在大肠杆菌表达体系中以包涵体形式存在的真核生物蛋白质的分离、复性和二硫键的形成

在大肠杆菌中表达的含有二硫键真核生物的重组蛋白，往往以包涵体的形式存在。存在于包涵体的重组蛋白，因分子内及分子间二硫键的错配，而常常导致重组蛋白无生物活性。着重介绍了一些从包涵体中分离有正确配对的二硫键重组蛋白新的技术条件，总结了含有二硫键真核生物重组蛋白的不同分离和复性步聚及方法，并对重组蛋白在体外折叠的机理进行了探讨．

小C肽人胰岛素原类似物(B-Arg-Arg-A)和人胰岛素原(B-C-A)A、B链重组条件的研究

目的 :获得更佳的变复性条件和提高人胰岛素原的重组率。方法 :采用特有的重组方法 ,将小C肽人胰岛素原类似物 (B Arg Arg A)与人胰岛素原 (B C A)进行重组条件的比较。 结果 :发现二者在 pH10 .6左右处重组率达到最大 ,且在相同的条件下B Arg Arg A蛋白质的重组率 (94% )较B C A蛋白质 (82 % )的高。结论 :进一步验证了“胰岛素的A、B链含有足够使二硫键正确配对的结构信息”的论点。

去B链羧端三肽人胰岛素的分离纯化及其性质研究

将去Ｂ链羧端三肽人胰岛素原基因克隆到表达质粒ｐＢＶ２２０上，在大肠杆菌系统中经温度诱导表达，表达产物占细胞总蛋白量的１２％，表达产物经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ的酶促转化等步骤，可得到去Ｂ链羧端三肽人胰岛素，其纯度达９３％，其氨基酸组成与预期值相符，但其受体结合活性仅是标准猪胰岛素的４５％．

教师在生物化学实验教学中的作用探讨

在生物化学实验教学中教师必须转变观念，与时俱进，钻研业务，加强师德修养，树立为人师表的良好形象。通过传授实验技术为学生今后一生的发展奠定基础，使教师成为学生的良师益友。

B_(23)-Gly-B_(24)人胰岛素的分离纯化及性质研究

为了研究胰岛素B链羧端的自由度对于胰岛素与受体相互作用的影响。在人胰岛素B链羧端（转角区回折点B23与B24之间插入一个Gly。B23-Gly-B24人胰岛素原在大肠杆菌的表达产物占细胞总蛋白量的28％,B23-Gly-B24人胰岛素的受体活性分别是标准猪胰岛素的122％和人胰岛素的111％。说明以较高的受体结合活性获得了高纯度的B23-Gly-B24人胰岛素。

从基因工程小C肽人胰岛素原类似物（B－R2－A）制备人胰岛素

以融合蛋白的形式，在Ｅ．ｃｏｌｉ中经温度诱导表达了小Ｃ肽人胰岛素原类似物（Ｂ－Ｒ２－Ａ）．表达的融合蛋白可占细胞总蛋白６８％．经磺酸解，及初步分离Ｓ－磺酸型融合蛋白，再经ＣＮＢｒ裂解后，进行还原重组，ＨＰＬＣ分离纯化等步骤，每升发酵液可得到Ｂ－Ｒ２－Ａ约５０ｍｇ。经酶促转化及ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５纯化，得重组人胰岛素约２０ｍｇ，其氨基酸组成与人胰岛素相同，并具有与猪胰岛素相同的生物活性．

B_(19)-Gly-B_(20)人胰岛素的分离纯化及性质研究

目的研究胰岛素B链羧端的自由度对于胰岛素与受体相互作用的影响。方法在人胰岛素B链羧端 β转角区回折点B1 9与B2 0 之间插入一个Gly。结果B1 9 Gly B2 0 人胰岛素原的表达产物占细胞总蛋白量的 3 0 % ,B1 9 Gly B2 0 人胰岛素的受体活性是标准猪胰岛素的 12 1%。结论以较高的受体结合活性获得了高纯度的B1 9 Gly B2 0 人胰岛素。

