西昌市虫媒病毒核酸检测及其序列分析

目的了解四川省西昌市蚊虫样本中虫媒病毒的流行情况,丰富四川省西南部地区虫媒病毒的活动规律和病毒遗传特征的研究数据。方法2018年6月对采集自西昌市3个村不同猪圈环境中的三带喙库蚊提取核酸,使用云南环状病毒属、版纳病毒属、西藏环状病毒属(S7、S10)、黄病毒属、甲病毒属的特异性引物进行PCR检测,对阳性产物克隆测序并进行序列分析。结果共采集到蚊虫9012只,其中三带喙库蚊为优势蚊种,对采集到的三带喙库蚊分88批次进行扩增,分别检测出2株乙型脑炎病毒(JEV)、7株版纳病毒(BAV)、7株西藏环状病毒(TIBOV)和1株云南环状病毒(YOUV),序列分析结果显示,17株新检测病毒株均与云南分离株遗传关系接近,2株JEV位于GⅠ-b进化支;7株BAV为A2进化分支;7株TIBOV中,6株位于同一进化支;1株TOUV与云南分离株在同一进化支。结论西昌市的三带喙库蚊中存在携带JEV、BAV、YOUV及TIBOV等病毒的可能,其中JEV为GⅠ-b型病毒,BAV为A2型,为西昌市虫媒病毒的检测及分析提供了数据支持。

云南省芒市蠓虫Tibet orbivirus和Manglie virus的分离及其共感染研究

西藏环状病毒(Tibet orbivirus,TIBOV)是一种2009年新发现的环状病毒,它对家养动物具有潜在的危害。为了了解云南省西部边境地区芒市蠓虫中TIBOV流行情况,以及在TIBOV和Manglie virus(MaV)共感染情况下,MaV对TIBOV在细胞上增殖的影响。2018年7月我们在云南省德宏州芒市采集蠓虫标本,采用细胞进行病毒分离,获得2株阳性分离物,编号分别为MS18C217-8和MS18C217-9。MS18C217-8株阳性分离物接种C6/36细胞后72h出现细胞病变,细胞病变特点为圆缩、折光性变强和脱落等,而接种BHK-21细胞后168h没有出现明显细胞病变;MS18C217-9株阳性分离物接种BHK-21细胞后72h出现细胞变圆、脱落和破碎等细胞病变,接种C6/36细胞后168h没有出现明显细胞病变。分别采用虫媒病毒特异引物进行RT-PCR,MS18C217-9株阳性分离物TIBOV特异引物扩增阳性,而MS18C217-8株阳性分离物MaV特异引物扩增阳性。测序后,MS18C217-8获得1133个核苷酸序列,MS18C217-9获得1085个核苷酸序列。遗传进化分析结果显示,MS18C217-9株病毒与中国云南、广东、西藏等省、自治区和日本等地区分离的7株TIBOV位于同一进化分支,核苷酸同源性在93.1%~99.2%之间,提示MS18C217-9株病毒是TIBOV;而MS18C217-8株病毒与2011年和2018年云南分离的2株MaV位于同一进化分支,它们之间核苷酸同源性在96.9%~97.3%之间,提示MS18C217-8株病毒为MaV。TIBOV和MaV两种病毒在C6/36细胞上共感染研究结果显示,2种病毒共感染后TIBOV滴度低于TIBOV单独感染病毒滴度,提示MaV可能降低了共感染期间TIBOV复制。本研究首次在蠓虫中分离到MaV,并在同一地点采集的蠓虫中同时分离到了TIBOV和MaV,提示这两种病毒在当地的蠓虫中存在共流行。MaV在媒介中的感染可能会抑制TIBOV复制或传播。该研究结果不仅丰富了我国虫媒病毒种类资源,同时也为阻断动物虫媒病毒病的流行提供新的思路。