慢病毒介导RNA干扰抑制RRS1基因表达对胆管癌RBE细胞增殖的影响

研究慢病毒介导RNAi干扰技术抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞表达后对胆管癌RBE细胞增殖产生的影响。方法 运用RT-PCR检测手术切除的胆管癌与癌旁胆管组织标本RRS1 mRNA基因水平的表达。通过慢病毒载体介导RNA干扰技术,从转录水平沉默RRS1基因表达,RT-PCR检测抑制RRS1后在胆管癌mRNA基因水平的表达;体外实验观察抑制RRS1基因后对胆管癌RBE细胞增殖的影响,初步探讨抑制RRS1基因表达后对胆管癌细胞增殖的影响。结果 RT-PCR检测结果发现在胆管癌组织中的RRS1 mRNA基因表达水平较癌旁胆管组织明显升高,RNA干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中表达后,胆管癌RBE细胞的增殖能力受到了明显下降。结论 (1)胆管癌组织中RRS1基因表达上调。(2)慢病毒RNAi干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中的表达后,RRS1会促进胆管癌细胞的增殖能力。

机械灌注应用在肾移植中的效果评价(附36例报道)

目的探讨机械灌注法保存供肾的临床效果。方法2013年5月至10月，解放军第181医院肾脏科采用机械灌注保存供肾共36例。采用LKT-100型Lifeport器官灌注运输器及其配套专用的相关软件进行机械灌注保存、运输、灌注供肾。分析患者术后一般情况，机械灌注过程中阻力系数和流速与移植物功能延迟恢复（DGF）发生的关系。结果36例受者均未发生移植肾丢失。其中30例（83％）未发生DGF，移植肾功能恢复良好；6例出现DGF，经治疗术后3～18d逐渐恢复正常。36例供肾进行机械灌注1h，阻力系数≤0．3mmHg／（ml·min）28例，受者术后均未发生DGF；阻力系数〉0．3mmHg／（ml·min）8例，其中6例受者术后发生DGF。8例流速〉100ml／min，受者均未发生DGF；21例流速60～100ml／min，其中有1例受者发生DGF；7例流速〈60ml／min，其中5例发生DGF。结论机械灌注法保存供肾能改善供肾质量，降低移植受者的DGF发生率。

肾移植后高尿酸血症对移植肾远期功能的影响

目的探讨肾移植术前后高尿酸血症的患病率及高尿酸血症对移植肾远期功能的影响。方法比较216例肾移植受者肾移植术前48h和术后1个月内高尿酸血症的患病率。按术前48h及术后1个月内有无高血尿酸血症将受者分为A、B、C、D组(A组术前及术后血尿酸水平均正常;B组术前血尿酸水平增高,术后正常;C组术前血尿酸水平正常,术后增高;D组术前及术后血尿酸水平均增高),另按术后1个月内的血尿酸水平(正常,高于正常但<500μmol/L,>500μmol/L)将受者分为A′、B′、C′组,比较以上各组术后12、24、36个月的血肌酐水平。结果术前男性受者高尿酸血症患病率为34.2%,女性为37.1%;术后男性患病率为36.3%,女性为42.9%,与术前相比均无显著性差异(P>0.05)。女性术后高尿酸血症患病率高于男性(P<0.05)。男女受者术后平均血尿酸水平均高于术前(P<0.01)。术后12、24和36个月,C、D组血肌酐水平显著高于A、B组(P<0.05,P<0.01),而A、B组间比较及C、D组间比较无显著性差异(P>0.05)。C′组血肌酐水平显著高于其他两组(P<0.05),B′组显著高于A′组(P<0.05)。结论肾移植术后肾功能恢复良好的受者,其术后血尿酸水平均高于术前,且以女性显著。肾移植后高尿酸血症可能是导致慢性移植肾失功的因素之一。

