携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用

目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。

测定废水中六价铬的研究进展

比较了分光光度法、原子光谱法、电化学分析法、离子色谱以及电感耦合等离子体发射光谱-质谱联用法等不同六价铬检测方法,探讨它们各自方法的优缺点以及各自在不同领域的应用范围,提出废水中六价铬测定过程中常见操作技术问题的解决办法。近几年仪器联用技术的不断完善,我们不但可以直接测定六价铬含量,还能对水中成分进行全方位分析。这些对环境检测工作者具有重大意义。

微波消解-石墨炉原子吸收法测定纸巾纸中砷含量

建立了石墨炉原子吸收光谱法测定纸巾纸中砷含量的方法。采用微波消解技术处理样品，加人基体改进剂硝酸镍，应用石墨炉原子吸收光谱法测定砷。结果表明，测定一次回归方程为Y=0．0025X＋0．0004，相关系数r=0．9996。检出限为0．12ug／L，回收率为95．8％-100．3％，相对标准偏差为2．37％。该方法具有快速、准确、灵敏度高等优点，适用于纸巾纸中砷含量的检测。

一种网络不良图像过滤软件框架

网络信息监控技术针对网络中不良信息传播的问题,运用网络数据捕获、流量处理和内容过滤等技术实现对网络信息传播的有效监管。而不良图像过滤软件的架构是互联网信息监控中的一个关键问题。文中针对以BHO技术实现的图像过滤器插件存在的对非IE内核的浏览器无效等缺陷,设计并实现了一种基于Winsock SPI技术的图像过滤软件开发框架。实验表明,该图像过滤软件框架具有良好的普适性和兼容性,并对其它网络信息过滤软件的开发具有一定的借鉴作用。

一种基于NDIS中间层的图像过滤软件研究

为使开发者在操作系统内核模式下处理网络数据,Windows网络驱动程序接口规范(NDIS)提供了标准的开发接口。以NDIS中间层驱动程序为基础,能有效实现个人防火墙等应用。而网络不良图像过滤软件的架构是互联网信息监控中的一个关键问题。本文针对以BHO技术实现的图像过滤器插件存在的对非IE内核的浏览器无效等缺陷,设计并实现了一种基于NDIS中间层技术的图像过滤软件。实验表明,该图像过滤软件具有良好的兼容性,并对其它网络信息过滤软件的开发具有一定的借鉴作用。

市政工程项目信息共享管理机制研究

市政工程是城市基础设施赖以生存的根本,直接关系到人民群众的生产生活。但因施工中不确定因素多,权属复杂,各主管部门信息不对等,制约了市政工程项目的闭合全流程管理。以西安市市政工程项目(前期)信息管理系统为列,介绍了地理信息系统(GIS)应用于市政工程项目管理中,并搭建适当的市政基础信息共享平台,以达到市政工程项目信息共享的目的,解决市政工程项目管理过程中的难题。可为各城市市政行业管理及处理城市突发事件提供一定借鉴。

非典型潮湿天气下江门市区空气质量变化趋势

随着社会经济的迅速发展,大气污染日趋严重,严重影响环境和群众身体健康。本论文采用2014年1月1日至2014年1月4日和2014年1月10日至2014年1月12日江门市空气自动监测站的数据进行综合分析。经研究发现,在潮湿天气下,江门市区空气中的二氧化硫、PM2.5与湿度有显著的相关性。

西安民情大数据地图系统建设和应用思考

随着我国经济社会的快速发展,各种社会风险问题不断凸显,农村问题尤为突出,因此,农村社会治理模式亟待创新.西安市十三次党代会明确提出了'建设民情大数据地图,打造为民服务'升级版''的具体目标.本文从建设民情大数据地图系统的实践出发,结合已建成的西安市地理时空信息云平台,实现对空间大数据、民情大数据等的管理、分析、决策,从而形成'为数据说话、用数据管理、用数据决策'的基层社会治理新机制.

天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株的构建及鉴定

本研究旨在通过敲除部分与天坛株痘苗病毒(vaccinia virus Tiantan strain,VTT)毒力和宿主范围等相关的复制非必需基因,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术,构建多基因缺失VTT弱毒株。人工合成7对重组臂,结合痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP),构建穿梭载体质粒pTC-EGFP、pTA35-EGFP、pTA66-EGFP、pTE-EGFP、pTB-EGFP、pTI-EGFP和pTJ-EGFP。将上述质粒依次与VTT或基因缺失VTT共转/感染BHK细胞,并通过同源重组和荧光蚀斑筛选方法,逐一敲除拟缺失基因片段(TC:TC7L^TK2L;TA35:TA35L;TA66:TA66R;TE:TE3L;TB:TB13R^TB14R;TI:TI4L;TJ:TJ2R)。利用Cre/Loxp系统实现对外源筛选标记的敲除,最终获得天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株TTVAC7,并运用PCR方法对TTVAC7进行鉴定和遗传稳定性检测。结果表明,本研究成功构建了缺失7个目的片段的天坛株痘苗病毒弱毒株TTVAC7,且该弱毒株具有良好的遗传稳定性。

公路地基承载力评价地理信息系统

公路地基由于不同的上部结构形式和基底刚度,公路地基的承载特性与建筑刚性基础有所差异,直接采用建筑规范的地基承载力评价方法确定公路地基承载力特征值不甚合理,不能准确地体现公路地基实际具有的承载能力。通过公路路基、桥梁和涵洞与建筑物在上部结构类型和基础形式上的对比分析,确定了公路路基、桥梁和涵洞各自的地基承载力评价方法,提出了公路工程地基承载力的3级分类体系,构建了公路工程地基承载力评价地理信息系统。该系统利用GIS的空间数据管理和空间数据分析平台,结合我国不同土质大量的实测载荷试验数据和工程性质资料,实现了对我国公路工程地基土(路基和桥涵)承载力的有效评价。

