人Dickkopf1基因腺病毒载体的构建及感染黑色素瘤后β-catenin表达的研究

目的构建高表达外源性Dickkopf1(DKK1)基因的重组腺病毒载体(Ad-DKK1);感染黑色素瘤细胞株后研究Wnt信号通路中主要信号分子β-catenin的表达变化。方法利用PCR技术扩增目的基因DKK1;应用分子克隆技术和AdEasy系统重组腺病毒技术,把目的基因亚克隆到穿梭质粒;经酶切和测序后,在BJAdeasy中同源重组;用PacⅠ酶切过的重组腺病毒DNA在HEK293中包装并扩增;实验分为5组:Ad-DKK1感染组、Ad-SimDKK1感染组、Ad-GFP感染组、Ad-RFP感染组和空白细胞对照组。按照MOI值为80感染恶性黑色素瘤细胞株A375,观察细胞形态;RT-PCR法检测DKK1、β-catenin基因的表达,MTT法检测细胞活力。结果重组腺病毒Ad-DKK1经酶切鉴定与测序证实构建成功。感染A375细胞,感染率均大于80%,感染后细胞形态无明显改变。Ad-DKK1感染组DKK1的表达水平(1.638±0.067)与其他4组(0.718±0.086、1.424±0.125、1.414±0.089、1.423±0.088)比较差异具有统计学意义(P<0.05),其β-catenin的表达水平(0.590±0.011)与其他4组(0.895±0.012,0.749±0.024,0.754±0.012,0.759±0.014)比较差异具有显著统计学意义(P<0.01)。MTT法检测细胞活力:Ad-DKK1感染组(0.370±0.014)与其他4组(0.412±0.017、0.398±0.006、0.395±0.007、0.426±0.016)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建重组腺病毒Ad-DKK1,经其感染的恶性黑色素瘤细胞中DKK1的表达明显增强,β-catenin的表达显著降低,A375的细胞活力受到抑制。

重组腺病毒介导的骨形态发生蛋白9与骨形态发生蛋白2复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架修复桡骨缺损的比较

背景:课题组采用新的重组腺病毒介导的基因表达手段,与传统方法比较具有高效、方便、安全等优点,可作为进入临床基因治疗应用的潜在有力手段。目的:比较腺病毒介导的人骨形态发生蛋白9(Adv-h BMP-9)与腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2(Adv-h BMP-2)分别复合纳米羟基磷灰石/聚酰胺多孔支架材料修复重建桡骨缺损的效果。方法:新西兰白兔36只,随机分成3组,制成双侧桡骨中段13mm骨缺损模型。分别植入Adv-h BMP-9+纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨、Adv-h BMP-2+纳米羟基磷灰石/聚酰胺骨、Adv-GFP+羟基磷灰石/聚酰胺骨。植入后进行大体观察、X射线摄片、组织学检测。结果与结论:BMP-9组骨缺损完全修复,BMP-2组骨缺损部分修复,而GFP对照组骨缺损修复明显欠佳。提示重组腺病毒介导的BMP-9对桡骨骨缺损后的成骨修复作用强于BMP-2。

自制电磁铁

实验要用的材料主要有铁棍、金属曲别针、1号电池和一根带塑料皮的电线。我先把电线两端的塑料皮剪掉一些,然后把带塑料皮的电线一圈圈整齐地缠绕在铁棍上,但留出铁棍的前端。我先找来双面胶,然后用双面胶将电线的一端粘在电池的负极上,再用手指将电线的另一端固定在电池的正极上。

可爱的雪

瞧，一颗颗小小的雪粒像撒下的白砂糖一样，它们在空中飘舞着，并不着急落地，好像舍不得离开天空似的。慢慢地，慢慢地，小雪花变大了，变厚了，变得密密麻麻，就像洁白无暇的花瓣纷纷扬扬地落下来；后来。

小猪嘟嘟找同桌

小猪嘟嘟不讲卫生，常常好几天都不洗一次澡。他身上脏兮兮的，散发着一股刺鼻的味道。一天，嘟嘟来到了教室里。他左看看，右瞧瞧，想找一个合适的座位。嘟嘟看到小猫咪咪旁边有一个空位，心想：咪咪爱学习，我就跟她做同桌吧!

保护蚯蚓

同学们，你们见过蚯蚓吗？蚯蚓就是没有手和脚，身体细细长长的，能够在土壤里钻来钻去的小动物呀!

