稳定表达乙型脑炎病毒NS1蛋白细胞系的建立

为建立稳定表达乙型脑炎病毒(JEV)NS1蛋白的真核细胞系,本研究将编码JEV NS1蛋白的人工合成基因克隆到真核表达载体pCAGG-TK-neo中,构建了重组质粒pCAGG-opti-NS1。重组质粒经脂质体转染RK-13细胞,以含G418的选择性培养基选择培养,经细胞克隆纯化,以间接免疫荧光试验(IFA)筛选表达目的基因的细胞。结果表明,转染的RK-13细胞经G418加压及IFA筛选后,获得表达JEV NS1蛋白的阳性RK-13细胞系。经RT-PCR、western blot和IFA鉴定,该细胞系在传代至第15代后仍然可以稳定表达NS1蛋白。本实验获得了能够稳定表达JEV NS1蛋白的细胞系,为进一步开展JEV相关的研究奠定了基础。

自制有机碘栓对獭兔子宫内膜炎治疗研究

研究自制有机碘栓对獭兔子宫内膜炎治疗效果。通过子宫灌注致病性大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、沙门氏菌、蜡状芽孢杆菌等混合菌液,复制獭兔子宫内膜炎病理模型。分别于1天,3天,5天按0.01g/kg体重(按有效碘计算)子宫投放有机碘栓进行治疗,观察其用药前后的临床症状、子宫形态、子宫内膜病理学变化,并测定血清SOD,MDA,GSH-Px等生化指标。投药后第4天阴门肿胀及阴道充血逐渐消退,子宫分泌物逐渐减少;子宫颈和子宫角轻微肿胀,宫腔内有少量透明分泌物;子宫内膜较完整,上皮细胞结构基本正常。治疗组在第4天血清SOD和GSH-Px活力均高于病理对照组,差异显著(P<0.05);第6天血清SOD活力高于病理对照组,差异显著(P<0.05),而血清GSH-Px活力高于病理对照组,差异极显著(P<0.01),血清MDA含量低于病理对照组,差异极显著(P<0.01)。有机碘栓可有效治疗獭兔子宫内膜炎。

家兔子宫内膜炎治疗试验

通过子宫灌注致病性混合菌液,复制獭兔子宫内膜炎病理模型。分别于第1、3、5d按0.01g/kg体重(按有效碘计算)子宫投放有机碘栓进行治疗,观察其用药前后的临床症状和病理变化,并测定血清SOD,MDA,GSH-Px等。投药后第4d阴门肿胀及阴道充血逐渐消退,子宫分泌物逐渐减少,上皮细胞结构基本恢复正常。治疗组在第4d血清SOD和GSH-Px活力均显著增高(P<0.05);第6d血清MDA含量极显著降低(P<0.01),而血清GSH-Px活力极显著增高(P<0.01)。表明有机碘栓可有效治疗獭兔子宫内膜炎。

流行性乙型脑炎prM蛋白剪切位点突变的prM-E蛋白表达细胞系的建立

为建立稳定共表达乙型脑炎病毒(JEV)完整M前体蛋白(prM)和E蛋白的BHK-21细胞系,本研究在prM蛋白furin蛋白酶剪切位点编码基因中引入突变,将突变后的prM基因克隆于质粒中构建重组表达质粒pCAG-JEV-prM(R89A)E。将重组质粒转染BHK-21细胞,转染48 h后细胞用含G418的选择性培养基选择培养,进一步经细胞克隆纯化制备表达剪切位点突变的JEV prM-E蛋白的稳定细胞系。经IFA和western blot鉴定表明,该细胞系能表达JEV prM与E蛋白,所表达的prM蛋白未发生剪切;细胞经多次传代后仍能够稳定地共表达prM与E蛋白。该细胞系的建立为研究prM蛋白剪切对JEV粒子形成的影响以及亚单位疫苗的制备奠定了基础。

保定市某猪场乙型脑炎减毒活疫苗免疫效果评价

为了评价猪乙型脑炎减毒活疫苗的免疫效果,试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清抗体,选择长白×大白二元杂交种母猪40头,分别于接种猪日本乙型脑炎灭活疫苗的第0,15,45天耳静脉采血,分离血清。结果表明:免疫前猪乙型脑炎血清抗体阳性率为35.0%(14/40),免疫后第15,45天猪乙型脑炎血清抗体阳性率为85.0%(34/40)、80.0%(32/40)。说明猪乙型脑炎减毒活疫苗具有较好的免疫效果。

三种栓剂治疗奶牛子宫内膜炎的疗效比较

为了比较中药栓、复方碘栓、生物栓对奶牛子宫内膜炎的治疗效果,对30头患子宫内膜炎的奶牛分别子宫投放3种栓剂,观察用药前后的临床症状,并于第0,2,4,6,8天测定血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)含量。结果表明:给药后患病奶牛阴门分泌物明显减少。第6天复方碘栓治疗组血清SOD活力极显著升高(P<0.01),GSH-Px活力显著升高(P<0.05),MDA含量极显著降低(P<0.01)。第8天生物栓治疗组血清SOD活力显著升高(P<0.05),GSH-Px活力极显著升高(P<0.01),MDA含量极显著降低(P<0.01);而中药栓治疗组血清GSH-Px活力显著升高(P<0.05),MDA含量极显著降低(P<0.01)。

乙型脑炎病毒NS1蛋白的可溶性表达与抗原性分析

为获得可溶性表达的乙型脑炎病毒(JEV)NS1蛋白,将编码JEV SA14-14-2株NS1蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-c5X中,构建重组融合表达质粒pc5X-NS1;用重组质粒转化宿主菌ER2523后,经IPTG诱导得到可溶性的融合蛋白MBP-NS1;优化诱导表达条件,于28℃、0.3 mmol/L IPTG诱导4 h;最后融合蛋白经直链淀粉树脂柱纯化。结果表明:重组融合蛋白MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性。