河南省丹参根结线虫病原种类鉴定

【目的】旨在明确河南省丹参根结线虫的发病种类,为丹参根结线虫病的快速诊断和科学防控提供依据。【方法】2019—2021年,从河南省许昌市、三门峡市、南阳市等丹参种植园区采集根结线虫侵染发病的丹参样品。采用形态学、rDNA-ITS序列分析和特异性引物扩增相结合的方法对罹病丹参的根结线虫进行种类鉴定。【结果】形态学结果表明丹参根结线虫与南方根结线虫(Meloidogyne incognita)的形态特征一致。rDNA-ITS序列比对结果表明,丹参根结线虫与GenBank中的南方根结线虫序列具有高度相似性,最高可达100%。基于rDNA-ITS序列构建的系统发育树结果表明,丹参根结线虫种群与其他南方根结线虫种群以100%的支持率聚集在同一支。特异性引物检测结果也表明河南丹参根结线虫为南方根结线虫。同时,依据柯赫氏法则对分离的病原线虫进行致病性测定,发现接种株全部发病,人工接种南方根结线虫的丹参根部发病症状与田间病样症状一致。【结论】通过形态鉴定、分子鉴定和柯赫氏法则验证,明确了引起河南省丹参根结线虫病的病原线虫为南方根结线虫,这是河南地区首次发现南方根结线虫侵染丹参,有关部门应采取相应措施防止该病害在丹参种植区域进一步扩散蔓延。

玉米孢囊线虫SCAR-PCR快速分子检测技术

【目的】玉米孢囊线虫(Heterodera zeae)为孢囊线虫属定居型半内寄生线虫,可侵染多种禾本科作物的根部,玉米孢囊线虫的发生和传播扩散将会对我国玉米生产造成严重威胁。本研究旨在建立玉米孢囊线虫的快速分子检测体系,以期从近缘属种可以准确地检测出玉米孢囊线虫,为玉米孢囊线虫的监测预警和防控打下技术基础。【方法】从我国河南、河北、甘肃、山东、湖南、广西和北京共收集20个玉米孢囊线虫近缘属种群体作为供试线虫;选取13条含有10个碱基的随机引物,采用RPAD技术对供试孢囊线虫进行多态性分析,筛出玉米孢囊线虫特异性RPAD片段,并将其转化为玉米孢囊线虫SCAR-PCR引物;采用PCR方法测试玉米孢囊线虫特异性引物的准确性以及检测技术体系的稳定性、灵敏度和实效性。【结果】通过RAPD比对分析,发现随机引物OPA03能在玉米孢囊线虫基因组DNA中扩增出一条468 bp的特异性片段;将该片段回收测序,根据片段序列信息,利用Primer 5.0设计一对特异性引物HzF1/HzR1;特异性检测结果表明,HzF1/HzR1仅在玉米孢囊线虫群体中扩增出大小为393 bp的特异性片段,其他5种16个孢囊群体(禾谷孢囊线虫、菲利普孢囊线虫、大豆孢囊线虫、旱稻孢囊线虫和甜菜孢囊线虫)和4个其他种群(水稻干尖线虫、马铃薯腐烂茎线虫、落选短体线虫和咖啡短体线虫)均没有扩增出目的条带;以含有玉米孢囊线虫的混合种群孢囊DNA为模板时,特异性引物HzF1/HzR1也能扩增出来单一明亮的393 bp的特异片段,而不含玉米孢囊线虫的混合种群不能扩增出该片段;该体系实现了玉米孢囊线虫准确、稳定的检测目的;对建立的玉米孢囊线虫快速检测技术体系灵敏度和实用范围测试,表明该检测体系对玉米孢囊线虫单个孢囊和单条幼虫均有灵敏的检测能力,检出值不低于1/2000个孢囊和1/80条2龄幼虫。【结论】本研究建立的玉米孢囊线虫SCAR-PCR快速分子检测技术,可用于玉米孢囊线虫单一样本和混合种群的快速检测,对玉米孢囊线虫的孢囊和2龄幼虫均有灵敏的检测能力,检测引物特异性强,检测方法便捷稳定,灵敏度高。

新型杀线剂对甘薯腐烂茎线虫的防治效果

[目的]筛选出且并对甘薯腐烂茎线虫高效低毒、低残留的药剂。[方法]采用浸渍法测定了9种药剂在3个不同质量浓度下对甘薯腐烂茎线虫的生物活性,在此基础上选择5种触杀活性较好的药剂进行盆栽防治试验。[结果]生物活性测定结果表明:45%三氟吡啶胺SC、5%阿维菌素EC、5%噻唑膦WG、42%威百亩SC和4.5%寡糖·噻唑膦GR对甘薯腐烂茎线虫的触杀效果较好,72 h校正防效均超过了50%;盆栽试验结果表明:45%三氟吡啶胺SC 150 mg/L处理45 d虫口减退率最高,达68.23%,其次是5%噻唑磷WG 1500 mg/L处理45 d,虫口减退率为60.03%,42%威百亩SC 6250 mg/L处理虫口减退率最低,仅为16.36%。[结论]45%三氟吡啶胺SC和5%噻唑磷WG对甘薯腐烂茎线虫的触杀活性和盆栽防治效果较好,具备良好的田间应用前景。

