高效逆流色谱法从白益母草中分离制备4个抗氧化活性成分

目的:建立高效逆流色谱法(HPCCC)从白益母草中分离制备4个抗氧化成分。方法:白益母草95%乙醇水提取物经D101大孔树脂柱色谱,先用水和45%乙醇水各1000 mL洗脱,然后用70%乙醇水(5000 mL)洗脱。70%乙醇水洗脱液减压回收至干,用HPCCC法以正己烷-正丁醇-水-冰醋酸(1∶2∶1∶0.1)为两相溶剂系统,在主机转速1000 r·min^(–1),检测波长261 nm条件下进行分离制备,得到化合物1~4,经谱学数据分析,确定其结构式。同时,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)法测定化合物1~4的抗氧化活性。结果:从白益母草70%乙醇水洗脱液中分离得到4个化合物,分别为5,7,4′-三羟基黄酮-7-O-(6′′-O-反式-咖啡酰基)-β-葡萄糖苷(1)、5,7,4′-三羟基黄酮-7-O-(2′′,6′′-O-反式-二香豆酰基)-β-葡萄糖苷(2)、5,7,4′-三羟基黄酮-7-O-(6′′-O-反式-香豆酰基)-葡萄糖苷(3)和毛蕊花苷(4)。化合物1~4表现出显著的抗氧化活性,其有效半数浓度(EC_(50))平均值分别为(22.9±2.7)、(26.2±3.4)、(24.4±3.1)和(19.5±1.8)μg·mL^(-1)。结论:建立的方法可高效分离纯化白益母草中可作为天然抗氧化剂的4个化合物。