖的影响

目的探讨不同级别的牛血清对人胚肺二倍体细胞KMB17增殖的影响。方法用不同级别的牛血清培养KMB17细胞，每天作细胞计数，绘制生长曲线，计算细胞倍增时间，MTT比色法测定细胞增殖能力。结果用胎牛血清培养，细胞增殖能力最强，倍增时间最短；其次为类胎牛血清、特级新生牛血清、优级新生牛血清。结论不同级别的牛血清对KMB17细胞增殖效果不同，进行细胞培养时宜选择级别较高的牛血清。

甲型肝炎病毒中国流行株5’NCR核苷酸序列异质性研究

目的了解甲型肝炎病毒中国流行株5’非编码区(5’NCR)核苷酸序列的异质性。方法选择浙江、江苏、安徽、云南等地的甲肝病人粪便或血清标本，以逆转录-套式聚合酶链反应(RT—nPCR)，扩增合成5’NCR高变区基因片段，并进行直接核苷酸序列分析和差异比较。结果所有甲型肝炎病毒株间5’NCR高变区核苷酸差异≤3nt；与美国株LA差异≥4nt；与澳大利亚株HM175差异≥11nt；差异的大小与基因型无关。结论甲肝病毒基因结构非常稳定，变异率极低。