阿魏酸对CT-26的细胞凋亡和细胞自噬相关通路的影响

为了深入明晰酚酸类物质阿魏酸的具体功能机理,以其对CT-26细胞自噬、凋亡、细胞增殖和迁移为评价手段,考察阿魏酸对细胞生理活性的影响,阐明酚酸类物质阿魏酸具体作用机理,为中草药中有效成分阿魏酸的具体功效提供实验数据和理论依据。研究中采用不同浓度梯度的阿魏酸处理CT-26细胞,考察阿魏酸对CT-26细胞生理活性的影响。在一定浓度范围内,阿魏酸能够抑制CT-26细胞的增殖、提高细胞自噬水平,同时在一定程度上抑制CT-26细胞的迁移能力。进一步的研究表明,阿魏酸通过促进凋亡通路上游的caspase3蛋白剪切为Cleaved caspase3,进而调控凋亡关键蛋白Bcl-2和BCL2-Associated X蛋白(Bax)的比值,最终促进了结肠癌细胞凋亡,以此保护细胞的正常生理活动。阿魏酸可通过促进细胞自噬并调控凋亡通路Bcl-2来抑制细胞活性,进而促进细胞凋亡。研究结果为明确中草药中有效成分阿魏酸的生物活性物质作用提供了实验数据。

通过外源添加芽孢杆菌提升北方地区高温大曲的品质

本研究主要是在高温大曲制作过程中添加贝莱斯芽孢杆菌的强化1号曲、解淀粉芽孢杆菌的强化2号曲和不添加芽孢杆菌的对照曲为研究对象,以期从微生物角度来提高北方地区高温大曲的质量,从而提升酱香型白酒的品质。通过理化指标测定、高通量测序技术、气相色谱-离子迁移谱(GC-IMS)技术手段分析得出:强化2号曲在糖化力、液化力、发酵力、酯化力理化指标与强化1号曲和对照曲存在显著性差异,同时强化1号曲、强化2号曲酸度也有所降低;通过高通量测序及微生物计数结果看强化2号曲的芽孢杆菌数能达到4.2×10^(8)CFU/g、丰度占比为21.68%,其次是强化1号曲芽孢杆菌数为2.3×10^(8)CFU/g、丰度占比为18.92%,而对照曲的芽孢杆菌数为4.4×10^(7)CFU/g、丰度占比为7.48%;GC-IMS三维谱图可知两种强化曲中的风味物质含量和种类显著高于对照曲,且根据指纹图谱从强化2号曲中鉴定出多种特征性吡嗪类物质。由此可见,通过外源添加芽孢杆菌后两种强化大曲在理化指标、微生物指标、挥发性风味物质方面有所改进,进而有效提高了北方地区高温大曲的质量。

新疆葡萄酒中的酚类物质对LO2细胞自噬的影响

为了探究新疆葡萄酒酚类物质对肝细胞自噬的影响,该研究使用体外培养的人正常肝细胞(LO2),通过免疫印迹、实时荧光定量、细胞免疫荧光、流式细胞术等方法观察LO2细胞中微管相关蛋白1A/1B-轻链3(microtubule-associated proteins 1A/1B light chain3,LC3)和螯合体1(sequestosome 1,P62)的水平变化,初步评估新疆葡萄酒中酚类物质对LO2细胞自噬的影响作用。免疫印迹结果发现,橙皮苷、表儿茶素没食子酸酯,可显著提升LO2细胞中LC3蛋白的表达水平,提示橙皮苷和表儿茶素没食子酸酯或对LO2细胞自噬活性有一定影响作用。进一步通过实时荧光定量方法观察橙皮苷和表儿茶素没食子酸酯对LC3和P62蛋白mRNA的影响作用发现,橙皮苷、表儿茶素没食子酸酯处理细胞后,显著上调了LC3蛋白的mRNA水平,同时降低了P62蛋白的mRNA水平;细胞免疫荧光染色显示橙皮苷、表儿茶素没食子酸酯处理LO2细胞后,绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)和红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)标记的LC3蛋白荧光强度增强,提示细胞内形成自噬小体;流式细胞术结果进一步发现,GFP-LC3/RFP-LC3荧光强度比值减小,表明自噬小体成熟。综上所述,橙皮苷、表儿茶素没食子酸酯对LO2细胞自噬活性具有一定的促进作用,但其作用机理尚需要进一步深入研究。

