基于DNA条形码对凉山虫草及近缘物种和其混伪品的分子鉴定

目的:结合ITS基因和COI基因对《四川省中药材标准》收录的凉山虫草和近缘物种及当地市场上出现的混伪品进行分子鉴定,考察其方法的可行性。方法:对收集的28份样品通过DNA提取、PCR扩增,分别获得其ITS序列和COI序列。用Codon Code Aligner V3.7.1,Mega 5.0等软件进行比对分析,构建基于ITS序列和COI序列的样品的NJ树,进行聚类分析。结果:凉山虫草和近缘物种及混伪品寄生真菌的ITS序列种间最小K-2P距离大于各物种种内最大K-2P距离:种内变异小,种间差异较大,从而基于ITS序列的NJ树能将凉山虫草与其他近缘物种及其混伪品很好地归属;凉山虫草和近缘物种及其混伪品寄主昆虫的COI序列种间最小K-2P距离大于各物种种内最大K-2P距离:种内变异小,种间差异较大,通过遗传距离及NJ树的分析能将凉山虫草与其他近缘物种其及其混伪品及其他近缘物种很好地区分。结论:结合ITS序列和COI序列的DNA条形码技术可以很好地鉴定凉山虫草与其近缘物种及其混伪品,并对虫草属的系统学和分类研究提供了技术支持。

线粒体COI和CYTB基因在虫草属物种寄主昆虫鉴定中的适用性分析

目的:利用DNA条形码技术对冬虫夏草、凉山虫草、亚香棒虫草、戴氏虫草等物种的寄主昆虫分别通过COI序列和Cytb序列进行条形码分析,探索虫草属物种寄主昆虫鉴定序列的适用性。方法:通过DNA提取、PCR、电泳检测和序列测定,分别获得26份虫草寄主虫体的COI序列和Cytb序列,再用拼接和分析软件进行序列的比对和聚类分析。结果:COI序列和Cytb序列都能很好地区分鉴定虫草类各物种,但COI序列的扩增成功率大于Cytb基因,同时在COI基因片段中共检测到129个多态位点,变异率为19.51%;在Cytb基因片段中共检测到113个多态位点,变异率为26.10%。COI序列的简约信息点多于Cytb序列,且基因变异率低于后者。结论:本研究建议COI序列更适用于虫草寄主昆虫的DNA条形码研究。

《药物化学实验》教学改革中的思考

《药物化学实验》是与药物化学理论课配套的专业实验课,它不仅是理论应用于实践的教学训练,又是培养学生药学专业意识和能力的重要途径。药物化学实验将药学知识和化学知识有机结合起来,训练学生药物化学实验基本技能和基本素质,提高分析问题和解决问题的能力。本文针对实验教学中存在的问题,对实验教学改革提出自己的看法。1双语教学以理论课先行为基础双语教学是深化我国高等教育改革、

一测多评法测定不同种植金线莲中5种黄酮成分含量

目的建立一测多评法同时测定金线莲中5种黄酮类成分芦丁、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素的含量。方法采用超高效液相色谱法(UPLC),Uitimate?UPLC AQ C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);0.1%甲酸乙腈(A)-0.3%甲酸水(B)为流动相,梯度洗脱;流速0.3 mL/min,检测波长368 nm,进样量5μL,柱温38℃。以水仙苷为内参物,建立与其他4种成分的相对校正因子,并利用该校正因子计算36批种植金线莲样品其他4种黄酮类成分的含量。同时采用外标法,验证一测多评法的可行性和准确性,并应用于不同种植金线莲的含量测定。结果水仙苷与芦丁、槲皮素、山柰酚、异鼠李素在线性范围内,相对校正因子分别为1.016、0.4650、0.4228和0.4539,4种成分的计算值与实测值无显著性差异,4种不同种植品金线莲的含量存在差异。结论建立的一测多评法可作为种植金线莲中5个黄酮类化学成分的含量测定方法,为种植金线莲的质量评价提供新的技术手段。