五酯胶囊在肾移植术后的临床应用研究

目的探讨在肾移植术后受者应用五酯胶囊(五味子甲素)提高免疫抑制剂他克莫司(tacrolimus,Tac)血药浓度同时对肝脏具有保护作用。方法将73例肾移植术后受者随机分为2组,五酯胶囊组35例,对照组38例。两组抗排异治疗方案均为Tac+霉酚酸酯胶囊(MMF)+泼尼松,五酯胶囊组加服五酯胶囊,两组均服药12个月为1个疗程,并分别于服药1周,1、3、6、12个月时采用微粒子酶免疫法(MEIA法)检测Tac血浓度值变化;同时检测肝、肾功能,血糖等。结果五酯胶囊组服药1周,Tac血浓度平均升高67.2%,治疗1～12个月间Tac用量五酯胶囊组均显著低于对照组(P<0.01);而肝、肾功能及血糖与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论五酯胶囊可显著提高肾移植后Tac血药浓度,并明显减少受者Tac用量,无明显的不良反应。

移植肾活检在移植肾疾病早期诊断及鉴别诊断中的价值

目的探讨移植肾活检在移植肾急性排斥反应、慢性排斥反应、慢性环孢素肾病、肾小球肾炎等移植肾病变诊断及鉴别诊断中的价值,并探讨慢性排斥反应的早期肾活检时机。方法对肾移植受者中出现血清肌酐水平升高超过正常水平、微量白蛋白尿或（和）蛋白尿、肾小球性血尿等临床表现,但根据临床资料并不能确诊病因的44例实施非随机移植肾活检,另对6例受者于术后1个月进行常规移植肾活检。对全部肾活检标本依照Banff 97分类标准进行病理诊断,并结合临床资料进行分析。结果在移植后1年内、移植后2～3年、移植后3年以上分别接受肾活检的受者中慢性排斥反应发生率分别为31.3%、76.5%和88.2%,肾活检发现慢性排斥反应的移植受者中多数并无明显的慢性排斥临床表现。临床拟诊急性排斥的受者中,少数经移植肾活检排除急性排斥,多数病理检查虽证实为急性排斥,但其中部分受者同时合并慢性排斥、肾小球肾炎和环孢素肾病;临床拟诊为慢性排斥反应者均由肾活检后病理确诊,但其中少数受者同时存在急性排斥,肾小球肾炎和慢性环孢素肾病病理表现;移植肾损害病因不明的受者移植肾活检结果分别为急、慢性排斥、肾小球肾炎和慢性环孢素肾病。肾活检诊断为肾小球肾炎的受者中近半数并无肾小球肾炎临床证据。上述患者经肾活检明确诊断后,治疗效果良好。结论本研究结果提示,肾移植术后第2、3年是早期诊断慢性排斥反应的最佳时机,应该在术后第2、3年进行常规移植肾活检。移植肾活检对临床不能明确移植肾疾病诊断的肾移植受者具有重要作用,并有利于修正临床诊断。临床上常见移植肾同时存在急、慢性排斥反应,慢性环孢素肾病,肾小球肾炎等两种或两种以上疾病的情况。

改良腹透导管植管法在战伤后急性肾功能衰竭中应用的探讨

目的：探讨改良腹透导管植管法在战伤后急性肾功能衰竭中的应用。方法：先植入无绦纶套的腹透导管，两周后取出此导管并沿着原隧道将标准 Tenckhoff 导管送人腹腔。结果：植入法全部成功，均未损伤内脏器官；植管所需时间为10～15分钟；植管并发症：导管堵管5例(6.9%)，管周漏液9例(12.5%)。结论：改良腹透导管植管法操作简单、快速、安全、成功率高及导管堵管率低，适合在战伤后急性肾功能衰竭中应用。