去B链羧端七肽人胰岛素的分离纯化及性质研究

在大肠杆菌温度诱导体系中以非融合方式进行去Ｂ链羧端七肽人胰岛素原基因的表达，获得去Ｂ链羧端七肽人胰岛素原，表达产物占细胞总蛋白量的１３％，表达产物经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离及胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ的酶促转化等步骤，可得到纯度达９４％以上的去Ｂ链羧端七肽人胰岛素，其氨基酸组成与预期值相符，受体活性是标准猪胰岛素的１％．

肝素钠提取工艺的探讨

本文阐述通过对传统方法的改进，引进了一种新的肝素钠提取工艺，同时对副产物的综合利用作了进一步的探讨．

人胰岛素突变体的分离纯化及性质研究

将人胰岛素原突变体（Ａ４Ｇｌｕ→Ｌｅｕ）基因重组到ｐＢＶ２２０表达载体上，在Ｅ．ｃｏｌｉ系统中得到高效表达，表达产物经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ的酶促转化等步骤，可得到纯的人胰岛素突变体（Ａ４Ｇｌｕ→Ｌｅｕ），其氨基酸组成与预期值相符，其受体结合活性及生物活性与标准猪胰岛素的基本相同。

用重组DNA技术获得高疗效的胰岛素类似物制剂

尽管胰岛素是治疗胰岛素依赖型糖尿病的特效药物,但在生理条件下它却很难发挥象体内分泌胰岛素的作用,即便用大家公认的速效型和长效型制剂也是如此。采用重组DNA技术,可按合理的设计方案,制备出具有与常规胰岛素制剂不同的药物动力学和药物学性质的胰岛素类似物产生高的治疗效果,使人们多年的梦想变为现实。这些类似物包括在注射部位吸收很慢的长效胰岛素。从胰岛素的临床结果分析,我们可以断言,下一代胰岛素制剂将是通过工业生物技术精心合理设计,由重组DNA技术获得的高疗效胰岛素类似物制剂。

紫外分光光度法测定动物血清IgG含量方法的研究

目的建立一种操作简便,快速,灵敏度高,重复性好的测定动物血清IgG制品含量的方法。方法研究紫外分光光度法测定动物血清IgG含量的可行性,并将其与免疫单扩散法进行方法学的比较。结果相比免疫单扩散法,紫外分光光度法得到的结果稳定,线性相当好。结论紫外分光光度法可用于测定动物血清IgG制品含量,该测定方法数据稳定,线性关系好,准确性高,操作简便。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳染色方法

目的建立一种操作简便、快速、灵敏度高、无毒的蛋白质电泳染色方法。方法利用考马斯亮蓝G-250(CBB G-250)在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后对蛋白质条带进行染色,对不同染色条件进行探讨,并与考马斯亮蓝R-250(CBB R-250)染色法进行比较。结果 CBB G-250染色法试剂无毒,背景浅,经改良其灵敏度与CBB R-250染色法相当,达到0.1～0.5μg。结论 CBB G-250染色方法简单经济,灵敏度能够满足一般要求,适用于蛋白质电泳结果的快速分析。

生物化学实验教学改革实践与思考

根据生物化学实验课程特点,对实验教学方法和考核方法进行了改革,变教学工具为开启新知识大门的钥匙,变传授知识为重点培养学生的创新精神,重点强化了实验技能和综合能力的训练,有效调动了学生的学习兴趣和学习热情,明显提高了学生的综合实验能力。

凝胶过滤分离蛋白质实验条件的研究

目的研究凝胶过滤各影响因素对蛋白质分离的影响。方法应用一般色谱方法,选择葡聚糖凝胶Sephadex G-75和几种蛋白质对装柱、洗脱液、流速和操作压等条件进行试验。结果选用不同浓度的凝胶悬液进行装柱,不同离子成分、pH的洗脱液,不同流速和操作压对几种蛋白质进行色谱分离,得到不同的结果。结论凝胶悬液较稀利于装柱,洗脱液的离子成分不直接影响分离效果,而洗脱液的pH对几种蛋白质分离产生明显影响,酸性条件下分离的效果好,适当的流速和操作压有利于提高色谱柱的分辨率,保证色谱柱的反复正常使用。