高通量测序分析新疆不同产区葡萄酒对大鼠肠道菌群多样性的影响

将雄性SD大鼠随机分为5组(A1~A5),分别灌胃新疆焉耆盆地、伊犁河谷、天山北麓、吐哈盆地葡萄酒、蒸馏水8周后,收集粪便,采用高通量测序技术分析大鼠肠道菌群变化,探讨不同产区葡萄酒对大鼠肠道菌群的影响。结果表明,各组大鼠肠道菌群具有一定的差异,主要共有优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes)和拟杆菌门(Bacteroidetes),优势菌属为乳杆菌属(Lactobacillus),A1~A4组中主要优势菌门和菌属的相对丰度之和均比A5组显著升高(P<0.05),其中A2组升高幅度最大,其有害菌门变形菌门(Proteobacteria)、脱硫菌门(Desulfobacterota)相对丰度显著降低(P<0.05);有益菌属罗姆布茨菌属(Romboutsia)、艾克蔓菌属(Akkermansia)及乳杆菌属(Lactobacillus)相对丰度显著增加(P<0.05)。结合多级物种差异判别分析,A2组肠乳杆菌(Lactobacillus intestinalis)的富集最具差异性(P<0.05)。说明适量摄入伊犁河谷干红葡萄酒一定程度上能改善肠道菌群。

短肽AKRA(Ala-Lys-Arg-Ala)对酒精性肝损伤保护作用的研究

该研究采用一种短肽AKRA(Ala-Lys-Arg-Ala)分别处理人源肝细胞LO2和酒精性肝损伤小鼠,从体内和体外分别进行验证,研究AKRA是否能够缓解由偶氮二异丁脒盐酸盐(2,2′-azobis-2-methyl-propanimidamide,AAPH)在肝细胞内引起的氧化应激和食用酒精在实验动物体内造成的酒精性肝损伤。取处于对数生长期的LO2细胞,分为正常组和AKRA处理组,采用细胞增殖-毒性检测法(cell counting kit-8,CCK8)测定并计算细胞活力。采用AAPH诱导LO2细胞氧化损伤;然后以不同浓度AKRA处理细胞,检测LO2细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽还原型(glutathione,GSH)活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;通过蛋白免疫印迹(Western blotting,WB)评价氧化、自噬和炎症相关标志性蛋白表达情况;利用食用酒精灌胃小鼠制备酒精性肝损伤病理模型同时,通过腹腔注射高、中、低剂量AKRA注射液,连续30 d,处死小鼠并观察肝组织病理形态学改变;并进行小鼠生理生化和肝脏中氧化相关指标的检测。结果提示,AKRA在0~6.4 mg/mL对LO2细胞增殖无明显影响和毒性作用,细胞活力正常;AKRA能够不同程度改善由AAPH处理引起的CAT、GSH、SOD等抗氧化酶的活性改变,并降低MDA含量;进一步研究发现,AKRA可促进核因子E-2-相关因子(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)与Kelch样ECH关联蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)解离,并进入细胞核,调控下游抗氧化及抗炎蛋白的表达水平;AKRA促进P62蛋白(sequestosome 1)降解,LC3蛋白(light chain 3)生成,从而提高自噬活性。此外,AKRA腹腔注射后,酒精引起的小鼠肝组织细胞变性程度较轻;血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)下降,总胆固醇(total cholesterol,T-cho/TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)水平降低,而高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)水平升高,氧化相关指标CAT、GSH及SOD活性出现不同程度的改善和MDA含量降低。通过该研究可知,短肽AKRA可能通过调控肝细胞抗氧化水平,提高自噬活性及抗炎能力达到缓解肝损伤的目的。

