LncRNA RNU12上调热休克蛋白72抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡

目的探讨46~50℃时抑制重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)蛋白促肝癌细胞凋亡相关分子机制。方法建立肝癌细胞亚致死性热温度模型,在不同温度(43、46、50℃)条件下分别处理10 min,Annexin-V/PI染色检测重组人TRAIL蛋白对肝癌细胞凋亡率的影响,以常温37℃作为对照组。根据前期肝癌细胞Agilent Human lnc RNA+mRNA Array V4.0芯片表达谱数据,选定50℃时特异性高表达的LncRNA RNU12作为研究对象。构建LncRNA RNU12-sh RNA慢病毒干扰载体,转染MHCC97-H细胞。qRT-PCR及Western blot检测感染前后不同温度组中热休克蛋白72(heat shock protein 72,HSP72)mRNA和蛋白的表达变化。利用流式细胞技术检测LncRNA RNU12慢病毒干扰载体对TRAIL蛋白诱导细胞凋亡的影响。采用荧光原位杂交(FISH)技术检测LncRNA RNU12亚细胞定位情况。结果温度在43℃时促进重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能,46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白诱导肝癌细胞凋亡的功能。HSP72 mRNA在4个温度组中的表达均较干扰前明显降低(P<0.01);在蛋白水平,37、46、50℃组较干扰前显著降低(P<0.05)。转染后,46、50℃条件下TRAIL蛋白诱导MHCC97-H细胞凋亡分别上升7.36%、8.84%(P<0.01)。利用RNA-FISH技术确定50℃时LncRNA RNU12主要在MHCC97-H细胞细胞核中表达。结论 LncRNA RNU12在转录水平上调HSP72表达可能是46~50℃时抑制重组人TRAIL蛋白促肝癌细胞凋亡分子机制之一。

肝细胞癌组织中OATP1B3的表达及其作用的初步研究

目的:探讨有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)在肝细胞癌(肝癌)组织中的表达及作用。方法:通过免疫组化实验和免疫印迹试验(Western blot)检测肝癌组织及其癌旁组织中OATP1B3情况,并分析其与患者临床病理特征的相关性。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测OATP1B3在多株肝癌细胞中的表达情况,选择表达量相对较低的人肝癌细胞(HepG2和Huh7)细胞进行过表达实验,细胞毒实验(MTT)和流式细胞术分别检测OATP1B3对细胞增殖及凋亡的影响。结果:肝癌组织中OATP1B3表达水平明显低于癌旁组织(P<0.05),且与患者恶性肿瘤国际临床病期分类(TNM分期)、肿瘤分化程度、有无肿瘤复发显著相关(P<0.05)。过表达OATP1B3可抑制HepG2和Huh7细胞增殖,促进细胞凋亡。结论:OATP1B3在肝癌组织中低表达,上调其表达可抑制肝癌细胞增殖和促进细胞凋亡。OATP1B3可能是肝癌的抑癌基因,对肝癌的发生、发展具有重要作用。

环五肽RGD靶向的纳米金偶联VEGFsiRNA增强兔VX2肝肿瘤射频消融损伤效应的研究

目的:探讨环五肽RGD(Tyr RGD)靶向的纳米金颗粒(GNPs)偶联VEGF小干扰RNA(Tyr RGDGNPs-VEGFsi RNA)复合物对兔肝脏VX2肿瘤射频消融(RFA)损伤效应的影响。方法:采取开腹肝脏种植VX2肿瘤组织块的方法建立兔VX2肝癌模型。首先将6只肝癌兔均分为两组分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物和GNPs,注射48 h后,透射电镜检测两者在肿瘤标本中的聚集和分布情况。然后将30只肝癌兔均分为3组,分别注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物、GNPs、生理盐水48 h后,行RFA治疗,48 h后切取标本,行病理学观察,测量肿瘤毁损体积,TUNEL法检测残癌细胞凋亡。最后将27只肝癌兔均分为3组,分别行RFA+Tyr RGD-GNPsVEGFsi RNA注射,RFA+生理盐水注射、生理盐水注射,饲养至自然死亡,记录生存时间。结果:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物在肿瘤中的聚集明显优于GNPs(14.2颗/500 nm视野vs.0颗/500 nm视野,P<0.01)。注射Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物后的RFA治疗毁损体积明显大于注射GNPs和生理盐水(5.12 cm3 vs.1.78 cm3 vs.1.49 cm3,P<0.01),且前者残癌区肿瘤细胞凋亡数明显高于后两者(111.7个vs.36.3个vs.34.7个,P<0.01),而后两者上述指标差异均无无统计学意义(均P>0.05)。RFA+Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA治疗的肝癌兔较RFA+生理盐水治疗、单纯生理盐水治疗的肝癌兔的平均生存时间明显延长(70.9 d vs.51.2 d vs.43.9 d,P<0.01)。结论:Tyr RGD-GNPs-VEGFsi RNA复合物能在肝脏肿瘤中靶向聚集,具有扩大RFA毁损范围和促进肿瘤细胞凋亡的作用,从而增强RFA疗效。

基于MRI影像组学的特征模型预测肝细胞癌微血管侵犯的研究

目的建立基于MRI影像组学预测肝细胞癌微血管侵犯的特征模型。方法收集笔者所在医院2017年9月至2020年5月期间接受手术治疗的190例肝细胞癌患者的临床和病理资料。将患者按照5︰1的比例随机分为训练组(n=158)和测试组(n=32)。利用钆塞酸二钠增强MRI动脉期和肝胆期的图像,同时获取肿瘤病灶及肿瘤周围2 cm以内的三维感兴趣区的影像组学特征。基于机器学习的logistic回归算法在训练组上建立预测模型,并在测试组对预测模型进行评价。结果筛选得到7个影像组学特征,训练组和测试组模型的受试者工作特性曲线下面积(AUC)分别为0.830[95%CI为(0.669,0.811)]和0.734[95%CI为(0.600,0.936)]。结论基于MRI的影像组学特征模型可以较好地预测肝细胞癌的微血管侵犯,对于术前制定肝细胞癌的治疗策略具有重要的指导意义。