人纤溶酶原饼环区5蛋白的原核表达体系的建立

目的 构建人纤溶酶原饼环区 5 (hPK 5 )蛋白原核表达载体 ,并进行表达和鉴定 ,为获取大量高纯度、具有生物活性的hPK 5蛋白奠定基础。方法 以纤溶酶原cDNA为模板 ,PCR扩增hPK 5基因 ,经酶切后构建表达载体pBV2 2 0 /hPK 5 ,转入大肠杆菌JM10 9进行温控诱导表达 ,表达产物经纯化、复性后 ,检测其抑制鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管新生的生物学活性。结果 带有pBV2 2 0 /hPK 5的大肠杆菌表达的目的蛋白占菌体总蛋白的34 8% ,其表达蛋白具有His tag抗原活性和野生活性。结论 已成功构建了pBV2 2 0 /hPK 5重组质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。

口腔白斑组织癌变标志性基因筛查

口腔黏膜白斑病(oral leukoplakia,OLK)是最常见的口腔粘膜的癌前病变.OLK恶性转化率高达43%,因此加强其风险调查和监测对于该病的预防和治疗具有重要意义.本研究采用美国SuperArray公司的肿瘤基因芯片(OHS-802)检测口腔正常组织、OLK组织和口腔鳞状细胞癌(oralsquamous cell carcinoma,OSCC)组织的肿瘤相关基因表达差异,旨在筛查与口腔黏膜白斑病发生和癌变相关的表达阳性基因,为探究OLK的发生及癌变机制奠定基础.将"正常组织→OLK组织→OSCC组织"连续递增2倍以上或递减2倍以上的基因确定为OLK组织癌变的标志性基因.SuperArray基因芯片、RT-PCR法和实时定量PCR结果显示,仅有3个基因(ACP-2、BCL-2、SOCS-3)表达水平连续下调2倍以上,有6个基因(CLK-3、CTNNB-1、FKBP-8、GDF-15、NF-1、XRCC-1)表达连续上调2倍以上.进一步经RT-PCR和实时定量PCR验证,其结果与SuperArray结果一致.本研究结果提示,ACP-2等9个基因可能是口腔正常黏膜组织经OLK转变为癌组织的驱动基因,可作为OLK组织、OSCC组织和口腔正常黏膜组织诊断的分子标志.

纤溶酶原饼环区5蛋白重组大肠杆菌高效表达体系的建立

目的 建立纤溶酶原饼环区 5 (Humanplasminogenkringle 5 ,hPK 5 )蛋白重组大肠杆菌高效表达体系 ,为高密度发酵创造条件。方法 观察一级、二级种子的生长状态 ,比较表达hPK 5蛋白的 4种重组工程菌株在相同条件下的表达情况 ,选出首选发酵种子 ;对其培养时间、诱导时间、培养基种类、pH等条件进行优化 ;并用凝胶成像分析系统对SDS PAGE结果进行分析。结果 经过筛选 ,JM10 9 pBV2 2 0 hPK 5 (简称JP5 )是获取hPK 5蛋白的首选工程菌株 ,其最佳表达条件是LB培养基 (pH 7.4、溶解氧充足 )、30℃培养 3h、4 2℃诱导 6h。在此条件下 ,JP5表达目的蛋白占菌体总蛋白的 38%左右。结论 为高密度发酵获取hPK

菌体中大量抽提质粒DNA方法的改进

目的 建立简便、快捷的大量制备质粒的实验方法。方法 以文献报道方法为依据 ,将传统的质粒小量抽提的实验方法与大量抽提的实验方法有机结合 ,以琼脂糖凝胶电泳的方法证明了使用改进后方法的可行性。结果 使用该法可以一次大量地制备质粒DNA ( 690± 2 19) μg ,提取效力为 ( 1 4± 0 4) μg/ml菌液 ,并可直接用于酶切。结论 改进后的实验方法更加简便、快捷、高效 。

