LC-MS/MS法测定克拉霉素血浓度及药动学

目的建立测定人血浆中克拉霉素的LC-MS／MS法，研究市售克拉霉素胶囊在人体的药动学特点。方法以罗红霉素为内标，取血浆样品0．3mL经蛋白沉淀后，以甲醇-水（1％甲酸溶液）-乙腈=（80：10：10）为流动相，用C18柱分离，采用电喷雾离子源，正离子方式检测，扫描方式为多反应检测（MRM）。结果克拉霉素线性范围为10～2500μg·L^-1，日内、日间RSD均〈3．5％。应用此法研究18名健康受试者单剂量口服250mg克拉霉素市售胶囊的药动学参数tmax、ρmax、t1/2、AUC0→t和AUC0→∞，其值分别为（1．95±0．71）h、（949±399）μg·L^-1、（4．79±0．84）h、（5600±1753）μg·h·L^-1、（5766±1776）μg·h·L^-1。结论该法用于人体药动学的研究具有专属、快速、灵敏等特点。

用高效液相色谱-质谱-质谱法测定小鼠血浆和大脑中的石杉碱甲及药动学

目的建立小鼠血浆和大脑中石杉碱甲的液质联用测定法，测定灌胃给药后小鼠血浆和大脑中石杉碱甲浓度的动态变化以及药动学参数。方法小鼠血浆及大脑样品经液液萃取，用高效液相色谱-质谱-质谱（LC-MS-MS）联用法检测。色谱柱：PHENOMENEX C18柱，100mm×2mm，5micron；流动相为甲醇：水（1％甲酸溶液）=60：40；用于定量的离子为m／z243→154（石杉碱甲）和m／z278→203（内标：克仑特罗）。结果所建立的血浆的方法线性范围为1～1000ng／mL，脑的方法线性范围为1～1000ng／mL，它们最低检测限为1ng／mL，（r=0．9990），RSD〈7％，可以检测小鼠灌胃后石杉碱甲在血和脑中的浓度；血浆石杉碱甲浓度-时间变化可用一室模型拟合，主要药动学参数分别为Tmax=6min，Cmax=281ng／mL，AUC（0→tn）=35266ng·L^-1·min^-1，AUC（0→∞）=38056ng·L-^1·min^-1，t1／2=99min；在大脑中的药物浓度-时间变化用非房室模型拟合，主要药动学参数分别为Tmax=60min，Cmax=224ng／mL，AUC（0→tn）=44344ng·L^-1·min^-1，AUC（0→∞）=58571ng·L^-1·min^-1。结论该方法灵敏度高，简便快速，可用于药代动力学及相关研究；石杉碱甲在小鼠大脑中的消除速度比血浆缓慢。

胰激肽释放酶的分离纯化

探讨了利用离子交换纤维素(DEAE-cellulose)从分离弹性酶后的母液中吸附分离胰激肽释放酶的较优化工艺。平均得量1.832 g/kg 胰脏,比活12.34 u/mg,回收率为65.4%。它还能提高粗品胰激肽释放酶的比活,回收率为81.0%。

利用CMC与Sephadex G50纯化胰岛素

利用CMC离子交换层析结合Sephadex G50层析建立了(1)CMC—G50,(2)G50—CMC-G25纯化胰岛素的工艺路线。胰岛素在CMC和Sephadex G50柱上的回收率分别为88.4%和85.9%。通过此工艺,纯化倍数可达22～28倍,胰岛素电泳效价大于26u/mg。

中药大黄的生化学研究.ⅪⅩ.蒽醌衍生物对线粒体呼吸链的抑制部位

本实验结果表明:大黄素、大黄酸和芦荟大黄素是线粒体呼吸链电子传递的抑制剂。(1)三药对NADH脱氢酶有不同程度的抑制作用,(2)大黄素对琥珀酸脱氢酶有较强的抑制作用,而大黄酸和芦荟大黄素对此酶仅有轻微的抑制作用;(3)三药对辅酶Q-细胞色素C还原酶及细胞色素C氧化酶也仅有轻微的抑制作用;(4)动力学观察表明:三药对NADH脱氢酶的抑制均为竞争性的。

