miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况;生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制;将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组,采用Western blotting检测CREB1的表达变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响,采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低(P<0.05),而CREB1的表达则逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB13′UTR表达载体的荧光素酶活性,CREB1是miR-26b-3p下游靶基因。抑制miR-26b-3p表达可上调CERB1的表达,进而抑制细胞凋亡,促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。过表达miR-26b-3p可下调CERB1的表达,促进细胞凋亡,抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭(P<0.05)。结论miR-26b-3p可靶向调控CREB1的表达调节胶质瘤细胞的凋亡、增殖、迁移和侵袭,进而参与胶质瘤的发生发展。

G蛋白偶联受体30在大鼠蛛网膜下腔出血后对神经炎症和血脑屏障破坏的影响

目的探讨G蛋白偶联受体30(GPR30)在大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)早期脑损伤(EBI)过程中对神经炎症和血脑屏障(BBB)破坏的影响。方法36只雄性大鼠随机分为6组(n=6/组):假手术(Sham)组,SAH(3 h、6 h、12 h、24 h、72 h)组。此外,72只大鼠随机分为4组(n=18/组):Sham组、SAH组、SAH联合过表达GPR30慢病毒阴性载体(SAH+Lv-NC)组、SAH联合过表达GPR30慢病毒载体(SAH+Lv-GPR30)组。通过血管内穿孔建立SAH模型,于SHA大鼠脑室内注射Lv-GPR30。通过神经学评分、脑组织含水量(BWC)检测、伊文思蓝(EBP)染色、苏木精和伊红(HE)染色来分析GPR30对EBI的影响;采用蛋白质印迹法(Western blotting)和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析各种蛋白质和转录水平;通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别测定肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)水平。结果SAH大鼠脑内注射Lv-GPR30后脑组织中GPR30的表达增加,并改善了大鼠神经功能、神经炎症、BBB破坏和脑水肿程度。过表达GPR30抑制SAH大鼠脑组织中基质金属蛋白肽酶9(MMP-9)和基质金属蛋白肽酶2(MMP-2)的表达,以及炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β表达水平,同时提高IL-10的表达水平。结论GPR30能减轻SAH大鼠的神经炎症和BBB破坏。

颅内微创血肿清除术与传统开颅清除血肿手术在高血压脑出血中的应用效果分析

目的:分析对比微创血肿清除术与传统开颅清除血肿手术治疗高血压脑出血的疗效及安全性。方法:选择2013年1月至2015年1月期间于我院行外科手术治疗的高血压脑出血患者80例,根据手术方案将其分为研究组(行微创血肿清除手术治疗)40例及对照组(行传统开颅清除血肿手术治疗)40例。观察对比两组患者的临床疗效、颅内压力(ICP)、神经功能缺损评分(FAM)及术后并发症情况。结果:研究组治疗的优良率为77.50%,显著高于对照组的57.50%(P<0.05);FAM评分显著高于对照组(P<0.05);两组ICP对比差异无统计学意义(P>0.05);研究组术后并发症发生率为15.00%,显著低于对照组的37.50%(P<0.05)。结论:相较于传统开颅血肿清除术,微创血肿清除术治疗高血压脑出血的疗效更佳,可以有效降低颅内压,提高神经功能恢复状态,安全可靠,适于临床推广与应用。

MiR-26b通过下调COX-2表达抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移

目的:观察不同级别神经胶质瘤中miR-26b和环氧化酶(COX)-2的表达情况,研究miR-26b对于神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:运用Western印迹和实时定量荧光PCR(q RT-PCR)检测不同级别神经胶质瘤中miR-26b和COX-2的表达情况;使用miR-26b mimic转染人神经胶质瘤细胞U87,上调miR-26b的表达;q RT-PCR检测miR-26b mimic转染后miR-26b和COX-2 mRNA的表达变化情况;双荧光素酶报告基因系统检测miR-26b对COX-2转录活性的影响;使用Transwell侵袭实验检测miR-26b对人神经胶质瘤细胞U87侵袭能力的影响;使用划痕实验检测miR-26b对人神经胶质瘤细胞U87迁移能力的影响;使用CCK-8(cell counting kit-8)检测miR-26对人神经胶质瘤细胞U87增殖能力的影响;裸鼠体内成瘤实验检测过表达miR-26b后胶质瘤细胞成瘤能力的变化。结果:随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加,miR-26b表达明显降低(P<0.05),而COX-2明显增加,差异有统计学意义(P<0.001);双荧光素酶实验证实miR-26b可以直接靶向调控COX-2的蛋白表达水平;使用miR-26b mimic明显上调miR-26b的表达(P<0.05);上调miR-26b可以显著降低COX-2的表达(P<0.05);上调miR-26b可以抑制神经胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05)。实验组和对照组相比肿瘤的质量和体积都变小。结论:随着神经胶质瘤肿瘤级别的增加,miR-26b表达逐渐降低,而COX-2表达逐渐增加。miR-26b可通过抑制COX-2表达从而抑制神经胶质瘤的增殖、侵袭和迁移。