简支转连续箱梁施工工艺

结合简支转连续箱梁预制、安装施工实践，具体阐述简支转连续箱梁预制、安装施工工艺。

国道202线养护大修路段就地冷再生工程实例的借鉴与思考

通过对国道202线养护大修路段就地冷再生的工程概况、施工工艺、实施检测方面的详细介绍,提出了就地冷再生施工中的注意事项及其优势,对工程采用此法具有借鉴作用。

横向分布影响线的变化规律研究

本文通过对横向分布影响线的变化规律进行研究,揭示了横梁刚度和支承刚度对影响线的作用,明确了横向分布各种计算方法的适用范围,并对刚性横梁法的影响线斜率提出了修正系数,对设计具有指导意义。

用解析法求解基于梁系理论的桥梁荷载横向分布系数

计算桥梁荷载横向分布系数主要基于梁系理论、板系理论、梁格理论。本文以梁系理论为研究对象,对1～20m简支板梁桥荷载横向分布分别采用查表法与解析法进行分析。结果表明：解析法不但具有计算方便、不受主梁片数限制等优点,而且计算结果准确,与查表法结果非常吻合。

干扰MITF表达对恶性黑素瘤细胞B16F10增殖及黑素生成的影响

目的验证小眼畸形相关转录因子(MITF)高表达在恶性黑素瘤细胞中的关键作用。方法利用RNA干扰技术特异性抑制MITF基因及其蛋白表达水平,研究该基因对B16F10细胞增殖活性的影响,验证MITF对黑素瘤细胞内外黑素分泌水平的影响及对与该分泌水平密切相关的酪氨酸酶(TYR)活性的影响。结果 RNA干扰技术在B16F10细胞中能显著抑制MITF基因及蛋白表达水平,分别为82.7%、50.0%,干扰MITF表达能抑制B16F10增殖活性达49.5%,能抑制黑素瘤细胞内、外黑素分泌水平,分别为49.7%、43.8%,能抑制TYR活性达48.0%。结论 MITF对黑素瘤细胞增殖活性具有重要作用,对黑素瘤细胞中的TYR活性及黑素生成具有重要作用,与黑素瘤细胞中的黑素功能密切相关。

妈妈的爱

妈妈的爱像温暖的阳光，总是照耀着我。 妈妈的爱像夏天的凉风，总能带给我清凉。

Wnt信号传导通路与恶性黑素瘤的相关性研究进展

恶性黑素瘤（Malignant Melanoma，MM）是一种高度恶性肿瘤，其特点为生长隐匿、转移早且迅速，预后差及死亡率高[1]。资料统计显示在所有原发皮肤恶性肿瘤中恶性黑素瘤虽然只占4％，但其致死率却占79％[2]。近年来全球范围累积发病率正以每年5％～7％的速度逐年上升，上升率超过了任何一种人类肿瘤。目前影响该病的因素尚不十分清楚，临床治疗仍以手术为主，并辅以放疗、化疗及免疫治疗，但疗效并不理想。 Wnt信号传导通路作为细胞间信号传导途径之一，在细胞分化、增殖及肿瘤形成过程中起着举足轻重的作用。Wnt途径的异常与多种肿瘤的发生或转移有关，恶性黑素瘤的发生发展也与其关系密切。本文对Wnt信号传导通路的研究进展做一综述，重点介绍其在恶性黑素瘤中的作用。

可爱的小鸽子

在我家附近的广场上有一群可爱的小鸽子。

可爱的雪

瞧,一颗颗小小的雪粒像白砂糖一样,在空中飘舞着。它们并不急着落地,好像舍不得离开天空似的。慢慢的,雪粒变成了雪花,它们好像听到了大地的召唤,纷纷扬扬地往下落。雪越下越大,雪花们在半空中你拉我扯,你抱住我,我拥紧你,一团团,一簇簇,仿佛无数扯碎了的棉花球从天翻滚而下。这时,整个世界变成白茫茫的一片,美不胜收。

快乐的节日

这幅画充满了童趣——雪后的山林里，一只可爱的小动物头戴蓝色的尖顶帽，载歌载舞，呼朋引伴，欢度节日。旁边的大礼盒，为节日增添了喜庆的气氛。

小水母的救命“听石”

在浅海区，小水母、寄居蟹、海星、海胆在一起玩耍。突然，小水母惊叫起来：“不好，风暴潮要来啦!”大家一听，哈哈大笑：“瞎说，风平浪静的，哪来的风暴潮？”

意外的惊喜

今天是我的生日,一大早我兴冲冲地起床,可爸爸妈妈该做什么做什么,像压根不知道什么事情一样。我不好意思对他们说今天是我的生日,快准备礼物。我垂头丧气地上学,又垂头丧气地回家。我推开房门,见客厅中央放着一个大大的盒子。盒子上面写着:'宝贝,生日快乐。'我迫不及待地打开盒子。里面放着一套《大中华寻宝记》。原来是我误会妈妈了。