鸭源鸡杆菌的分离鉴定及耐药基因与质粒相关性分析

为了解我国江苏、广西、山东等地鸡、鸭、鹅等禽类鸭源鸡杆菌的耐药特点,试验采集以上地区病死禽肝脏、心脏、输卵管等组织进行鸭源鸡杆菌的分离,对分离株进行生化鉴定、16S rDNA基因的PCR鉴定与测序分析、药敏试验、耐药基因检测及18种不相容(Inc)质粒检测,并分析分离菌药敏表型与其携带耐药基因之间的相关性和分离菌携带耐药基因与Inc质粒之间的相关性。结果表明:共得到17株具有鸭源鸡杆菌特征的分离株。17株分离菌的生化鉴定结果均与鸭源鸡杆菌特征相符。17株分离菌16S rDNA基因序列与参考株的核苷酸相似性均达到97%以上,进一步确定17株分离菌均为鸭源鸡杆菌,并分别命名为2021GA01~2021GA17。17株分离菌对复方新诺明、多西环素、阿莫西林、诺氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、卡那霉素的耐药率较高,分别为88%、82%、76%、76%、76%、71%和65%。在17株分离菌中,对3种及以上抗生素耐药的菌株有14株,占比为82.35%;对10种及以上抗生素耐药的菌株有7株,占比为41.18%;仅菌株2021GA10对头孢噻肟和头孢曲松钠同时耐药。在17株分离菌中,2021GA04、2021GA05、2021GA12共3株分离菌(17.65%)携带氨基糖苷类耐药基因aac(3)-Ⅱ,2021GA01、2021GA02、2021GA03等14株分离菌(82.35%)携带β-内酰胺类耐药基因TEM,2021GA01、2021GA03、2021GA04等6株分离菌(35.29%)携带β-内酰胺类耐药基因CTX-M-65,未检测出喹诺酮类耐药基因;仅2021GA09、2021GA10、2021GA11等8株分离菌携带IncFreP质粒,IncFreP质粒检出率为47.06%;其他17种质粒未检测出。17株分离菌对氨基糖苷类药物庆大霉素耐药性与其携带耐药基因aac(3)-Ⅱ情况的符合率为75%,且两者之间有显著相关性(P<0.05);虽然对氨基糖苷类药物丁胺卡那耐药性与其携带耐药基因aac(3)-Ⅱ情况的符合率为100%,但是两者之间无相关性(P>0.05);对β-内酰胺类药物美洛西林耐药性与其携带耐药基因TEM情况的符合率为50%,两者之间有显著相关性(P<0.05);对其他抗生素耐药性与其携带的耐药基因情况无相关性(P>0.05)。17株分离菌携带的耐药基因aac(3)-Ⅱ、TEM、CTX-M-65与IncFreP质粒之间均无相关性(P>0.05)。说明从多地分离出的鸭源鸡杆菌对各类抗生素表现出较强的耐药性,但IncFreP质粒与耐药基因在鸭源鸡杆菌中的传播无关。

复方白头翁散抑制鸡白痢沙门菌生物被膜形成的初步研究

为探讨复方白头翁散防治鸡白痢沙门菌的效果,并研究其抑制细菌生物被膜的机制。从临床样品中分离出鸡白痢沙门菌,对其进行药敏试验,测定其生物被膜的形成能力。体外试验中,检测复方白头翁散对分离菌株的最小杀菌浓度(MBC)、生物被膜的抑制效果、抑制细菌黏附、侵袭效果以及对相关基因sipC、rpoS、rcsC、invA、hilA、csgB、bcsA和pagC表达水平的影响。结果表明:从临床样品中分离出10株鸡白痢沙门菌,这些菌株至少对1种抗生素耐药,多重耐药率为30%,最高为5重耐药;90%分离株可形成生物被膜。复方白头翁散对9株细菌的最小杀菌浓度为62.5 mg·mL^(-1);该药可在1/2 MBC浓度使分离株黏附率下降93%,侵袭率下降36%,在1/4 MBC浓度使黏附率下降87%,但使侵袭率升高;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析发现,复方白头翁散下调鸡白痢沙门菌sipC基因表达量,上调其invA、bcsA和pagC等基因表达量。这一研究说明通过调节相关基因的表达水平,复方白头翁散抑制鸡白痢沙门菌生物被膜形成,从而阻止其感染。

感染犬耳的杜马奈瑟菌株的分离与鉴定

2019年9月,扬州大学动物医院接诊1只耳部感染的患犬。为了探明病因,本试验取患犬耳道分泌物进行细菌分离,对分离出的1株细菌进行革兰染色、生化试验、16S rDNA基因序列分析、小鼠人工感染试验和药敏试验。结果显示:分离菌株为革兰阴性双球菌,可以发酵葡萄糖、麦芽糖,不能发酵蔗糖,能还原硝酸盐,没有运动能力;经16S rDNA基因序列分析为杜马奈瑟菌(Neisseria dumasiana)。人工感染试验结果显示,分离菌株可引起小鼠炎症反应和死亡,表明其感染能力较强。药敏试验结果显示,分离菌株对头孢曲松钠、美洛西林、头孢噻肟、头孢哌酮等药物敏感,对环丙沙星表现出中介。本试验从犬的耳患病处分离出1株杜马奈瑟菌,可用敏感药物头孢曲松钠内外兼用进行治疗。

鹳源产气荚膜梭菌的分离及其生化特性鉴定

从病死鹳的肝和肠分离出疑似产气荚膜梭菌,纯化后进行革兰染色、生化试验、16S rDNA基因序列分析和毒素鉴定、动物试验及药敏试验。结果表明,分离的菌株为革兰阳性杆菌,能够发酵甘露糖和麦芽糖等糖类,不能发酵棉子糖和甘露醇;16S rDNA基因序列分析确定为产气荚膜梭菌序列;多重PCR结果显示,该菌仅含有α毒素基因,因而确定分离菌为A型产气荚膜梭菌。动物试验结果显示,将该产气荚膜梭菌灌服鸡48 h后,鸡肠道有较多出血点,但未表现坏死性肠炎症状。药敏试验结果显示,该菌对阿莫西林、头孢哌酮、氟苯尼考、美洛西林等药物敏感,对多黏菌素B、链霉素、卡那霉素等药物不敏感,对环丙沙星和庆大霉素中敏。