移植肾慢性排斥反应的miRNAs差异表达研究

目的通过microRNAs芯片技术,探讨microRNAs(miRNAs)在移植肾慢性排斥反应中的差异表达情况。方法纳入4例慢性排斥反应患者肾穿组织为实验组,3例病理检查正常的肾组织皮质为对照组。采用miRNA芯片筛选出差异表达显著的微小RNA,并用实时定量PCR技术验证芯片结果可靠性。结果紫外分光光度法和变性电泳法证明所提取样本总RNA质量良好,可用于后续的芯片实验。芯片实验结果显示CR组中出现差异表达显著的miRNAs 63个,其中表达显著上调35个,表达显著下调28个。其中有9个miRNAs集中在3个miRNAs基因簇位点:14q32.31,22q11.21,xq27.3。随机选择显著差异表达的miRNAs(hsa-miR-637,hsa-miR-648,hsa-miR-516-5p)进行实时定量PCR验证实验,其CR/NC结果(0.034,2.670,7.846)与芯片结果(0.035,2.660,7.857)相符,证明了芯片结果的可靠性。结论miRNAs在慢性排斥反应患者中出现显著差异表达,深入研究miRNAs在慢性排斥反应中的作用机制将为其预防和治疗提供新途径。

血清与尿液标本巨细胞病毒DNA联合检测在肾移植受者中的应用价值

目的探讨血清和尿液标本中巨细胞病毒(CMV)DNA的检测对肾移植受者的临床意义。方法采用实时荧光定量PCR检测174例临床肾移植受者血清与尿液中巨细胞病毒DNA载量并对其进行统计分析。结果 174例受者中尿液标本CMV-DNA阳性率(16.1%)明显高于血清(5.2%),差异具有统计学意义(P<0.05)。通过对实验结果进行比较分析发现,尿液标本灵敏度明显高于血清标本。结论临床选择CMV的送检样本类型对提高其检出率具有重要意义,同时检测能较大地提高肾移植受者CMV的检出率。

糖原合成酶激酶3β和核因子κB在抗体介导的慢性排斥反应移植肾组织中的表达和意义

目的:探讨糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、核因子κB(NF-κB)和相关炎症性细胞因子在抗体介导的移植肾慢性排斥反应(cABMR)患者肾组织中的表达情况,并分析其与肾间质纤维化/小管萎缩(IF/TA)的关系。方法:用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测116例病理诊断符合ABMR的移植肾组织中GSK-3β、NF-κB p65、调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)的表达,并分析其表达与发生ABMR的移植肾组织IF/TA的关系。以10例肾移植术前零点穿刺肾组织作为对照。结果:在抗体介导的慢性排斥反应肾组织中,GSK-3β、NF-κB p65、RANTES和MCP-1表达水平均较对照组明显增高(P均<0.001),且与IF/TA病理分级呈正相关(r分别为0.884、0.914、0.888和0.868,P<0.001),GSK-3β的表达量同NF-κB p65、RANTES和MCP-1表达亦呈正相关(r分别为0.812、0.804和0.788,P<0.001),随着纤维化程度的加重,患者血清肌酐也逐渐升高(r=0.898,P<0.001)。结论:在ABMR患者移植肾组织中,GSK-3β和NF-κB p65的表达异常增高同移植IF/TA、慢性移植肾失功的发生、发展有关。

来氟米特治疗难治性肾病综合征的临床观察

目的 探讨来氟米特治疗难治性肾病综合征的疗效及安全性。方法 选择激素抵抗或激素依赖的肾病综合征患者23例。患者接受来氟米特（口服负荷剂量50mg／d，连续3天，之后给予维持剂量20mg／d，疗程6个月）治疗；同时口服泼尼松（30～40mg／d，共8周，以后逐渐减量至隔日20mg维持）。观察临床疗效及副作用。结果 治疗1月后尿蛋白开始明显下降。治疗6个月后13例（56．5％）患者获得完全缓解，6例（26．1%）患者获得部分缓解，4例（17．4％）患者无效。治疗后血清白蛋白显著上升（P＜0．01）。在治疗期间5例患者出现一过性转氨酶升高，4例患者出现白细胞减少。结论 来氟米特联合泼尼松能有效地降低难治性肾病综合征患者的尿蛋白、升高血清白蛋白，且副作用较轻。

肾移植后高尿酸血症与移植肾的远期功能:是慢性移植肾功能丢失的因素吗?(英文)