新疆葡萄酒对大鼠肝脏功能及肝细胞自噬的影响

该实验为了探讨新疆葡萄酒对肝脏及肝细胞自噬的影响,将雄性SD大鼠随机分为6组:空白组(1)、酒精组(2)、吐哈盆地干白葡萄酒组(3)、天山北麓干红葡萄酒组(4)、伊犁河谷干红葡萄酒组(5)、焉耆盆地干红葡萄酒组(6),用新疆不同产区葡萄酒灌胃雄性SD大鼠8周后,检测6组大鼠体重变化和肝脏系数、肝脏组织病理形态学变化、血清中谷丙转氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)含量,并通过Western blotting检测肝脏组织中自噬相关蛋白LC3、p62表达水平。结果表明,与空白组相比,3、4、5、6葡萄酒组大鼠体重增长趋势较缓,酒精组大鼠体重增长趋势最缓,与酒精组相比,3、4、5、6葡萄酒组肝脏系数显著降低(P<0.05),肝脏未见明显病变,大鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、AST、ALT、血尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、血肌酐(serum creatinine,SCr)、总蛋白(total protein,TP)、白蛋白(albumin,ALB)、血糖(blood glucose,GLU)呈降低趋势,高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoproteincholesterol,HDL-C)有上升趋势(P>0.05),球蛋白(globulin,GLOB)含量无显著差异,LC3蛋白含量升高,p62蛋白含量降低,且都达到了显著水平(P<0.05)。机体适量摄入葡萄酒一定程度上能降低肝脏系数、调节大鼠体内血清理化指标及肝脏功能、促进肝细胞自噬水平,从而减少酒精对肝脏的损伤,这可能与葡萄酒中含有的酚类物质有关。

甘薯IbCAF1基因的克隆及耐盐性、抗旱性鉴定

CAF1 (CCR4-associated factor 1)基因在植物发育、抗病等方面发挥着重要的作用。本研究根据前期获得的差异表达EST序列,克隆得到甘薯IbCAF1基因。IbCAF1基因的开放阅读框(open reading frame, ORF)长度为846 bp,编码281个氨基酸,分子量为32.13 kD,等电点为4.83。氨基酸序列比对和系统进化树分析表明, IbCAF1与甘薯近缘野生种Ipomoeatriloba(2x)同源蛋白ItlCAF1有较高的同源性,序列一致性为96.8%。IbCAF1基因受到NaCl、PEG、ABA和H_2O_2的诱导表达。利用根癌农杆菌介导法将IbCAF1基因转入烟草,过表达IbCAF1基因显著提高了转基因烟草植株的耐盐性和抗旱性。在200 mmol L^(-1) NaCl和10%PEG-6000的胁迫下, IbCAF1基因的过表达显著上调了转基因烟草植株中活性氧清除系统和脯氨酸合成相关基因的表达,增加了SOD活性、POD活性、脯氨酸含量,降低了H_2O_2含量和丙二醛含量。表明IbCAF1基因能够提高转基因烟草植株的耐盐性和抗旱性。本研究为后续甘薯IbCAF1基因耐盐抗旱基因工程研究奠定了基础。

绵柔型白酒对小鼠酒精性肝损伤的影响作用研究

将30只C57BL/6J小鼠随机均分为食用酒精组、绵柔型酒样1#处理组、绵柔型酒样2#处理组,分别灌胃相同剂量的52%vol食用酒精、52%vol绵柔型酒样1#、52%vol绵柔型酒样2#。与食用酒精组相比,绵柔型酒样组小鼠谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)降低,总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)降低,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)升高;细胞质胞浆内核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白减少,总Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)减少,导致过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)不同程度升高,丙二醛(MDA)降低;炎症相关蛋白诱导型一氧化氮合酶(INOS)、环氧合酶-2(COX-2)、核因子κB(NF-κB)均不同程度降低。相较于食用酒精,绵柔型酒样1#和绵柔型酒样2#一定程度上减轻了实验小鼠肝损伤程度,可能是其中的活性物质起到了关键性作用。