闽产玳玳果中有机酸的鉴别及含量比较分析

目的分析比较闽产玳玳果中有机酸种类及不同生长季节玳玳果中有机酸含量。方法运用Agilent C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以磷酸盐缓冲液[0.01 mol.L-1(NH4)2HPO4,磷酸调pH 2.2]-甲醇(98∶2)为流动相,流速为1.0 ml/min,检测波长为210 nm。结果玳玳果中主要含有柠檬酸、L-苹果酸、酒石酸、草酸等有机酸,其中柠檬酸含量最高;玳玳果中有机酸的含量随生长成熟期的变化而表现出差异。结论首次明确了玳玳果中主要有机酸的种类,建立了反相高效液相色谱法同时测定玳玳果中主要有机酸含量的方法,比较了不同生长季节玳玳果主要有机酸含量变化,为玳玳果药用价值的深入开发研究提供了实验基础。

不同产地薏苡仁的鉴别及含量测定

为评价及控制薏苡仁的药材质量,通过薄层色谱法鉴别比较不同产地的薏苡仁,测定代表性产地薏苡仁中甘油三油酸酯含量,为薏苡仁的质量控制提供实验依据。1仪器与试药1.1仪器Waters2695高效液相色谱仪（沃特世科技有限公司）;Alltech-2000ES蒸发光散射检测器（ELSD,Alltech公司）;AR2140万分之一电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）;

永泰芙蓉李中有机酸的分析

目的:分析鉴别永泰芙蓉李的有机酸成分,建立芙蓉李主要有机酸的含量测定方法。方法:采用Agilent C18色谱柱,以磷酸盐缓冲液-甲醇(94:6)为流动相,检测波长为210nm。结果:永泰芙蓉李含草酸、酒石酸、苹果酸等有机酸成分,建立的芙蓉李主要有机酸含量测定方法可在15分钟内完成草酸、酒石酸、苹果酸的有效分离,分离度R≥1.2,苹果酸在0.50～8.08mg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.9999);酒石酸在0.05～0.5mg/ml范围内呈良好的线性关系(r=0.9999)。结论:该法分析速度快、线性范围宽、重复性好,适用于芙蓉李中有机酸的定性定量分析。

金线莲转录组测序及其黄酮类合成相关基因分析

首次采用RNA-seq高通量测序技术对不同种植时期的金线莲进行转录组测序,并通过Q-PCR和HPLC对其结果进行验证和分析。转录组测序共获得金线莲51 370条基因,并注释到Nr、GO、Swiss-Prot、KEGG和KOG数据库,根据同源序列比对,与油棕和海枣的同源性最高。通过比较不同生长时间的金线莲转录组,分析其差异基因主要集中在黄酮类生物合成相关基因,运用Q-PCR对6个黄酮类生物合成相关基因(反式肉桂酸4-单加氧酶、咖啡酰辅酶A O-甲基转移酶、查尔酮合成酶、黄酮醇合成酶、莽草酸O-羟基肉桂酰转移酶、黄酮类3',5'-羟化酶)表达量进行验证;并结合HPLC对相应的金线莲样品中6种主要黄酮类成分(芦丁、异槲皮苷、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素)进行含量测定。结果表明6种主要黄酮类成分含量随着金线莲黄酮类合成基因的表达量的升高而增加,并结合转录组数据,绘制出金线莲中黄酮类成分的生物合成途径。此研究为金线莲黄酮合成关键基因及黄酮类成分生物合成提供重要的遗传信息,同时为其药用价值开发提供依据。

福建野生金线莲种质资源的遗传多样性分析

目的采用分子标记技术对福建省野生金线莲种质资源进行遗传多样性分析,探讨不同地理组群间金线莲的遗传特性。方法通过DNA提取、PCR扩增及引物多态性检测法筛选金线莲转录组数据中特异性SSR引物,并根据聚类结果分析福建省不同地理组群金线莲的遗传多样性。结果基于金线莲的转录组数据筛选出44对特异性SSR引物,聚类分析表明,不同地理组群间遗传相似系数变幅为0.29~0.90,在0.65处可将福建省不同地域野生金线莲分为四大类群,不同地理组群间的金线莲存在遗传分化。结论该研究通过SSR分子标记技术证明了福建省不同地域的野生金线莲种质资源存在遗传分化,构建了不同地区野生资源的指纹图谱,可为金线莲的野生资源保育以及生药鉴别等提供基础依据。