大学生实践活动与实践教育

实践活动是高校学生管理工作和教育改革的重要内容 ,也是高等教育学的重要研究课题。分析我国高校实践活动的特点及存在的问题 ,探索实践教育过程中的对策 。

人纤溶酶原饼环区5的cDNA序列及其氨基酸序列分析

目的 对人纤溶酶原饼环区 - 5 (h PK- 5 )因子的 c DNA序列和氨基酸序列进行综合分析 ,为其基因工程表达载体的构建奠定理论基础。方法 从国际生化技术信息中心 (NCBI)的 Gene Bank数据库中调取人纤溶酶原的基因和全序氨基酸序列 ,结合文献报道结果获得 h PK- 5基因序列和氨基酸序列 ,利用蛋白质处理软件cd3d- win32、核酸分析软件 DNAclub和 SMS生物综合处理软件对 h PK- 5的基因序列和氨基酸序列进行综合分析。结果 选取 Eco RV(1890 )和 Sca I(10 91、1397)可以从纤溶酶原的基因序列中酶切获取一长为 4 93bp的基因片段 ,其中含有 h PK- 5序列 ;在 h PK- 5序列中间没有常见的限制性内切酶切割位点 ,酶切时可以保证外源基因序列的稳定性 ,h PK- 5基因序列中 ,G+C与 A +T相比略占优势 ,可以推断该基因序列的相对稳定性较高 ;氨基酸序列分析结果显示 ,在对 h PK- 5因子进行序列构建时 ,应根据其野生源蛋白的碱基及氨基酸序列特点 ,使用其随机频率的三联密码子 ,以保证后期基因表达蛋白具有高活性的可能性。结论 经多种生物软件分析 ,可以认为h PK- 5因子适合于利用基因工程技术体系制备 。

优化教育环境促进学生的个性发展

个性是指一个人经常地稳定地表现出来的不同于他人的心理特点的总和。为在日常学生管理工作中促进学生的个性发展 ,应本着“一个认识、一个重视、三个培养”的工作思路 。

抗衰抗疲劳胶囊对血液生化指标影响人群调查研究

目的以冬虫夏草菌丝体、枸杞多糖、红景天多糖为主要功效成分的抗衰抗疲劳胶囊由本室研制。本文采用人群调查方法,研究抗衰抗疲劳胶囊对人体主要血液生化指标(Alt、Ast、Cre、BUN、TC、TG、HDL-C、TP、Alb、血糖)的影响,分析该复合方剂可能的作用和作用机制。方法用整群抽样法在太原地区抽取三个单位共123例正常健康人,年龄35～60岁。第0日随机分成实验组(A)和对照组(B)后进行服药前体格检查;采用双盲法,第1日开始服用药物,第20日时集中采血行第二次体格检查。。结果用SAS软件进行统计学分析。结果实验组(A)血清TG明显下降(8.61％),HDL-C有增高(3.43％),经分析有统计学意义(P<0.05)。结论抗衰抗疲劳胶囊的作用原理主要是增强体内脂蛋白脂酶(LPL)活性,使TG分解加快,引起血清TG下降,说明本制剂在降血脂及抗动脉粥样硬化方面有明显的预防和治疗作用;同时该制剂能降低体内蛋白质供能程度,提高机体的适应能力,对抗疲劳有明显效果。

血管新生抑制剂Kringle5结构及改造研究进展

Kringle5是血浆纤维蛋白溶酶原（plasminogen,Pgn）的第5个饼环区结构（kringle domain）,在体外具有抑制内皮细胞增殖,抑制内皮细胞迁移的生物学活性，在体内可抑制多种血管新生模型的新生血管形成（angiogenesis），甚至可抑制肿瘤的生长和转移，在实体瘤、糖尿病视网膜病变、风湿性关节炎等疾病的治疗中有广泛的应用前景。现将其近几年的研究情况综述如下。

基因重组Kringle 5蛋白急性经口毒性试验研究

目的检测基因重组Kringle 5蛋白的急性经口毒性,为其临床应用提供医学毒理学依据。方法采用小鼠急性经口毒性试验并采用霍恩法测定半数致死量(LD50)。结果 1周内试验动物未见明显中毒症状及死亡发生,采用霍恩法测定LD50>10g/kg。结论基因重组Kringle 5蛋白属实际无毒级。

潜伏在人类基因组计划内的巨大商机

人类基因组计划 (HGP)是当前生物医学领域乃至医学领域最大的科学工程 ,它对人类未来发展的推动力不亚于“人类蹬月计划”。当人们对HGP的伦理学、社会学、乃至医学、军事科学诸方面评头论足的时候 ,笔者从经济学角度分析了HGP在基因诊断、基因治疗、克隆技术、基因工程药物、生物信息产业等方面给商家带来的商业契机 ,使人们更能清晰的看到HGP的经济前景 ,这对于各相关产业、企业的投资。

补阳还五汤对大鼠全血比黏度、TXB_2、LPO及SOD的影响

目的 探讨补阳还五汤用于治疗盆腔瘀血综合征 (PCS)的作用机制。方法 选用雌性Wistar大鼠 30只 ,分为 3组 :正常对照组 ,用等量的生理盐水灌胃 ;模型组 ,按文献方法处理 ;补汤组 ,给予等量的补汤煎液灌胃 ,其他处理同模型组。所有受试组动物于第 15d处死 ,颈动脉采血 ,检测全血比黏度、TXB2 、LPO及SOD。结果 模型组大鼠全血比黏度、血浆中TXB2 、血清LPO水平明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ,而SOD水平则明显低于对照组 (P <0 0 1)。补汤组全血比黏度、血浆TXB2 、血清LPO较模型组有显著降低 (P <0 0 1) ,红细胞SOD高于模型组 (P <0 0 1)。结论 补阳还五汤治疗“气虚血瘀”的机制可能与提高SOD的活性 ,抑制体内LPO生成减少自由基反应对血管内皮的损伤 。