短肽(Pro-His-Pro,PHP)预防酒精性肝损伤

采用脯氨酸-组氨酸-脯氨酸(Pro-His-Pro,PHP)分别处理人源肝细胞LO2和酒精性肝损伤小鼠,研究PHP是否能够缓解由肝细胞氧化损伤和食用酒精对小鼠造成的肝损伤。构建肝细胞氧化应激模型,通过不同浓度PHP处理后,检测抗氧化酶相关含量,评价氧化相关蛋白情况。构建小鼠酒精性肝损伤模型,观察肝组织病理形态学改变及生理生化和氧化相关指标。与偶氮二异丁脒盐酸盐(2,2′-azobis-2-methyl-propanimidamide,AAPH)处理组相比较,不同浓度的PHP处理组会导致抗氧化酶升高;在氧化通路方面,细胞核内核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)蛋白增加,胞质Kelch ECH相关蛋白1(Kelch like ECH associated protein 1,Keap1)蛋白增多。与食用酒精组相比较,PHP处理组小鼠肝组织细胞变性程度较轻,相关指标均恢复正常,抗氧化酶氧化升高。短肽PHP可以通过调控氧化相关指标和氧化通路关键蛋白Nrf2来达到预防酒精性肝损伤的目的。

4-甲基愈创木酚对酒精性肝损伤小鼠的保护作用

研究4-甲基愈创木酚对酒精性肝损伤小鼠的保护作用。将50只小鼠随机分为5组,分别为空白组、模型组及4-甲基愈创木酚低、中、高3个剂量组,经口灌胃按照分组分别给予等量的生理盐水、50%食用酒精和低、中、高剂量浓度的4-甲基愈创木酚,实验持续8周,末次灌胃后各组实验动物隔夜禁食12 h;12 h后从眼球采血,测定小鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白胆固醇(high density liptein cholesterol,HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)浓度及谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)的活力;肝脏组织匀浆中总超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活力、还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)浓度、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力、丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度。4-甲基愈创木酚低、中、高剂量组小鼠血清中TC、TG、LDL-C浓度均低于模型组,AST、ALT活力均低于模型组,HDL-C浓度高于模型组;4-甲基愈创木酚低、中、高剂量组小鼠肝组织匀浆中SOD活力、CAT活力、GSH-Px活力和GSH浓度均高于模型组,而MDA浓度均低于模型组(P<0.05),且与4-甲基愈创木酚浓度有关。4-甲基愈创木酚对酒精性肝损伤具有保护作用且与剂量有关。4-甲基愈创木酚通过降低肝组织的损伤、减少脂质过氧化,提高机体抗氧化能力,防止氧化应激的发生,改善酒精对小鼠造成的脂质代谢紊乱来发挥护肝作用。

酱香型白酒饮后舒适度与主要风味成分相关性分析

酱香型白酒因其独有的酱香风味闻名于世,随着生活水平的提高,“适量饮酒,有益健康”已经达成了共识,因此提升饮酒舒适度是当前研究的重点。本研究通过招募志愿者,设计、收集问卷,对不同酱香型白酒中的风味成分进行定量并与问卷结合分析相关性。结果显示,酱香型白酒中适当含量的醇类和酯类不会对白酒饮后舒适度造成很大影响,较高含量的高级醇如正己醇、正丁醇会降低饮后舒适度。正丁醇、正丙醇、正己醇等可作为影响饮后舒适度的负向因子,四甲基吡嗪、3-羟基-2-丁酮、丙酮等可作为正向因子。

萜烯类化合物基于细胞自噬的初步探究

通过采用不同浓度的萜烯类化合物处理细胞,探究青稞酒中所含有的7种萜烯类化合物是否会对细胞自噬产生影响。LO2细胞设立对照组和不同质量浓度萜烯类化合物处理组;采用细胞增殖检测试剂盒8法检测细胞存活率;采用蛋白免疫印迹法检测LO2细胞中微管相关蛋白轻链3(microtubule-associated proteins 1A/1B light chain 3,LC3)的表达情况;采用实时荧光定量(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测LC3和P62蛋白的mRNA表达水平;采用荧光免疫法观察LC3和P62/SQSTM1蛋白的表达水平。结果表明,在营养及饥饿条件下,α-蒎烯处理后的LC3蛋白表达水平和mRNA表达水平呈浓度依赖性上调,P62的mRNA表达水平降低。其余6种萜烯类化合物:香茅醇、β-石竹烯、月桂烯、罗勒烯、柠檬烯、β-紫罗酮对细胞自噬均无显著影响。在LO2细胞中,萜烯类化合物α-蒎烯或具有促进细胞自噬的作用,其具体作用机理仍需进行深入研究。