金线莲多糖的提取优化与纯化

目的以响应面法优化超声提取金线莲多糖的工艺,同时,对多糖纯化中除蛋白方法进行考察。方法以多糖提取率为检测指标,在单因素考察的基础上采用Box-Behnken实验设计及响应面法对料液比、超声时间、超声提取温度3个因素进行优化;以多糖保留率和蛋白脱除率对Sevage试剂法、TCA法、盐法(NaOH-CaCl2法和NaOH-NaCl法)、盐酸法5种脱蛋白方法进行考察。结果金线莲多糖最佳提取工艺为:料液比1∶10,超声提取温度48℃,超声提取时间36 min,超声提取次数2次,超声功率为300 W,该条件下金线莲多糖提取率达到了13.13%;同时以NaOH-CaCl2法脱蛋白,多糖损失率为18.74%,蛋白脱除率为95.62%。结论超声提取操作简单,优化后提取方法能够取得较高提取率,NaOH-CaCl2法脱蛋白能够获得较高蛋白脱除率及多糖保留率,该方法适用于金线莲多糖活性成分的开发研究。

金线莲中六种黄酮成分的含量测定及其主成分、聚类分析

建立HPLC同时测定金线莲中6种黄酮类成分芦丁、异槲皮苷、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素含量的方法,并对不同栽培方式的金线莲中6种成分的含量进行主成分分析和聚类分析。30批金线莲样品主成分分析中,前3个主成分累积方差贡献率为86. 95%;系统聚类分析,当10<阈值<25时,可聚为2类。建立的方法操作简便,结果准确可靠,可用于金线莲中芦丁、异槲皮苷、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素含量的同时测定,可为不同种植方式金线莲药材的区分提供科学依据。

金线莲总黄酮的最佳超声提取工艺

目的优化金线莲总黄酮的超声提取工艺。方法用紫外-可见分光光度比色法测定黄酮含量,用L9(34)正交试验,考察乙醇浓度、料液比、提取时间、提取次数对金线莲总黄酮含量测定的影响。结果最优的提取工艺为40倍量的95%乙醇超声提取3次,每次40 min,金线莲的总黄酮提取率为2.06%。结论乙醇浓度对总黄酮的提取率有显著影响,经优化的提取工艺,操作简单,提取效率较高,方法稳定、可行。

HPLC法测定龙须藤乙酸乙酯部位中4种黄酮类成分的含量

目的:建立HPLC测定龙须藤乙酸乙酯部位中3',4',5',5,7-五甲氧基黄酮、杨梅素、槲皮素和山奈酚含量的方法,考察不同产地龙须藤中4种黄酮类成分的含量。方法:Diamonsil C18色谱柱(250×4.6 mm,5μm),流动相乙腈(A)-0.1%的磷酸(B),梯度洗脱(0 min,25%A,75%B;15 min,45%A,55%B;40 min,50%A,50%B),流速为0.8 m L/min,检测波长为324 nm。结果:3',4',5',5,7-五甲氧基黄酮、杨梅素、槲皮素和山奈酚进样量10μL分别在0.5100~5.100μg(r=0.9962)、0.1006~50.30μg(r=0.9998)、1.440~288.0μg(r=0.9997)和0.2910~14.55μg(r=0.9998)以上浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系,平均回收率分别为99.48%、99.32%、98.99%和98.75%,RSD分别为0.40%、0.62%、0.50%和0.44%(n=6)。结论:该方法操作简单,稳定性、精密度、重复性良好,适合于测定该药材中3',4',5',5,7-五甲氧基黄酮、杨梅素、槲皮素和山奈酚含量的测定。

对彝族动物药发展的认识

彝族地区具有丰富的动物药资源,彝医并以其特殊的用药方式在民族医学当中脱颖而出,已形成颇具民族特色的动物药用药经验及医疗范畴。但由于受到历史、民族文化、临床实践等方面的制约,彝族动物药一直未有较大的发展。对于具有潜在科研价值的彝族动物药,从其用药特点、古今文献书籍所收载动物药情况、目前彝族动物药存在的问题等几方面进行论述。

淫羊藿的化学成分及质量控制研究进展

淫羊藿在我国具有悠久的药用历史,亦是苗族习用药材,淫羊藿属植物中含有黄酮、木脂素、苯酚苷、生物碱、多糖等多种化学成分,在广泛的文献检索基础上,以国内7种药用淫羊藿为对象,对淫羊藿中所含化学成分进行了较全面的分类汇总,并对其品种鉴别和质量控制方面的研究进展进行了综述,以期为淫羊藿药材进一步的开发利用提供参考。