背景:大量研究充分证实高血压、血管性肾硬化、慢性全身炎症反应都是移植肾慢性失功的重要诱因。高尿酸血症与原发性高血压及血管性肾硬化有关,并且可引起全身炎症反应,那么肾移植后高尿酸血症发病及病变程度是否对移植肾远期功能有影响呢?目的:实验首次探讨肾移植前后高尿酸血症及其病变程度对移植肾远期功能的影响。方法:选择解放军第一八一医院全军肾移植与透析治疗中心肾移植后肾功能恢复正常患者216例,男性146例,年龄(40.98±11.09)岁;女性70例,年龄(40.01±11.62)岁。为比较移植前后高尿酸血症对移植肾远期功能的影响,将病例分为4组:正常组、移植前高尿酸血症组、移植后高尿酸血症组、移植前后均高组。为比较移植后不同血清尿酸水平对移植肾远期功能的影响,将病例分为3组:血尿酸水平正常组、血尿酸水平高于正常但<500μmol/L组、血尿酸水平>500μmol/L组。观察移植前后高尿酸血症对移植肾远期功能的影响;移植后不同程度增高血尿酸水平对移植肾远期功能的影响。结果与结论:移植前男性患者高尿酸血症患病率为34.2%,女性患者为37.7%;移植后30d肾功能恢复正常时,男性患者高尿酸血症患病率为36.2%,女性患者为42.4%,与移植前相比差异均无显著性意义。女性患者肾移植后高尿酸血症患病率高于男性患者(P<0.05)。男女患者移植后血尿酸水平均高于移植前(P<0.01)。随访3年时,移植前血尿酸水平对患者远期血肌酐水平无显著影响(P>0.05),但移植后血尿酸水平持续增高者,远期血肌酐水平显著高于移植后血尿酸水平正常者。实验结果显示,肾移植后肾功能恢复良好患者的高尿酸血症患病率及程度均高于移植前,尤其是在女性患者。移植后尿酸持续增高患者远期移植肾功能不如移植后尿酸正常患者,提示移植后高尿酸血症可能是导致慢性移植肾失功的因素之一。

PKB/Akt和GSK-3β在抗体介导的慢性排斥反应患者移植肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:观察磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、糖元合成激酶(GSK-3β)在抗体介导的慢性排斥反应(chronic active antibody-mediated reiection,ABMR)患者移植肾肾小管上皮细胞中的表达,探讨二者在移植肾小管上皮细胞转分化(EMT)中的作用。方法:38例移植肾穿刺标本经病理明确诊断为ABMR,按Banff 2009标准将其按间质纤维化/小管萎缩(IF/TA)程度Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分为C1(n=12)、C2(n=14)、C3(n=12)组,用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测移植肾组织中p-Akt、GSK-3β、转化生长因子TGF-β_1、整合素连接激酶ILK、上皮细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在各组中的表达面积,线性相关分别分析p-Akt、GSK-3β与转化生长因子TGF-β_1、整合素连接激酶ILK、E-cadherin和α-SMA表达的相关性及其与IF/TA病理分级之间的关系。9例正常肾组织作为对照组。结果:ABMR患者移植肾组织中p-AKt、GSK-3β、TGF-β_1、ILK和α-SMA的表达比正常肾组织明显增加(P <0. 001),并随(IF/TA)病理分级呈逐渐递增的趋势。E-钙黏蛋白在ABMR肾小管上皮细胞中的表达比正常肾组织明显减少(P <0. 001),组间呈递减趋势,移植肾组织中P-akt的表达与TGF-β_1、ILK和α-SMA呈正相关(r分别为0. 912、0. 871和0. 878,P <0. 001),而与E-cadherin的表达量呈负相关(r=-0. 849,P <0. 001);GSK-3β的表达与TGF-β_1、ILK、p-Akt和α-SMA呈正相关(r分别为0. 874、0. 793、0. 828、0. 781,P <0. 001),与E-cadherin的表达量呈负相关(r=-0. 781,P <0. 001)。p-Akt、GSK-3β、ILK、TGF-β_1和α-SMA的表达均与移植IF/TA程度呈正相关(r分别为0. 943、0. 863、0. 907、0. 964和0. 926,P <0. 001);而E-cadherin的表达与移植肾IF/TA程度成负相关(r=-0. 859,P <0. 001)。结论:P-Akt、GSK-3β作为TGF-β_1及ILK的重要下游细胞因子可能介导了ABMR所致的肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化的发生、发展,p-Akt和GSK-3β在ABMR所致移植肾间质纤维化进程中可能发挥重要作用。