人脐带来源间充质干细胞分离培养方法的优化

背景:关于人脐带间充质干细胞的分离培养方法不一,如何提高人脐带来源间充质干细胞获得效率的问题尚未解决。目的:优选人脐带来源间充质干细胞制备的消化酶组分。方法:无菌条件下取正常足月剖腹产的脐带近胎儿段,按不同混合酶浓度比值划分为3组,混合酶Ⅰ组成分为0.4%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA和0.1%透明质酸酶;混合酶Ⅱ组成分为0.1%Ⅱ型胶原酶、0.4%胰酶、0.02%EDTA和0.1%透明质酸酶;混合酶Ⅲ组成分为0.3%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA、0.1%透明质酸酶和0.1%DNA酶。每组再按消化时间分为1,2,3h3个亚组。最后重悬细胞终体积均定位4mL并计数,采用含血清的DMEM培养液体外培养细胞。结果与结论:采用3种不同混合酶浓度进行消化,发现相同消化时间内,混合酶Ⅲ组消化细胞最多(P<0.05)。在作用3h时,混合酶Ⅲ组获取的细胞中活细胞比值显著低于混合酶Ⅰ组和混合酶Ⅱ组(P<0.01)。提示0.3%Ⅱ型胶原酶、0.1%胰酶、0.02%EDTA、0.1%透明质酸酶和0.1%DNA酶混合液消化脐带组织块2h为获取脐带间充质干细胞的最佳条件。

[Gly^(14)]-humanin多肽对β淀粉样蛋白引起的神经干细胞毒性的拮抗作用研究

目的:研究[G ly14]-hum an in对β淀粉样蛋白1-42引起的神经干细胞毒性的作用。方法:用[G ly14]-hum an in和β淀粉样蛋白1-42处理神经干细胞,观察其对神经干细胞增殖、分化的影响。结果:较低浓度的[G ly14]-hum an in加入有β淀粉样蛋白1-42处理的神经干细胞培养基,经过琼脂糖凝胶电泳分析及流式细胞测定DNA含量,神经干细胞显示出对β淀粉样蛋白1-42的耐受,而对照组则显示神经干细胞出现凋亡现象。高浓度的[G ly14]-hum an in加入培养基,经台盼蓝拒染法计数细胞,神经干细胞死亡率明显低于对照组,对照组神经干细胞出现大量死亡。结论:[G ly14]-hum an in不但具有抑制β淀粉样蛋白1-42对神经干细胞的毒性作用,而且在低浓度的情况下,可以促进神经干细胞的增殖和分化为神经元。

人纤溶酶原饼环区5(hPK5)基因的分泌型表达

构建人纤溶酶原饼环区 5 (hPK 5 )基因的原核可溶性表达载体并进行表达和纯化 ,获取大量高纯度、具有生物活性的hPK 5蛋白。以纤溶酶原cDNA为模板 ,PCR扩增了hPK 5基因 ,经过适当酶切后构建表达载体pET2 2b( + ) hPK 5 ,转入大肠杆菌BL2 1 (DE3)进行表达并经组氨酸亲和层析获得纯化。带有重组质粒pET2 2b( + ) hPK 5的大肠杆菌经IPTG诱导后以可溶性形式表达 1 6kDa的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白的 30 %以上 ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有His tag抗原活性。构建了pET2 2b( + ) hPK 5重组质粒并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 ,为获得大量hPK 5基因工程产品奠定了实验基础。

试谈拓展思想政治工作的新思路

高校思想政治工作 ,宜结合工作实际 ,运用邓小平关于初级阶段理论 ,坚持“三个有利于”标准和实事求是的思想路线 ,坚持效率优先论和“两点论”。这对于高校坚持正确的办学方向 ,全面贯彻党的教育方针 。

β-淀粉样蛋白对神经干细胞致凋亡作用研究

目的观察β-淀粉样蛋白(Aβ)能否诱导体外培养的大鼠神经干细胞凋亡。方法取孕13d的胎鼠大脑,体外进行培养、传代、鉴定后,加入Aβ,利用细胞计数观察细胞增生,利用琼脂糖凝胶电泳及流式细胞仪观察凋亡情况。结果当Aβ浓度>25μmol/L时,能明显抑制神经干细胞的增生,同时引起神经干细胞的明显凋亡。结论Aβ抑制神经干细胞的增生并可致神经干细胞凋亡,可能与阿尔茨海默病的发病有关。