HPLC法同时测定金线莲中12个核苷类成分的含量

目的:建立金线莲中12个核苷类成分(胞嘧啶、尿嘧啶、胞苷、鸟嘌呤、尿苷、腺嘌呤、肌苷、鸟苷、2′-脱氧鸟苷、β-胸苷、腺苷和2′-脱氧腺苷)含量的HPLC测定方法,并采用聚类分析法比较不同来源金线莲核苷类成分组成和含量差异。方法:采用Uitimate?XB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长260 nm,柱温30℃,进样量10μL。采用聚类分析法评价不同批次金线莲中核苷类成分的化学模式。结果:12个核苷类成分质量浓度分别在考察的线性范围内与峰面积呈良好的线性关系(r>0.999 4);建立的方法精密度、重复性和稳定性良好;加样回收率为95.0%~114.6%(RSD≤4.8%)。对52批金线莲样品中12个核苷类成分进行测定,其含量较高的主要为腺苷、尿苷、鸟苷、胞苷(均值大于300μg·g^-1),聚类分析发现不同来源金线莲核苷成分具有4类化学表型,含量之间存在差异。结论:建立的金线莲中12个核苷类成分的含量测定方法准确、可靠,可以为金线莲核苷类多指标质量控制体系提供新的技术手段。

RRLC-DAD-ESI-MS^2分析天平山淫羊藿中的11个化学成分

目的:分析鉴定天平山淫羊藿叶片部位的化学成分。方法:采用高分离度快速液相色谱-离子阱质谱联用法。选用Agilent Proshell 120 C18色谱柱(2.1 mm!100 mm,2.7μm),以0.1%甲酸水-乙腈为流动相,梯度洗脱(0~10 min,10%B→22%B;10~30 min,22%B→27%B;30~35 min,27%B→42%B;35~40 min,42%B→45%B;40~55 min,45%B→75%B),流速0.4 mL·min-1,柱温25℃,270 nm、正离子模式检测。结果:从天平山淫羊藿叶片部位鉴定出11个化合物,木兰花碱(magnoflorine)、朝藿定A1(hexandraside F)、朝藿定B(epimedin B)、朝藿定C(epimedin C)、宝藿苷Ⅵ(baohuosideⅥ)、淫羊藿苷(icariin)、淫羊藿素-3-O-α-鼠李糖苷(icaritin-3-O-α-rhamnoside)、箭藿苷A(sagittatoside A)、箭藿苷B(sagittatoside B)、鼠李糖淫羊藿次苷(2"-O-rhamnosylicarisideⅡ)、宝藿苷Ⅰ(baohuosideⅠ),其中10个黄酮苷类成分和1个生物碱类成分。结论:RRLC-MS2能快速地鉴定出天平山淫羊藿中的化学成分,为进一步阐明该品种物质基础,提高其质量控制水平,提供了实验基础。

苗族医药理论及发展现状概述

苗医药及其文化源远流长,积累了丰富的预防和治疗疾病的经验,并逐渐形成了一套具有地域性和鲜明民族文化特色的疗效独到的医药理论,如生成学理论、经纲症疾理论、三界学说、交环理论、四大筋脉学说等。进入新世纪以来,苗医苗药从一方一药、一技一法,口耳相传、流散民间的口碑资料发展出了具有自身特色的苗医药理论,结合现代科学研究技术,苗医苗药的发展取得了质的飞越。然而苗族自古没有文字传承、医术验方后继乏人、苗药标准不完善等因素依然制约着苗医药的后续发展。通过文献调研的方式,对现有苗族医药理论进行归纳和总结,并结合当前苗医药的发展形势,对影响苗医药发展的因素进行了探讨,以期为苗医药的研究提供参考。

花叶开唇兰与台湾银线兰的SSR标记技术鉴别

目的利用SSR分子标记技术建立金线莲基原植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii及其常见混淆品台湾银线兰A.formosanus的鉴别依据。方法根据花叶开唇兰转录组数据进行分析筛选SSR引物,通过DNA提取、PCR扩增以及引物多态性筛选等方法鉴别花叶开唇兰及台湾银线兰,从而鉴定药用金线莲真伪。结果基于花叶开唇兰转录组数据筛选出SSR多态性引物13对,UPGMA聚类法显示两者遗传相似系数变幅为0.38~1.00,在遗传相似系数0.38处,可将其完全分开。结论该研究构建了花叶开唇兰与台湾银线兰的分子标记鉴定体系和指纹图谱,为金线莲的商品鉴别及质量控制提供科学依据。