血清炎性因子在颅内血肿清除术前后的变化及其临床意义

目的探讨血清新型脂肪酸结合蛋白(h-FABP)、神经元特异烯醇化酶(NSE)、脑组织特异蛋白S-100B三种炎性因子在颅内血肿清除术前后的变化及其临床意义,为临床决策提供依据。方法连续纳入于2012年6月至2014年6月在我院接受颅内血肿清除术的患者120例。按照随访3个月后的ADL评分与手术前评分的差值(D-value)分为治疗有效组78例(D-value>20分)和治疗无效组42例(D-value≤20分)。通过分析两组患者手术前和手术1周后的血清h-FABP、NSE、S-100B水平,分析手术1周后血清h-FABP、NSE、S-100B水平与手术疗效、ADL评分的关系,评价血清h-FABP、NSE、S-100B因子对手术疗效、预后的预测作用。结果手术前和手术后1周,有效组患者血清h-FABP、NSE、S-100B水平明显低于无效组,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。手术后1周,有效组上述血清指标较手术前明显降低(P<0.05),而无效组上述血清指标较手术前无明显变化(P>0.05)。Logistic回归分析结果显示,手术后1周,三种血清炎性因子水平均与手术疗效有关(P<0.05)。线性回归分析结果显示,手术后1周,三种血清炎性因子水平均与手术后三个月ADL分数有关(P<0.05)。结论血清h-FABP、NSE、S-100B水平在颅内血肿清除术后患者中呈不同程度的降低,且其降低幅度对手术疗效与预后具有一定的预测作用,并指导治疗方案的制定。

人GLUT3基因RNA干扰病毒载体的构建与鉴定

目的：筛选出人GLUT3基因有效的RNA干扰（RNA interference,RNAi）序列,并构建出慢病毒RNAi载体。方法：根据GLUT3基因mRNA序列设计合成siRNA片段4个,分别定向克隆至pLV-shRNA载体上,并将构建的质粒转染HeLa细胞,运用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRT-PCR）检测GLUT3mRNA的表达量验证其干扰效果。筛选出其中有效的质粒与病毒包装质粒共转染293T细胞进行包装,收获并浓缩重组慢病毒颗粒,测定病毒颗粒滴度后,将病毒感染U251胶质瘤细胞以测定感染慢病毒干扰载体后胶质瘤细胞内GLUT3的表达情况。结果：重组RNAi质粒pLV-shRNA-GLUT3-1,pLV-shRNA-GLUT3-2,pLV-shRNA-GLUT3-3,pLV-shRNA-GLUT3-4经测序证实质粒载体构建成功;4个干扰质粒在HeLa细胞中均可以明显抑制GLUT3-mRNA的表达。pLV-shRNA-GLUT3可以在293T细胞中成功包装。收集293T细胞分泌的病毒上清浓缩后测定病毒颗粒LV-GLUT3滴度为1.5×10^9TU/mL。与感染阴性对照慢病毒颗粒（0.3641±0.044）相比,胶质瘤U251细胞感染慢病毒颗粒LV-GLUT3后,GLUT3蛋白相对表达明显降低（0.108±0.016,t=16.267,P〈0.001）。结论：成功构建了人GLUT3基因有效的慢病毒RNAi载体,为进一步研究GLUT3的生物学功能奠定了基础。

双氢青蒿素与雷公藤甲素对神经胶质瘤细胞的抑制作用

目的探讨两种天然药物双氢青蒿素(DHA)与雷公藤甲素(TP)单独及联合用药对神经胶质瘤细胞体外抑制和体内治疗的作用。方法 CCK-8法检测DHA与TP单独及联合用药对神经胶质瘤细胞活性的抑制作用。Hochest 33258染色观察给药后细胞核的形态变化,采用Rhodamine123和PI染色技术在流式细胞仪下分别检测细胞线粒体膜电位和细胞周期的情况。建立神经胶质瘤小鼠移植瘤模型,给药后分别监测小鼠体质量以及肿瘤体积大小并作统计学分析。苏木精-伊红(H-E)染色主要脏器的病理切片,观察药物的在体毒性。结果 12μg/m L的DHA与TP单独及联合用药处理神经胶质瘤C6和U87细胞48 h可明显抑制细胞的活性,抑制率分别达到85%和80%。DHA与TP单独及联合用药组分别都引起细胞核固缩,细胞线粒体膜电位下降明显,联合用药组的细胞线粒体膜电位的下降明显高于单独用药组(P<0.01)。DHA与TP联合处理细胞主要使细胞周期阻滞在Sub-G1和G2/M期。在体实验结果显示:相比于对照组和单独给药组,联合用药组更能够有效抑制肿瘤的生长(P<0.01)。病理切片H-E染色发现联合用药几乎没有在体毒性。结论DHA与TP联合用药对神经胶质瘤细胞具有显著的协同抑制效果,并且在体治疗效果也非常显著,为临床使用天然药物治疗神经胶质瘤提供一个新的方法和思路。