溶瘤腺病毒ATV联合顺铂协同抑制A 549细胞的研究

目的探讨双特异性溶瘤腺病毒ATV与化疗药物顺铂联用对人肺癌细胞A 549治疗的增效减毒作用。方法将构建的溶瘤腺病毒ATV感染A 549细胞后进行Annexin V检测,分析ATV对肿瘤细胞的抑制方式;单用ATV、顺铂以及两者联合作用于人肺癌A 549细胞,采用MTS法检测细胞体外增殖情况,采用划痕试验、Transwell迁移试验和Transwell侵袭试验检测细胞的迁移侵袭情况;构建A 549皮下移植瘤裸鼠模型,单独注射重组腺病毒、顺铂以及重组腺病毒和顺铂联合使用,观察监测肿瘤生长情况,评价溶瘤腺病毒联合顺铂对肿瘤的体内抑制作用。结果双特异性重组腺病毒ATV主要通过诱导A 549细胞凋亡达到对细胞的杀伤;ATV联合顺铂体外杀伤A 549细胞具有一定的剂效和时效关系,且其抑制作用显著强于ATV及顺铂单独使用;ATV联合顺铂作用下,可使A 549细胞迁移侵袭能力降低,且能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长,延长模型小鼠生存期。结论 ATV可诱导肿瘤细胞凋亡,ATV与化疗药物顺铂联用可增强对A549细胞生长及迁移侵袭能力的抑制作用,即具有抑制肺癌细胞A 549的增效减毒作用。

重组痘苗病毒rVTT-JEVE理化特性研究

目的痘苗病毒作为疫苗载体具有接种途径简单、高滴度、低成本等优点,重组痘苗病毒投入使用之前进行理化特性试验,对重组痘苗病毒的生产、运输和保存有一定重要意义。方法将重组痘苗病毒rVTT-JEVE作热、酸、碱、乙醚、氯仿、胰蛋白酶、超声波以及紫外线处理,然后接种到BHK-21细胞上,观察rVTT-JEVE毒价的变化,分析理化因素对rVTT-JEVE的影响。结果在pH3～9范围内,酸碱度变化不会引起rVTT-JEVE毒价的显著变化。rVTT-JEVE经50℃处理60min、30min和60℃处理15min可被灭活；对5%的氯仿敏感；经终浓度0.5%的胰蛋白酶37℃作用1h,病毒毒价降低2个滴度；对25%的乙醚不敏感；经40KHz超声波处理60min和80KHz处理30min即可灭活；30W紫外灯垂直距离10cm照射15min、30cm照射30min即可灭活。结论 rVTT-JEVE耐热、酸、碱、乙醚、氯仿及胰蛋白酶,对超声波、紫外线较敏感。

缺失TA35R基因减毒天坛株痘苗病毒的构建及筛选

通过敲除痘苗病毒天坛株(vaccinia virus tiantan strain,VTT)复制非必需基因TA35R,结合双筛选标记及同源重组技术,构建TA35R基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TA35R-。人工合成含有TA35R重组臂、同向loxp序列、早晚期启动子PE/L、EGFP及酶切位点的穿梭质粒pTA35R-EGFP。pTA35R-EGFP和野生型VTT共转染BHK-21细胞,通过绿色荧光蚀斑筛选,构建缺失TA35R基因且含FGFP基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R--EGFP+。采用Cre/Loxp系统敲除外源筛选标记EGFP,获得缺失TA35R基因的重组痘苗病毒rVTT-TA35R-,利用PCR方法和电子显微镜对其进行鉴定,通过MTT法检测细胞噬性以评价其减毒效果。结果表明,所构建的痘苗病毒弱毒株rVTT-TA35R-完全缺失了TA35R基因和外源筛选标记EGFP,且细胞毒性减弱。

缺失TC7L-TK2L基因减毒天坛株痘苗病毒构建及筛选

目的通过敲除天坛株痘苗病毒(Vaccinia virus Tiantan strain,VTT)的复制非必需基因TC7L-TK2L,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术构建TC7L-TK2L基因缺失的VTT弱毒株rVTT-TC7L--TK2L-。方法人工合成含有痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)的重组臂,构建穿梭质粒pTC7L-TK2L-EGFP,再与VTT共转染BHK-21细胞,通过连续筛选10次,获得含有筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L--EGFP+;利用Cre/loxp系统敲除EGFP,连续筛选10次,获得无筛选标记的重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,用PCR方法对rVTT-TC7L--TK2L-进行鉴定和遗传稳定性检测,用电镜观察病毒形态变化,并通过绘制生长曲线观察病毒在细胞内的复制情况。结果 PCR结果表明,成功构建了重组痘苗病毒rVTT-TC7L--TK2L-,且具有良好的遗传稳定性;电镜观察痘苗病毒缺失TC7L-TK2L基因未影响病毒形态;生长曲线显示敲除TC7L-TK2L基因后病毒毒力显著下降,但不影响病毒的正常复制。结论成功构建了痘苗病毒减毒株rVTT-TC7L--TK2L-,该重组痘苗具有良好的遗传稳定性且毒力减弱。