整合素连接激酶在抗体介导的慢性排斥反应患者肾组织中的表达及意义

目的研究移植肾组织中整合素连接激酶(ILK)及Ⅳ型胶原、转化生长因子β1(TGF-β1)表达和抗体介导的慢性排斥反应的关系。方法 用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测46例抗体介导的慢性排斥反应(Chronic active antibody-mediated rejection,ABMR)患者移植肾组织中ILK、Ⅳ型胶原和TGF-β1的表达情况,分析3者间及与ABMR的间质纤维化与肾小管萎缩(IF/TA)的病理分级之间的关系。15例正常肾组织作为对照。结果 ABMR移植肾组织中ILK、Ⅳ型胶原、TGF-β1的表达比正常肾组织明显增加(P<0.001),并随ABMR中IF/TA病理分级呈逐渐递增的趋势。移植肾组织中ILK的表达与TGF-β1、Ⅳ型胶原呈正相关(r分别为0.830、0.707,P<0.001)。结论 ILK可能是介导TGF-β1促进移植肾间质纤维化细胞外基质(extracellular matrix,ECM)异常沉积的发病机制,Ⅳ型胶原的异常沉积是ABMR中IF/TA患者移植肾纤维化的重要表现。转化生长因子β1已经证明了与移植肾纤维化显著的相关性,ILK在抗体介导的排斥反应的移植肾纤维化进程中起重要作用。

基质金属蛋白酶-2和金属蛋白酶抑制物-1在抗体介导的慢性排斥反应患者肾组织中的表达及意义

目的研究移植肾组织中基质金属蛋白酶(MMP-2)和金属蛋白酶抑制物-1(TIMP-1)表达和抗体介导的慢性排斥反应的关系。方法用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测46例抗体介导的慢性排斥反应患者移植肾组织中MMP-2和TIMP-1的表达情况,分析二者与肾功能关系及与ABMR的间质纤维化与肾小管萎缩(IF/TA)的病理分级之间的关系。15例正常肾组织作为对照。结果慢性排斥反应移植肾组织中MMP-2和TIMP-1的表达比正常肾组织明显增加(P<0.05),MMP-2的表达随IF/TA病理分级增加呈递减趋势(各组间比较P<0.05),TIMP-1的表达随IF/TA病理分级增加呈递增趋势(各组间比较P<0.05);随着纤维化程度的加重,患者肾功能血肌酐逐渐上升(P<0.05);TIMP-1的表达与血肌酐正相关(r=0.718,P<0.05)。结论本研究结果显示MMP-2和TIMP-1异常表达促进着移植肾纤维化的发展。

肾移植致敏受者的配型研究及应用

目的:探讨人类白细胞抗原(HLA)配型在肾移植致敏受者中的应用及意义。方法:对32例PRA阳性的肾移植受者采用HLA交叉反应组(CREGs)配型原则选择供者,观察其供受者相配情况及移植效果。结果:按交叉反应组配型原则,供受者HLACREGS+DR0,1,2和3错配(MM)分别为8例(25％)、10例(31.25％)、12例(37.5％)和2例(6.25％),无4～6错配;而按传统的HLA-A,B,DR抗原配型原则,其0,1,2,3和4MM分别为2例(6.25％)、3例(9.38％)、10例(31.25％)、9例(28.12％)和8例(25％),其中0～1错配仅有5例。肾移植术后仅有9例发生急性排斥反应,经OKT_3治疗逆转,所有受者术后肾功能均恢复正常。结论:良好的HLA CREGs配型,可以显著提高供受者相配率,对减少致敏受者的排斥反应,提高移植肾存活率具有重要的意义。