中央区巨大脑膜瘤的显微手术治疗

目的探讨中央区巨大脑膜瘤的围手术期管理及手术注意事项。方法回顾性分析2008年1月至2016年1月收治的18例中央沟区巨大脑膜瘤的临床资料,总结手术治疗经验。结果18例中,Simpson分级I级切除13例,Ⅱ级切除3例,Ⅲ级切除2例。术后出现肢体肌力下降8例,癫痫发作6例,脑水肿加重行去骨瓣减压术1例。术后随访1年,肢体肌力恢复正常16例,下肢肌力Ⅳ级1例,长期昏迷1例;无癫痫发作病例。术后3年复发1例,术后5年复发1例。结论对于中央区巨大脑膜瘤,术前需仔细评估,充分了解肿瘤的血供、性质、静脉引流情况,必要时行DSA检查及栓塞部分供血动脉;术中通过合适的暴露范围,留置腰大池引流管引流脑脊液,减少脑组织牵拉,分块切除肿瘤,保护引流静脉,争取全切肿瘤;术后合理地预防癫痫,维持血压稳定,尽早进行康复治疗,减少并发症,提高治疗效果。

颅脑穿透伤的诊治分析(附5例报道并文献复习)

目的总结颅脑穿透伤的诊治经验。方法回顾性分析2016年1月以来成功救治的5例颅脑穿透伤的临床资料,并结合文献进行分析。结果5例均获得良好预后,ADL评分95分以上,未出现颅内感染、出血、癫痫等并发症。结论正确认识异物及其进入颅内的途径,巧妙地设计手术入路,利用非功能区彻底地清创,运用颅底重建技术,联合、足量应用抗生素预防感染是成功救治颅脑穿透伤的关键。

线粒体靶向抗氧化剂SS31对大鼠蛛网膜下腔出血后早期脑损伤的保护作用

目的:探讨SS31对蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后早期脑损伤(early brain injury,EBI)的保护作用。方法:将96只大鼠随机分为假手术组(Sham)、SAH组、SAH+vehicle组(SAH+V)、SAH+SS31组。建立大鼠视交叉池SAH模型,术后2 h经腹腔注射SS31(5 mg/kg)或等体积的溶剂。在SAH后24 h,分析不同组间大鼠神经功能评分、脑水肿、伊文思蓝的渗出、细胞凋亡、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)、细胞色素(cytochrome c,Cyt C)及Bax表达水平的差异。结果:与SAH+V组比较,SS31治疗能显著降低SAH后大鼠脑组织中MDA水平,提高GPx和SOD活性,上调线粒体Cyt C表达水平,降低Bax表达水平,脑水肿和伊文思蓝的渗出减轻,改善大鼠神经功能缺损,减少神经元凋亡。结论:SS31可减轻SAH后EBI,其机制可能与抗氧化应激和抑制神经元凋亡有关。

脑静脉、静脉窦血栓形成的影像特征分析

目的总结脑静脉、静脉窦血栓形成(CVST)的影像学特征。方法回顾性分析52例CVST的临床资料,分析其影像学特征。结果52例中,CT+CTV检查3例,CT+MRI+MRV检查16例,MRI+MRV检查30例,CT+DSA检查3例。头颅CT平扫可见高密度三角征5例、高密度点征9例、条带征或条索征4例,MRI平扫可见颅内静脉系统血栓信号18例,3例DSA检查可见静脉循环时间延长、颅内静脉系统充盈缺损或不显影。治疗后,42例临床症状逐渐缓解,7例无改善,3例死亡;影像学复查示颅内静脉系统完全再通6例,不同程度再通43例。结论影像学检查可发现CVST的直接特征及继发的脑实质损害,有助于早期诊断。

3D-Slicer联合智能手机辅助定位下神经内镜血肿清除术对基底节区脑出血患者的应用价值研究

目的探讨3D-Slicer联合智能手机辅助定位下神经内镜血肿清除术对基底节区脑出血的应用价值。方法选择2019年9月至2020年12月接诊的82例基底节区脑出血患者为研究对象。以随机数字表法分为对照组(行小骨窗开颅脑内血肿清除术) 41例和观察组(行3D-Slicer联合智能手机辅助定位下神经内镜血肿清除术)41例,比较两组患者手术一般情况、血肿清除率、氧化应激指标、脑损伤相关指标水平、预后及并发症发生情况。结果两组患者性别、年龄、血肿量、发病至手术时间、GCS评分、糖尿病发生率、高脂血症发生率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。两组患者术中出血量、术后住院时间比较(均P>0.05),观察组手术时间较对照组更长(P<0.05)。观察组在术后1 d及3 d血肿清除率均高于对照组(均P<0.05)。术后1周两组MDA水平均低于术前,且观察组低于对照组;术后1周两组SOD、GSH-px水平均高于术前,且观察组均高于对照组(均P<0.05)。术后1周两组S-100β、NSE及GFAP水平均低于术前,且观察组均低于对照组(均P<0.05)。观察组术后6个月预后良好率(5.37%)高于对照组(65.85%)(P<0.05)。对照组出现并发症4例(9.76%),观察组出现并发症3例(7.32%),两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 3D-Slicer联合智能手机辅助定位下神经内镜血肿清除术与小骨窗开颅脑内血肿清除术比较,可提高基底节区脑出血患者血肿清除率、缓解氧化应激反应、降低脑损伤相关指标水平并改善预后。