胰岛素效价的盘电泳测定与ELISA的比较

本文探讨了胰岛素效价的盘电泳测定和酶联免疫吸附测定,并对两种方法的测定结果进行比较。结果表明两种方法的灵敏度均较高,检出限量分别为盘电泳3μg,酶联免疫吸附测定6μu。且一次操作可同时测定数个样品。经适当处理校正后,电泳测定值与酶联免疫吸附测定值基本一致。这两种方法应用于胰岛素的分离纯化过程的活力监控取得了较满意的结果。

抗心律失常新药BRB－I－28的临床前研究

ＢＲＢ－Ｉ－２８（７－苄基－３－硫－７氮双环［３，３，１］九烷）是新近合成的３，７－二杂环［３，３，１］九烷的衍生物。可选择性作用于缺血性心肌细胞并通过抑制钠通道而起抗心律失常作用，还具较强的强心作用。药代动力学研究表明：ＢＲＢ－Ｉ－２８具有较快的吸收速率，其生物利用度在大鼠上为±８０％．狗为±４５％；广泛分布于各种组织尤其肝、心、肾，但脑和脂肪中含量很少；快速被代谢成亚砜及苯甲酰胺产物；其盐酸盐的ＬＤ５０为±ｌ３０ｍｇ／（ｋｇ·ｄ），鉴于其有效的抗心律失常作用和低毒性作用。

对113树脂吸附弹性蛋白酶的工艺改进

弹性蛋白酶(Elastase,EC3.4.4.7简称弹性酶)是存在于哺乳动物胰脏的一种肽链内切酶,具有广泛的药理作用,影响脂质代谢,阻止胆固醇在肝脏中合成和在血管壁中沉积,降低血中胆固醇和甘油三酯,阻止主动脉和冠状动脉壁上的斑块的形成,抑制肝纤维化和肾小球病变,对粘液、脂质和蛋白质有水解的功能,并有溶解结缔组织中弹性蛋白的独特功能。能降血压、扩张血管。

利用离子交换树脂制备弹性酶

采用SP树脂制备弹性酶。每公斤猪胰脏可得比活为30.69 u/mg的弹性酶7.03g。活力回收率为66.0%。同时还将SP树脂与国内生产弹性酶的J_2树脂、113树脂及Amberlite CG50进行了比较。实验结果表明:利用SP树脂吸附弹性酶后的母液仍可回收胰激肽释放酶。

胰岛素自控给药系统新进展

目前,世界上有很多的糖尿病患者在使用胰岛素注射剂来治疗糖尿病引起的高血糖症。但要始终维持合适的血糖浓度,防止糖尿病引起的后遗症,靠每天常规注射胰岛素是难以达到的,而且给患者带来许多不便。因此。

临床溶栓药UK与SK生化、药理和临床应用比较

在饮食和生活水准日益提高的今天,由于饮食习惯,缺少锻炼以及体内代谢失调等,使得血栓症的发生率也在不断提高,以脑血管。

以内质网应激为靶标治疗1型糖尿病的药物研究进展

1型糖尿病(T1DM)是器官特异性的自身免疫病,目前临床中缺乏T1DM的根治手段。内质网应激是早期T1DM发病的重要病理特征和促进其发生发展的重要因素,病理性的内质网应激是治疗T1DM的新靶标,靶向病理性内质网应激的药物有利于恢复胰岛β细胞的数量和质量,从而治疗T1DM。当胰岛β细胞中内质网出现错误折叠蛋白累积时会引起内质网应激,进而过度激活未折叠蛋白反应的3条经典通路:肌醇需求酶1、蛋白激酶R样内质网激酶和转录激活因子6通路。本文对基于这3条通路和未折叠或错误折叠蛋白为标靶治疗T1DM的药物研究进展作一综述。