郑州市绿地草坪重要植物寄生线虫鉴定

郑州市部分绿地草坪草存在植株矮小,长势衰弱,叶片枯黄等现象,推测其可能受植物线虫危害。为明确危害郑州市绿地草坪草的寄生线虫种类以及分布情况,2020—2021年,从郑州市12县/区辖区内的30个公园绿地随机采集136份草坪草疑似发病样品。采用浅盘法和漂浮法分离样品中的植物线虫,利用形态学和分子生物学鉴定相结合的方法,对分离到的植物线虫进行种类鉴定。结果表明,18个地区中的98份样品中检测到植物寄生线虫,检出率高达72.1%,覆盖调查地区的60.0%。同时,发现不同公园或绿地之间土壤中线虫数量差异悬殊,其中上街东虢湖公园线虫密度可达98.68条/100 m L土,而新郑龙湖城市湿地公园线虫密度仅为1.10条/100 mL土。种类鉴定结果显示,本次调查共检测到9种重要草坪草植物寄生线虫:小叶螺旋线虫(Helicotylenchus microlobus)、花生茎线虫(Ditylenchus arachis)、马铃薯腐烂茎线虫(D.destructor)、茎线虫属线虫(Ditylenchus sp.)、菲利普孢囊线虫(Heterodera filipjevi)、南方根结线虫(Meloidogyne incognita)、滑刃属线虫(Aphelenchoides spp.)、菱形盘旋线虫(Rotylenchus rhomboides)和双刃垫刃属线虫(Labrys sp.),其中小叶螺旋线虫为优势种群。本研究首次在郑州市草坪草上发现菲利普孢囊线虫和南方根结线虫的危害,其中菲利普孢囊线虫、菱形盘旋线虫等多个线虫为国内首次在城市草坪草上检测发现。研究结果为草坪草的调运和植物检疫提供了技术支撑,为郑州市绿地草坪线虫病的防治奠定了理论基础。

河南省禾谷类作物孢囊线虫的发生分布与种类鉴定

为探究河南省主要禾谷类作物孢囊线虫的发生分布,明确孢囊线虫对不同作物的危害情况,于2017—2020年对河南省18个市50个县(区)的小麦、玉米和水稻作物的孢囊线虫种类和发生分布进行随机取样调查,采用形态学特征、分子生物学鉴定和r DNA-ITS序列进化树分析技术鉴定不同作物孢囊线虫的种类,并根据土壤中孢囊基数和单孢囊卵数明确不同作物孢囊线虫的发病严重度。结果显示,共采集土壤样品308份,其中224份样品检测到孢囊,孢囊检出率为72.7%。小麦孢囊线虫发生分布范围覆盖40个县(区),其中15个县(区)为禾谷孢囊线虫Heterodera avenae侵染,23个县(区)为菲利普孢囊线虫H.filipjevi侵染,南阳市西峡县西坪镇和开封市尉氏县张市镇为禾谷孢囊线虫和菲利普孢囊线虫混合侵染发生区;玉米孢囊线虫H.zeae在濮阳市清丰县韩村镇、许昌市长葛市董村镇和禹州市范坡镇检测点首次被发现;旱稻孢囊线虫H.elachista在信阳市潢川县魏岗乡、来龙乡和新乡市获嘉县亢村镇检测点首次被发现。孢囊线虫发病严重度数据表明,小麦田平均孢囊含量高达17.3个/100 mL;玉米田平均孢囊量为11.0个/100 m L;水稻田平均孢囊量为4.4个/100 mL。表明河南省孢囊线虫高发地块主要集中在豫北、豫东和豫中平原区。

河南许昌小麦孢囊线虫冬前侵染为害调查

为明确河南许昌地区小麦孢囊线虫的冬前侵染和为害情况,对许昌市5县(市、区)36个乡(镇)的46个行政村进行全面普查。统计数据显示,许昌地区采集的230份土壤样品和小麦根组织样品中植物寄生线虫检出率为100%,孢囊检出率为71.30%,平均孢囊含量为3.0个/100mL土样。小麦孢囊线虫冬前侵染现象普遍,在小麦播种后45d可发育至四龄幼虫。采用形态学和SCAR-PCR检测对小麦孢囊线虫进行种类鉴定,发现菲利普孢囊线虫为许昌地区的优势种群,检出样品占孢囊样品总数的91.67%,发生区占调查地区的71.74%;部分地区存在菲利普孢囊线虫与禾谷孢囊线虫或玉米孢囊线虫混合发生的情况,占调查地区的6.52%。本研究明确了许昌地区小麦孢囊线虫的冬前侵染为害情况和种类分布,为小麦孢囊线虫病的防治和为害损失研究提供基础支撑。