p-ERK1/2在抗体介导的慢性排斥反应患者移植肾组织中的表达及意义

目的探讨移植肾组织中磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)1/2的表达,并分析其与肾间质纤维化及肾小管萎缩(interstitial fibrosis and tubular atrophy,IF/TA)的关系。方法检测解放军181医院全军器官移植与透析治疗中心收治的120例病理诊断符合抗体介导的慢性排斥反应(chronic antibody-mediated rejection,ABMR)患者移植肾组织中p-ERK1/2、TGF-β1和Ⅳ型胶原的表达情况,并进行半定量分析,分析p-ERK1/2表达与TGF-β1、Ⅳ型胶原表达的相关性,以及p-ERK1/2与IF/TA病理分级的相关性;以10例正常肾组织作为对照组。结果 ABMR患者移植肾组织中p-ERK1/2、TGF-β1和Ⅳ型胶原表达量均比正常肾组织明显增加(P<0.05),并随着IF/TA病理分级增加呈递增趋势(r=0.938、0.926、0.937,P<0.05)。移植肾组织中p-ERK1/2表达与TGF-β1、Ⅳ型胶原表达呈显著正相关(r=0.864、0.878,P<0.01)。结论 p-ERK1/2和TGF-β1可能促进了肾移植患者移植肾细胞外基质(ECM)异常沉积,而导致移植肾纤维化,p-ERK1/2在ABMR所致移植肾纤维化过程中起重要作用。

GSK-3β在移植肾肾组织的表达及其意义

目的:探讨糖原合成酶激酶在移植肾组织中的表达及其在慢性移植肾失功发病机制中的意义。方法:收集解放军第181医院2007年01月～2009年12月因蛋白尿或肌酐升高而行肾脏穿刺术的肾移植患者的肾穿标本。其中病理诊断符合慢性移植肾失功的病例有28例,包括男21例,平均年龄(45±10)岁,女7例,平均年龄(42±9)岁,肾穿时间为肾移植术后1年～9年,平均3.5年,血清肌酐(206±122)μmol/L。利用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统(imagepro-plus6.0)半定量检测28例慢性移植肾失功患者移植肾组织中糖原合成酶激酶的表达情况,计算GSK表达的平均面积和平均累计光密度,分析GSK-3β表达水平与移植肾组织炎症细胞浸润、间质纤维化/小管萎缩程度之间的关系。5例正常肾组织作为对照组。结果:慢性移植肾失功患者肾组织中GSK-3β的表达比正常肾组织明显增加,并随肾组织炎症细胞浸润、间质纤维化、小管萎缩程度而递增。结论:糖原合成酶激酶的高表达与移植肾肾组织炎症细胞浸润、间质纤维化/小管萎缩存在正相关关系。

移植心脏急性排斥反应

急性排斥反应是目前同种异体心脏移植中最常见的一种移植免疫排斥反应，是心脏移植第一年失败的主要原因。其发生时间多在心脏移植后数天到一月之内。尽管使用了有效的抗体诱导和目前通用的免疫抑制方案，急性排斥反应的发生率仍然相当高。发生率在不同的时间和不同的免疫抑制方案治疗的患者有所不同，对一组157例使用相同抗体诱导患者的观察，在移植的前6个月，他克莫司和环孢素A为主治疗的患者活检证实的急性排斥反应分别为，

移植心脏慢性排斥反应

慢性排斥反应是目前临床上影响心脏移植物长期存活的主要难题，导致其慢性失功的主要原因，主要表现为心脏移植后血管病（cardiac allografi vasculopathy,CAV），也称为移植冠状动脉病、移植物加速动脉硬化，病变血管呈进行性狭窄^[1]。早在移植后3个月就可以发生^[2]，移植后9．5年的成年患者，血管造影仅47％呈阴性，移植后7年的儿童患者75％呈阴性^[3-4]。5年以后约有22％的移植心脏可发生移植后血管病^[2]。