LC-MS/MS法测定大鼠血浆中利巴韦林及其毒代动力学参数

目的:建立LC-MS/MS法,测定大鼠血浆中利巴韦林及其毒代动力学参数。方法:LC条件:Waters Atlan-tis T3色谱柱(4.6 mm×150 mm,3μm),柱温为40℃,流动相为0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸乙腈溶液(95∶5),流速为1 000μL.min-1,进样量为2μL;MS条件:电喷雾离子源,正离子电离模式,多反应离子监测的MS扫描方式。以10、40、160 mg.kg-1.d-1剂量每日1次、连续28 d给大鼠灌胃使用利巴韦林药液,测定其血药浓度和毒代动力学参数。结果:利巴韦林血药浓度线性范围为5～5 000μg.L-1,最低定量限为5μg.L-1;日内和日间精密度良好,RSD均小于15%,准确度均在±15%以内。所测利巴韦林毒代动力学参数基本上与给药剂量成正相关,未见有明显药物蓄积现象,与毒性表现基本一致。结论:该法专属性强、灵敏度高、操作简便,适用于生物样本中利巴韦林的测定及毒代动力学研究。

阿达木单抗抗原结合片段在大肠杆菌中的共分泌表达和纯化

构建阿达木单抗抗原结合片段(Fragment antigen binding,Fab)表达载体,使其在大肠杆菌内高效共分泌表达,周质空间中获得具有活性的目的蛋白。将带有信号肽的Fab片段重链与轻链克隆于带有双启动子的pETDuet-1载体内,BL21(DE3)Star宿主菌内利用IPTG低温诱导双基因共分泌表达,选用"渗透压冲击法"提取周质蛋白,色谱柱纯化,Western blot分析纯化结果,与纯化的人肿瘤坏死因子(TNF-α)相互作用进行活性分析。SDS-PAGE与Western blot分析在细胞周质中同时存在重链和轻链,大小与预期相符,ELISA试验显示Fab片段与TNF-α结合。结论:得到有活性的人源的阿达木单抗的Fab的可溶性表达产物,为进一步对其进行结构与功能的研究奠定了基础。

跨国药企研发模式及发展趋势

制药业是研发投入占其销售总额比例最高的行业。通过透视目前全球新药研发现状与跨国医药企业研发的总体特征,对运行模式进行较为深入的分析探讨,将其归纳成7种研发模式:独立研发、专利授权、投资及收购、双方联合研发、项目外包、多方合伙利益分享风险分担及风险投资、外包企业与跨国药企知识产权的合作方式,分析其特点并分别提出具体的案例。指出了跨国药企日后的发展趋势:精简研发部门、建立小而灵的药物研发执行单元、扩大向公司外部寻求创新支持、加大研发外包等,分析了全球化对我国制药业的影响,进而提出我国医药产业全球化竞争和实施国际化的应对策略。

MS275协同BI2536抗人肺癌A549细胞增效作用的研究

研究组蛋白脱乙酰酶抑制剂MS275与polo样激酶1抑制剂BI2536联合作用对人非小细胞肺癌细胞株A549细胞的增效作用及其作用机制。采用CCK-8法检测MS275和BI2536单用或联用时对A549细胞增殖的影响,结果显示细胞增殖抑制率在两药联合作用后比单独用药作用显著增强;使用流式细胞仪检测细胞周期,表明联合用药时细胞被大量阻断在G2/M期。应用蛋白质免疫印迹法(western blot)检测蛋白激酶AKT和半胱氨酸蛋白水解酶caspase-3蛋白表达水平,显示细胞内激活的caspase-3切割片段增多,磷酸化蛋白激酶AKT表达量下调。研究结果提示,MS275协同BI2536阻断细胞周期,抑制A549细胞增殖,其作用机制应是通过上调caspase-3的活性,抑制蛋白激酶AKT磷酸化,影响PI3K/AKT通路来完成的。这两种药物的联合应用可能成为人非小细胞肺癌治疗中的新方案。

蛋白降解靶向嵌合体分子的药动学研究进展

蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)是一种新型的靶蛋白降解分子。PROTAC分子通过连接子,一端靶向目标靶蛋白,另一端结合E3泛素连接酶,给靶蛋白添加上泛素化标签,巧妙利用泛素-蛋白酶体系统降解靶蛋白。PROTAC因为其独特的作用机制而成为创新药研发的热门研究方向,但同时其体内外药动学研究也存在诸多挑战,主要存在相对分子质量大、溶解度不佳、渗透性不好、口服吸收差、生物利用度低和药动学-药效学相关性复杂等常关注的问题。该综述综合梳理和阐述了PROTAC分子的药动学特征和吸收、分布、代谢、排泄机制以及研究策略,为PROTAC药动学研发工作提供参考。