基因拷贝数分析的研究

基因拷贝数分析的研究王瑛（中国科学院动物研究所，北京，１０００８０）陈来同（北京大学生命科学学院，北京，１００８７１）关键词基因拷贝数；单倍体基因组；α１－抗胰蛋白酶基因；大鼠ＲＡＬＲＳ－１重复序列中图分类号Ｑ５７８基因拷贝数（ｃｏｐｙｎｕｍｂｅｒ）...

离子交换层析分离核苷酸的实验方法

对传统的离子交换层析分离单核苷酸实验方法进行改革和创新。以强碱型阴离子交换树脂、采用梯度洗脱和阶段洗脱对酵母RNA水解液进行分离,利用标准核苷酸的参数确定层析峰的核苷酸种类。不但可以使学生全面掌握离子交换层析技术,而且经过对标准核苷酸性质的研究及核苷酸的鉴定,还可将原有实验内容从一个简单的分离纯化实验提升为研究性实验,从而有效调动了学生的学习兴趣和学习热情,明显提高了学生的综合实验能力。

人胰岛素原类似物（B－Arg－Arg－A）基因的构建和表达

用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法将Ｃ肽为６个氨基酸残基的胰岛素原类似物基因删除突变成Ｃ肽仅为２个精氨酸残基的胰岛素原类似物（ＢＡｒｇ－Ａｒｇ－Ａ）基因，即把ｐＵＣ１８ＢＣ＇Ａ改建为ｐＵＣ１８ＢＲ＿２Ａ。再将ｐＵＣ１８ＢＲ＿２Ａ与ｐＪＧ１０５重组为表达质粒ｐＪＧ１０７，使Ｂ－Ａｒｇ－Ａｒｇ－Ａ与ｐＪＧ１０５编码的一种多肽构成融合蛋白在大肠杆菌体系中表达。融合蛋白占细菌蛋白总量的５８％。表达产物具有人胰岛素放射免疫活性。

牦犀皮胶改善缺铁型贫血的研究

目的观察和检测服用牦犀皮胶和安慰剂30 d前后人体各项生化指标的变化。方法采用保健食品管理办法(《中华人民共和国卫生部第46号令》)中提供的实验方法。结果试验组血色素平均上升12.36 g/L,红细胞游离原卟啉平均降低0.42μmol/L,血清铁蛋白平均上升9.71μg/L,改善贫血功效达84.5%;对照组变化不明显。两组参与试验者在试验前后各项检测指标都在正常范围。结论牦牛皮胶对贫血试食者体质有改善作用,并且无不良反应。

去B链羧端三肽人胰岛素原的基因构建和表达

用改进的寡核苷酸诱导突变法将人胰岛素原基因（ＢＣＡ）删除编码Ｂ链羧端三肽（２８～３０残基）的碱基片段，得到去Ｂ链羧端三肽胰岛素原的基因（Ｂ￣（－３）ＣＡ）。为了便于表达产物的蛋白质后加工，又用ＰＣＲ的方法在Ｂ链Ｎ端起始Ｍｅｔ与Ｐｈｅ密码子之间增加了编码Ｌｙｓ的３个碱基，得到改造后基因ＬＢ￣（－３）ＣＡ。将ＬＢ￣（－３）ＣＡ克隆到表达质粒ｐＢＶ２２０上，在大肠杆菌系统中热诱导表达，表达率为１２％。表达产物经蛋白质后加工，得到的去Ｂ链羧端三肽人胰岛素（ＤＴＥＩＢ２８～３０人胰岛素）其受体活性和放免活性分别是猪胰岛素的４５％和４９％。